ПРАВИЛА ПОЛЬЗОВАНИЯ ФАРМАКОПЕЙНЫМИ СТАТЬЯМИ 61 страница

Раствор сравнения. 0,5 мл испытуемого раствора разбавляют ПФ А до 50 мл.

Раствор для проверки пригодности системы. 0,02 г стандартного образца лизиноприла дигидрата для проверки пригодности (стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в ПФ А и разбавляют ПФ А до 10 мл.

Хроматографические условия

Колонка - 25 x 0,46 см с октадецилсилил силикагелем (C18),

3 мкм;

Температура колонки - 50 град. C;

Скорость потока - 1,8 мл/мин.;

Детектор - спектрофотометрический, 210 нм;

Объем пробы - 50 мкл.

Градиентный режим

┌────────────────┬───────────────┬───────────────┐

│ Время(мин.) │ ПФ А (%) │ ПФ Б (%) │

├────────────────┼───────────────┼───────────────┤

│ 0-35 │ 100 => 70 │ 0 => 30 │

├────────────────┼───────────────┼───────────────┤

│ 35-45 │ 70 │ 30 │

├────────────────┼───────────────┼───────────────┤

│ 45-50 │ 70 => 100 │ 30 => 0 │

├────────────────┼───────────────┼───────────────┤

│ 50-0 │ 100 │ 0 │

└────────────────┴───────────────┴───────────────┘

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Хроматограмма должна соответствовать хроматограмме, приложенной к стандартному образцу лизиноприла дигидрата для проверки пригодности. Пик примеси A и пик примеси E должны наблюдаться с двух сторон от пика лизиноприла. Измеряют высоты пиков примеси A и примеси E от уровня нулевой линии (соответственно A1 и A2), а также высоты нижней точки кривой, разделяющей пики этих примесей и пик лизиноприла (соответственно B1 и B2).

Тест выдерживает испытание, если величины A1 и A2 не менее, чем в 9 раз больше величин B1 и B2 соответственно.

При необходимости при помощи 85% фосфорной кислоты корректируют pH подвижной фазы до 4,5 и повторяют проверку. С некоторыми колонками может потребоваться дальнейшая коррекция pH до 4,0 для достижения удовлетворительного разделения пиков примеси A, лизиноприла и примеси E. Если при этом пики примесей C и D сдвигаются в область, где интегрирование становится трудным, увеличивают содержание подвижной фазы Б от 30 до 40% в интервале времени от 35 до 45 мин. и поддерживают это соотношение фаз в течение следующих 10 мин. Возвращают содержание подвижной фазы А до 100% в течение следующих 10 мин. до следующего ввода пробы в хроматограф.

Хроматографируют испытуемый раствор и раствор сравнения.

На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика любой примеси должна быть не более 0,3 от площади пика лизиноприла на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%).

Суммарная площадь всех пиков примесей на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более половины площади пика лизиноприла на хроматограмме раствора сравнения (0,5%).

При оценке содержания примесей не учитывают пик растворителя и пики, появляющиеся в первые 3 мин.

Примесь A - (2RS)-2-амино-4-фенилбутановая кислота;

Примесь C - (2S)-2-[(3S,8aS)-3-(4-аминобутил)-1,4-диоксогексагидро-

пирроло[1,2-альфа]пиразин-2(1H)-ил]-4-фенилбутановая

кислота (S,S,S-дикетопиперазин);

Примесь D - (2S)2-[(3S,8aR)-3-(4-аминобутил)-1,4-диоксогексагидро-

пирроло[1,2-альфа]пиразин-2(1H)-ил]-4-фенилбутановая

кислота (R,S,S-дикетопиперазин);

Примесь Е - (2S)-1-[(2S)-6-амино-2-[[(1R)-1-карбокси-3-фенилпропил]

-амино]гексаноил]пирол-2-карбоновая кислота (лизиноприл

R,S,S-изомер).

Вода. Не менее 8,0% и не более 9,5%. Определение проводят методом К.Фишера из точной навески около 0,25 г субстанции.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г субстанции (точная навеска) не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,35 г (точная навеска) субстанции растворяют в 50 мл воды и титруют 0,1 М раствором натрия гидроксида. Конечную точку титрования определяют потенциометрически.

1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида соответствует 40,55 мг C21H31N3O5.

Хранение. В сухом, защищенном от света месте.

МАГНИЯ СУЛЬФАТ (ФС 42-0253-07)

Магния сульфат, гептагидрат

MgSO4 x 7H2O М.м. 246,48

Содержит не менее 99,0% MgSO4 x 7H2O.

Описание. Белый кристаллический порошок или бесцветные призматические кристаллы.

Растворимость. Легко растворим в воде, очень легко растворим в кипящей воде, практически нерастворим в спирте 96%.

