Определение молочной кислоты в слюне.

Цель занятия: повторить превращение глюкозы до молочной кислоты в анаэробных условиях. Качественной реакцией установить наличие молочной кислоты в слюне.

Теория вопроса. Органическими компонентами ротовой жидкости являются протеины, углеводы, свободные аминокислоты, ферменты, витамины С, Р и группы В, а также многие другие вещества. Органические вещества поступают в слюну из сыворотки крови (аминокислоты, мочевина) выделяются слюнными железами (муцин, амилаза, гликопротеины, иммуноглобулины класса. А и другие), а также выделяются микроорганизмами.

Особенности органического состава слюны состоят в постоянном дефиците основных энергетических субстратов: углеводов, белков, липидов и потому при наличии высокоактивных ферментных систем микробного, лейкоцитарного и железистого происхождения, происходит их быстрая утилизация. Так, употребление пищи, богатой углеводами, может вызвать своеобразный «метаболический взрыв» в полости рта. Он проявляется активацией ферментов углеводного обмена, усиленным расщеплением глюкозы до органической молочной кислоты.

Ход работы. Реакция Уффельмана.Принцип метода. Молочная кислота в присутствии фенолята железа (реактив Уффельмана), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета:

2) (C₆H₅O₃)3Fe + 3СНзСНОНСООН →

фенолят железа молочная кислота

(СН₃ СНОН СOO)₃Fe +

лактат железа

К 15 каплям слюны добавляют по каплям реактив Уффельмана (20 капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа до появления фиолетового цвета). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельмана с раствором молочной кислоты и наблюдают появление желто-зеленого окрашивания.

Контрольные вопросы:

1. Гликолиз - подготовительная стадия (5 реакций).

2. Гликолиз – посоледующие реакции до образования молочной кислоты.

3. Органические компоненты слюны и их функции.

Тесты: 54,61,91,94.

Литература: 20,24,26,32.