Метод бумажных дисков
Взвесь изучаемой культуры засевают «газоном». Засеянные чашки подсушивают 30-40 минут при комнатной температуре. Затем на поверхность засеянного агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков. Содержание препарата определяется исходя из терапевтических концентраций каждого антибиотика и средних значений МПК для патогенных бактерий. Название препарата и его количество обозначено на каждом диске. Диски накладывают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Одну чашку можно использовать для изучения чувствительности одного штамма к 4-5 антибиотикам.
Засеянные чашки с нанесёнными на них дисками помещают в термостат при 370С на 18-24 ч. Чашки ставят вверх дном, чтобы избежать попадания конденсационной воды на поверхность посевов (рис. 1).
Рисунок - 1. Определение антибиотикочувствительности диско-диффузионным методом.
Учет результатов проводят по феномену задержки роста вокруг диска. Диаметр зон задержки роста микробов вокруг дисков определяют с помощью линейки для миллиметровой бумаги, включая диаметр для самого диска. Размеры зон, полученных в опыте, сравнивают с размерами зон задержки роста указанных в инструкциях, прилагаемых к дискам. В зависимости от зоны задержки роста микроорганизмов их относят к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным (таблица 4).
Метод дисков имеет ряд ограничений:
- метод дисков не может быть использован для определения чувствительности к антибиотикам медленно растущих бактерий (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Brucella spp. и др.);
- метод дисков не дает надежных результатов при определении чувствительности бактерий к препаратам, плохо диффундирующим в агар (полимиксин, ристомицин);
- в 30 % случаев чувствительность in vitro не соответствует таковой in vivo.
Таблица 4. - Интерпретация результатов определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков (на среде АГВ)
| Антибиотик | Диаметр зоны задержки роста (мм) | ||
| Устой- чивые (R) | Промежу- точные (I) | Чувстви- тельные (S) | |
| Пенициллины Бензилпенициллин: · при испытании стафилококков; · при испытании других бактерий. | ≤20 ≤10 | 21 - 28 11-16 | ≥29 ≥17 |
| Ампициллин: · при испытании стафилококков; · при испытании грамотрицательных бактерий и энтерококков. | ≤20 ≤9 | 21 - 28 10 - 13 | ≥29 ≥14 |
| Карбенициллин (25 мкг) Карбенициллин (100 мкг) при испытании Pseudomonas aeruginosa | ≤14 ≤11 | 15 – 18 12 - 14 | ≥19 ≥15 |
| Метициллин | ≤13 | 14 - 18 | ≥19 |
| Оксациллин (10 мкг) | ≤15 | 16 - 19 | ≥20 |
| Азлоциллин (для Pseudomonas aeruginosa) | ≤13 | 14 - 16 | ≥16 |
| Пиперрациллин (для Pseudomonas aeruginosa) | ≤17 | - | ≥18 |
| Азтреонам | ≤15 | 16 - 21 | ≥22 |
| Цефалоспорины Цефалотин Цефазолин Цефуроксим Цефокситин Цефотаксим Цефтриаксон Цефоперазон Цефтазидим Цефалексин Цефаклор Цефиксим Цефепим* | ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤15 ≤14 | 15 – 18 15 – 18 15 – 18 15 – 18 15 – 20 15 – 20 15 – 18 15 – 17 15 – 18 15 – 18 15 – 19 15 – 17 | ≥19 ≥19 ≥19 ≥19 ≥21 ≥21 ≥19 ≥18 ≥19 ≥19 ≥20 ≥18 |
| Новые бета-лактамы Имипенем* Меропенем* | ≤13 ≤13 | 14 – 15 14 - 15 | ≥16 ≥16 |
| Хинолоны Ципрофлоксацин Офлоксацин Налидиксовая кислота | ≤15 ≤12 ≤12 | 16 - 20 13 – 16 13 - 17 | ≥21 ≥17 ≥18 |
| Аминогликозиды Стрептомицин Канамицин Гентамицин Сизомицин Тобрамицин Амикацин Нетилмицин | ≤16 ≤14 ≤15 ≤15 ≤14 ≤14 ≤12 | 17 - 19 15 - 18 - - - 15 - 16 13 - 14 | ≥20 ≥19 ≥16 ≥16 ≥15 ≥17 ≥15 |
| Тетрациклины, макролиды, линкозамиды Тетрациклин Доксициклин Эритромицин Азитромицин Рокситромицин* Кларитромицин* Линкомицин Клиндамицин Олеандомицин | ≤16 ≤15 ≤17 ≤13 ≤14 ≤13 ≤19 ≤14 ≤16 | 17 – 20 16 - 19 18 – 21 14 - 17 15 - 18 14 - 17 20 - 23 15 – 20 17 - 20 | ≥22 ≥20 ≥22 ≥18 ≥19 ≥18 ≥24 ≥21 ≥21 |
| Антибиотики других групп Хлорамфеникол (левомецитин) Фузидиевая кислота Рифампицин Полимиксин Ванкомицин: · для стафилококков; · для энтерококков. Ристомицин Фурадонин Фурагин | ≤15 ≤16 ≤12 ≤11 ≤11 ≤14 ≤9 ≤15 ≤15 | 16 - 18 17 –20 13 – 15 12 - 14 - 15 – 16 10 – 11 16 – 18 16 - 18 | ≥19 ≥21 ≥16 ≥15 ≥12 ≥17 ≥12 ≥19 ≥19 |
*Предварительные данные
Метод лунок (исходный метод)
Готовят чашки Петри и заполняют их питательной средой, слоем 4-5 мм. После застывания агар подсушивают в термостате при 370С в течение 20 минут. Взвесь изучаемой культуры засевают «газоном», излишки микробной взвеси удаляют и еще раз подсушивают в термостате. Затем в агаре пробивают лунки и в каждую лунку вносят по 0,1 мл раствора исследуемого антибиотика. После инкубации в термостате учитывают активность, измеряя диаметр зоны подавления роста для каждого антибиотика.
Дата добавления: 2017-03-29; просмотров: 2406;