Подлинность. Препарат дает характерные реакции на магний и сульфаты.

Прозрачность раствора. 2 г субстанции растворяют в воде и разбавляют водой до 20 мл. Полученный раствор должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B9.

Кислотность или щелочность. К 5 мл раствора, полученного в испытании на Прозрачность раствора, прибавляют 5 мл воды и 0,05 мл 1% раствора фенолфталеина; раствор должен быть бесцветным. Розовое окрашивание должно появляться от прибавления не более 0,1 мл 0,01 М раствора натрия гидроксида.

Хлориды. К 5 мл раствора, полученного в испытании на Прозрачность раствора, прибавляют 5 мл воды. Раствор должен выдерживать испытание на хлориды (не более 0,004% в субстанции).

Тяжелые металлы. 10 мл раствора, полученного в испытании на Прозрачность раствора, должны выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,0005% в субстанции).

Железо. Раствор 1,5 г субстанции в 10 мл воды должен выдерживать испытание на железо (не более 0,002% в субстанции).

Марганец. 1,25 г субстанции растворяют в 5 мл воды, прибавляют 0,5 мл серной кислоты концентрированной, 0,2 мл 0,1 М раствора серебра нитрата и нагревают до кипения. Прибавляют 2 мл 20% раствора аммония персульфата и снова нагревают до кипения.

Проводят контрольный опыт с 5 мл воды и теми же реактивами.

Оба раствора охлаждают и переносят в одинаковые пробирки. В пробирку с контрольным опытом прибавляют из микробюретки 0,01 М раствор калия перманганата до тех пор, пока окраска не сравняется с окраской испытуемого раствора. Сравнение окрасок проводят на белом фоне по оси пробирок.

1 мл 0,01 М раствора калия перманганата соответствует 0,11 мг марганца, которого в субстанции должно быть не более 0,004%.

Препарат, предназначенный для приготовления стерильных лекарственных форм, не должен содержать марганца.

Мышьяк. 0,25 г субстанции должны выдерживать испытание на мышьяк (не более 0,0002% в субстанции).

Потеря в массе при прокаливании. Около 1 г (точная навеска) субстанции сушат в течение 2,5 ч при температуре от 100 до 105 град. C, а затем прокаливают при температуре красного каления до постоянной массы. Потеря в массе должна быть не менее 48,0 и не более 52,0%.

Бактериальные эндотоксины. Не более 0,07 ЕЭ на 1 мг субстанции.

Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции (концентрация - 250 мг/мл), а затем разводят его не менее чем в 100 раз.

Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовления инъекционных лекарственных форм.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 15 г субстанции (точная навеска) растворяют в 50 мл воды, прибавляют 5 мл аммиачного буферного раствора и титруют при энергичном перемешивании 0,05 М раствором натрия эдетата до появления синего окрашивания (индикатор - кислотный хром черный специальный).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,05 М раствора натрия эдетата соответствует 12,32 мг MgSO4 x 7H2O.

Хранение. В хорошо укупоренной таре.

МЕЛОКСИКАМ (ФС 42-0254-07)

4-Гидрокси-2-метил-N-(5-метилтиазол-2-ил)-2H-1,2-бензотиазин-3-карбоксамид-1,1-диоксид

C14H13N3O4S2 М.м. 351,41

Содержит не менее 99,0% C14H13N3O4S2 в пересчете на сухое вещество.

Описание. Бледно-желтый порошок.

Растворимость. Растворим в диметилформамиде, мало растворим в ацетоне, очень мало растворим в спирте 96% и метаноле, практически нерастворим в воде.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать спектру стандартного образца мелоксикама.

Спектр поглощения 0,0015% раствора субстанции в метаноле в области от 240 до 450 нм должен иметь максимум при 354 нм.

Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Подвижная фаза А (ПФ А). 1 г калия фосфата однозамещенного растворяют в 1000 мл воды и доводят pH раствора раствором натрия гидроксида до 6,0 +/- 0,05.

Подвижная фаза Б (ПФ Б). Метанол.

0,4 М раствор натрия гидроксида. 40 мл 1 М раствора натрия гидроксида разводят водой до 100 мл.

Растворитель. Смешивают 30 мл 0,4 М раствора натрия гидроксида, 300 мл воды и 200 мл метанола.

Испытуемый раствор. 0,2 г субстанции растворяют в 50 мл растворителя. 5 мл полученного раствора разбавляют смесью метанол - вода (2:3) до 10 мл.

Раствор сравнения. 1 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью метанол - вода (2:3) до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности системы. 0,1 г стандартной смеси мелоксикама и примесей (Meloxicam impurity standard BPCRS) растворяют в 25 мл растворителя. 5 мл полученного раствора разбавляют смесью метанол - вода (2:3) до 10 мл.

