Полимеразная цепная реакция (ПЦР), одно-спиральный конформационный плеоморфизм (single-strand conformation polymorphism (SSCP)) и последовательность ДНК

В диагностике ПВЧ, праймеры ПЦР могут быть использованы для обнаружения специфичного вирусного типа или различных типов одновременно. Различные типы ПВЧ имеют участки генома с устойчивой выдержанной последовательностью нуклеотидов. Согласованные праймеры, определяющие несколько разных типов ПВЧ, созданы для обнаружения наиболее устойчивых участков генома (Gregoire et al., 1989; Manos et al., 1989; Snijders et al., 1990; Contorni & Leoncini, 1993; de Roda Husman et al., 1995b). Недавно ПЦР амплификация стала также непосредственно применяться к срезам тканей, предоставленных для ISH. Теоретически эта ПЦР in situ реально увеличивает силу конвенционного метода ISH при определении ПВЧ-инфицированных клеток с одновременной гистологической локализацией (Haase et al., 1990; Nuovo et al., 1991a,b). Это новое применение ПЦР нуждается в дальнейшем исследовании для возможности использования в рутинной практике.

Метод SSCP основан на принципе способности одно-спиральной молекулы ДНК формировать уникальную вторичную структуру в зависимости от первоначальной нуклеотидной последовательности в условиях без денатурации. Вторичные структуры (конформеры) составляют различные варианты из исследованных фрагментов ДНК (Kurvinen et al., 1995; Zehbe et al., 1996). Комбинированное использование ПЦР амплификации и SSCP анализа явится быстрым и мощным звеном в диагностике и типировании ПВЧ (Zehbe et al., 1996).

Серология

Для большинства вирусов доказательство инфекции основывается на обнаружении антител, реагирующих на вирусные протеины, в сыворотке. ПВЧ не может быть выделен в культуре клеток, а в большинстве клинических материалов вирионы редко присутствуют. Образование антител затруднено из-за отсутствия подходящих антигенных мишеней и развитие серологического анализа отстаёт от тестирования ДНК (Galloway & Jenison, 1990; Galloway, 1992). «Слитые» белки, экспрессируемые бактериями, синтетические пептиды, ПВЧ 11, размножающийся в трансплантационных системах (Galloway, 1992), и вирусоподобные частицы применяются в качестве антигенных мишеней в ELISA (enzyme-linked immunosorbent assays-иммуноферментный абсорбционный анализ) и Western blotting (Galloway, 1992). Из-за отсутствия подходящей антигенной мишени для образования антител данные о гуморальном иммунном ответе на инфекцию ПВЧ только сейчас начинают представлять интерес (Stanley et al., 1995).

Преимущества серологических анализов по сравнению с детекцией ПВЧ ДНК заключаются в потенциальной способности серологии определять перенесённые инфекции среди людей, более не содержащих определяемое количество вирусной ДНК, что связано с риском персистенции ПВЧ и дальнейшего прогрессирования заболевания (Palefsky, 1995). При использовании тестов детекции ПВЧ ДНК проблемой всегда являются ошибки исследуемых материалов. Серологические анализы должны обеспечить более точное определение перенесённой или настоящей инфекции ПВЧ (Galloway, 1992). Серологические тесты также необходимы для планирования и контролирования программ вакцинации.