Хроматографические условия

Колонка - 15 x 0,46 см с октадецилсилил силикагелем (C18),

5 мкм;

ПФ - градиентное элюирование:

┌─────────────────┬──────────────┬───────────────┐

│ Время, мин. │ ПФ А, % │ ПФ Б, % │

├─────────────────┼──────────────┼───────────────┤

│ 0 │ 60 │ 40 │

├─────────────────┼──────────────┼───────────────┤

│ 2,5 │ 60 │ 40 │

├─────────────────┼──────────────┼───────────────┤

│ 12 │ 30 │ 70 │

└─────────────────┴──────────────┴───────────────┘

Скорость потока - 1,0 мл/мин.;

Детектор - спектрофотометрический, 260 нм и 350 нм;

Объем пробы - 10 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Полученная хроматограмма по виду и параметрам разделения должна соответствовать хроматограмме, прилагаемой к образцу стандартной смеси.

Хроматографируют раствор сравнения (350 нм) и испытуемый раствор (260 нм и 350 нм).

Площадь пика примеси А и примеси С на хроматограмме испытуемого раствора при 350 нм должна быть не более половины площади пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения при 350 нм (не более 0,1% примеси А с учетом относительного фактора отклика, равным 0,5 и не более 0,05% примеси С); площадь пика примеси В на хроматограмме испытуемого раствора при 260 нм должна быть не более площади пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения при 350 нм (не более 0,1%); площадь пика любой неидентифицированной примеси на хроматограмме испытуемого раствора при длине волны наибольшего отклика (260 нм или 350 нм) должна быть не более площади пика мелоксикама на хроматограмме раствора сравнения при 350 нм (не более 0,1%). Суммарное содержание примесей не должно превышать 0,3%.

Потеря в массе при высушивании. Около 1 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,25 г (точная навеска) субстанции растворяют в смеси 50 мл уксусной кислоты ледяной и 5 мл муравьиной кислоты безводной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 35,14 мг C14H13N3O4S2.

Хранение. В плотно закрытой упаковке.

МЕЛЬДОНИЙ (ФС 42-0255-07)

3-(2,2,2-Триметилгидразиний)пропионат, дигидрат

C6H14N2O2 x 2H2O М.м. 182,22

Содержит не менее 99,0% и не более 101,0% C6H14N2O2 в пересчете на безводное вещество.

Описание. Бесцветные или белые кристаллы, белый или почти белый кристаллический порошок со слабым запахом; очень гигроскопичен.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, метаноле, легко растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать рисунку спектра мельдония (Приложение 1).

0,05 г субстанции растворяют в 3 мл воды, прибавляют 1 мл реактива (непосредственно перед использованием смешивают равные объемы растворов I и II реактива Драгендорфа и уксусной кислоты ледяной) и перемешивают; образуется оранжевый осадок.

Температура плавления. От 85 до 90 град. C (метод 1).

Прозрачность раствора. Раствор 2 г субстанции в 10 мл воды должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B9.

pH. От 7,5 до 8,3 (10% раствор) для субстанции, предназначенной для приготовления инъекционных лекарственных форм.

От 7,5 до 9,0 (10% раствор) для субстанции, предназначенной для приготовления пероральных лекарственных форм.

Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ/МС/МС.

Подвижная фаза А (ПФ А). Смесь вода - гептафтормасляная кислота (1000:1).

Подвижная фаза Б (ПФ Б). Смесь метанол - гептафтормасляная кислота (1000:1).

Испытуемый раствор. Около 0,01 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в ПФ А, доводят объем раствора ПФ А до метки и перемешивают.

Раствор сравнения. Около 0,01 г (точная навеска) стандартного образца каждой примеси (примесь А - триметиламмония бромид; примесь Б - 1,1,1-триметилгидразина бромид; примесь В - 3-гидрокси-1,1-диметил-4,5-дигидро-1H-пиразолий-1-бетаина гидрат; примесь Г - 3-(2,2,2-триметилгидразиний)метилпропионата бромид; примесь Д - 3-(2,2,2-триметилгидразиний)изопропилпропионата бромид и примесь Е - 3-(2,2,2-триметилгидразиний)этилпропионата бромид) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в ПФ А, доводят объем раствора ПФ А до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ПФ А до метки и перемешивают.

Стандартные образцы примесей поставляются производителями субстанции.

Хроматографические условия

Колонка - 3,0 x 150 мм с октадецилсилил силикагелем (C18),

3,5 мкм;

ПФ - градиентное элюирование:

┌──────────────────┬─────────────┬───────────────┐

│ Время, мин. │ ПФ А, % │ ПФ Б, % │

├──────────────────┼─────────────┼───────────────┤

│ 0 │ 90 │ 10 │

├──────────────────┼─────────────┼───────────────┤

│ 7 │ 65 │ 35 │

├──────────────────┼─────────────┼───────────────┤

│ 12 │ 40 │ 60 │

├──────────────────┼─────────────┼───────────────┤

│ 18 │ 25 │ 75 │

├──────────────────┼─────────────┼───────────────┤

│ 19 │ 90 │ 10 │

├──────────────────┼─────────────┼───────────────┤

│ 25 │ 90 │ 10 │

└──────────────────┴─────────────┴───────────────┘

Скорость потока - 0,2 мл/мин.;

Детектор - квадрупольный масс-спектрометрический (МС/МС);

Объем пробы - 20 мкл.

Условия МС/МС

Режим электрораспыления - позитивный (ES+);

Рабочий режим - мониторинг реакций заданных ионов (MRM);

Температура источников ионов - 110 град. C;

Температура испарения - 220 град. C;

Напряжение: на конусе - 15 В;

на капилляре - 3,00 кВ;

Газ столкновений (CID) - аргон;

Давление газа -3

столкновений (CID) - 3,0 x 10 мбар.

Переходы сканирования масс и энергии столкновений

Хроматографируют раствор сравнения. Отношение "сигнал/шум" должно быть не менее 10 для примеси А, не менее 50 для примесей Б и В, не менее 200 для примеси Г и не менее 1000 для примесей Д и Е.

Хроматографируют испытуемый раствор.

Содержание каждой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

S x a

1 0

X = -------------,

S x a x 10

0 1

где:

S - площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме испытуемого

раствора;

S - площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме раствора

сравнения;

a - навеска субстанции, в граммах;

a - навеска стандартного образца соответствующей примеси, в граммах.

Содержание любой примеси должно быть не более 0,1%, суммарное содержание примесей - не более 0,5%.

Вода. Не менее 19,7% и не более 21,0%. Определение проводят методом К.Фишера из точной навески около 0,12 г субстанции. Конец титрования определяют электрометрически.

Хлориды. 0,5 г субстанции растворяют в 25 мл воды. 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,01% в субстанции).

Сульфаты. 10 мл раствора, полученного в испытании на Хлориды, должны выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,05% в субстанции).

Сульфатная зола. Не более 0,1%. Определение проводят из точной навески субстанции - около 1 г.

Тяжелые металлы. 1 г субстанции растворяют в 20 мл воды. 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытание на тяжелые металлы (более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требования ОФС "Остаточные органические растворители".

Бактериальные эндотоксины. Не более 0,35 ЕЭ на 1 мг субстанции.

Для проведения испытания готовят исходный раствор субстанции (концентрация - 100 мг/мл).

Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовлен инъекционных лекарственных форм в соответствии с требованиями ОФС "Бактериальные эндотоксины".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 40 мл уксусной кислоты ледяной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты потенциометрически или до появления голубовато-зеленого окрашивания (индикатор - 0,1 мл раствора кристаллического фиолетового).

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М хлорной кислоты соответствует 14,62 мг C6H14N2O2.

Хранение. В сухом месте.

МЕТИЛУРАЦИЛ (ФС 42-0256-07)

6-Метил-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-2,4-дион

C5H6N2O2 М.м. 126,12

Содержит не менее 99,0% C5H6N2O2 в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый кристаллический порошок без запаха.

Растворимость. Мало растворим в воде и спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать рисунку спектра метилурацила (Приложение 1).

Ультрафиолетовый спектр поглощения 0,001% раствора субстанции в области от 220 до 300 нм должен иметь максимум при 260 нм и минимум при 231 нм.

К 0,1 г субстанции прибавляют 10 мл бромной воды и встряхивают; бромная вода обесцвечивается в течение 5 мин.

Посторонние примеси. Определение проводят методом ТСХ.

Испытуемый раствор. 0,1 г субстанции растворяют в 1 мл 99,7% муравьиной кислоты, прибавляют 1 мл воды и перемешивают

Раствор сравнения. 0,5 мл испытуемого раствора разбавляют водой до 250 мл.

На линию старта пластинки со слоем силикагеля 60 F254 наносят 5 мкл (250 мкг) испытуемого раствора, 5 мкл (0,5 мкг) и 2,5 мкл (0,25 мкг) раствора сравнения. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью уксусная кислота ледяная - вода - бутанол (1:1:4) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе и просматривают в УФ-свете при 254 нм.

Пятно посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности поглощения не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (0,5 мкг) (не более 0,2%).

Результаты испытания считаются достоверными, если на хроматограмме раствора сравнения (0,25 мкг) четко видно пятно.

Хлориды. 0,75 г субстанции встряхивают с 25 мл воды в течение 1 мин. и фильтруют. 10 мл фильтрата должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,01% в субстанции).

Потеря в массе при высушивании. Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,3%.