ОСНОВЫ БИОЛОГИИ РЫБ 13 страница

клиническое обследование стада рыб;

патологоанатомическое вскрытие рыб;

лабораторные исследования.

Анамнестические и эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения чаще используют для постановки предварительного диагноза, а при некоторых болез­нях они имеют решающее значение. Окончательный диагноз чаще ставится после проведения лабораторных исследований.

При подозрении на инфекционные заболевания проводят кли- нико-анатомические, вирусологические, бактериологические и ми­кологические исследования, ставят биопробу.

При подозрении на инвазионные болезни необходимы клини­ческий осмотр, патологоанатомическое и паразитологическое вскрытия.

При подозрении на отравления и незаразные болезни кроме клинико-анатомических проводят гидрохимические, химико-ток- сикологические (воды, рыбы, грунта, кормов и др.) исследования, ставят биопробы. При всех болезнях дополнительно проводят гема­тологические, биохимические, гистологические и другие диагнос­тические исследования.

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ РЫБОВОДНЫХ ХОЗЯЙСТВ

Обследование рыбоводных хозяйств (водоемов) проводят в пла­новом порядке для контроля выполнения противоэпизоотических мероприятий и вынужденно для установления диагноза при воз­никновении гибели рыб или подозрении на различные заболева­ния. В зависимости от целей и объема работ оно может быть полным или неполным.

Плановые обследования рыбоводных хозяйств проводят по пол­ной схеме 2—3 раза в год. Целями таких обследований являются изучение эпизоотической ситуации и разработка ветеринарно-са- нитарных и профилактических мероприятий, а также контроль их выполнения. Они включают следующие работы:

проверка планов профилактических, лечебных и оздоровитель­ных мероприятий и правильности их выполнения;

анализ санитарного состояния прудов, бассейнов, садков, аква­риумного хозяйства, кормоцехов и других производственных поме­щений;

контроль методического уровня и условий для проведения диаг­ностических исследований в местных лабораториях;

уточнение эпизоотического состояния и токсикологической си­туации в хозяйстве;

выборочное проведение необходимых диагностических иссле­дований.

По результатам обследования составляется заключение о вете- ринарно-санитарном и эпизоотическом состоянии хозяйства, уточняется комплекс профилактических и оздоровительных ме­роприятий.

Неполное или вынужденное обследование проводят в случае возникновения заболевания рыб с целью его диагностики и разра­ботки мероприятий по оздоровлению водоемов или хозяйства в целом. При этом основное внимание обращают на обследование неблагополучных водоемов, проведение клинических, патолого- анатомических, гидрохимических и других исследований в зави­симости от предположительного диагноза, а также анализ доку­ментальных данных о перевозках, условиях содержания и кормле­ния рыб, соблюдении рыбоводно-биологических нормативов их выращивания и т. п.

Начинают обследование со сбора анамнестических данных: оп­роса рыбоводов и обслуживающего персонала о течении болезни и гибели рыб, как она проявлялась, какие возрастные группы рыб бо­леют, при каких условиях возникло заболевание: метеорологичес­ких (паводок, дождь, перепад температуры и т. д.), гидрологичес­ких и гидрохимических, рыбоводных (пересадки, сортировка рыб). Поданным ветеринарного учета определяют, отмечалось ли подоб­ное заболевание в предыдущие годы, какие диагностические иссле­дования и профилактические мероприятия проводились, каковы их результаты. Изучают схему устройства хозяйства и водоснабже­ния прудов, определяют вероятные источники загрязнения водо­емов.

В дальнейшем проводят обследование водоемов и стада пора­женных рыб, которое включает: осмотр прудов (водоемов) и оценку санитарного состояния береговой зоны, зарастаемости ее расти­тельностью, физических свойств воды; проведение клинического осмотра и патологоанатомического вскрытия рыб, учета больных и погибших рыб, определения уровня их заболеваемости; отбор воды и патматериалов для лабораторных исследований.

КЛИНИЧЕСКОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ СТАДА РЫБ

Клинический осмотр проводят выборочно непосредственно в водоеме, при контрольном отлове или посадке рыб в специальные емкости (аквариумы, садки, бассейны и т. п.). Рекомендуется про­сматривать не менее 100 рыб каждого вида и возраста. Регистрируют нарушение поведения рыб: пугливость, угнетение, возбуждение, координацию движения, равновесие в воде. Осматривают кожные покровы и плавники, обращая внимание на количество и качество слизи, изменение окраски, наличие припухлостей, кровоизлияний, язв, рубцов, цист, ерошение чешуи и т. д. Приподнимая жаберные крышки, осматривают жабры. Обращают внимание на окраску, форму, рисунок и степень ослизнения жабр, структуру лепестков, просматривая их с помощью лупы. На губах и слизистой ротовой полости встречаются кровоизлияния, язвы, новообразования. Важ­но не пропустить изменения на глазах: западания глаз или пучегла­зие (экзофтальм), кровоизлияния, помутнение хрусталика и рого­вицы. Проводят учет больных рыб в абсолютном и процентном вы­ражениях (заболеваемость).

Рыб с клиническими признаками отсаживают в ведра или другие емкости, переносят в лабораторию и проводят патологоанатоми­ческое вскрытие, паразитологические и другие исследования. Для вскрытия берут 25 сеголетков, 10—15 двухлетков и единичные эк­земпляры рыб старшего возраста.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКОЕ ВСКРЫТИЕ РЫБ

Патологоанатомическое вскрытие имеет важное диагностичес­кое значение. Его применяют при диагностике большинства болез­ней рыб. Вскрытию подвергают свежие трупы (жабры без призна­ков разложения) и живых рыб с клиническими признаками заболе­вания. С целью недопущения разноса заразного начала вскрытие рыб проводят в лаборатории или в другом помещении. Запрещает­ся вскрывать рыб на берегу водоема, скармливать вскрытых рыб со­бакам, кошкам и другим животным. Вскрытых рыб подвергают ути­лизации или закапывают в землю после обеззараживания их хлор­ной известью. Живых рыб перед вскрытием обездвиживают разны­ми способами: усыпляют гипнодилом (5—10 мг/л), хлоралгидратом (2,4 г/л), разрушают спинной мозг иглой или разрезом позвоночни­ка в области затылка.

Патологоанатомическое вскрытие начинают с наружного ос­мотра, обращая внимание на те же изменения внешних покровов, плавников, глаз и других органов, что и при клиническом обследо­вании.

Вскрывают рыб в следующем порядке. Жабры обнажают удале­нием жаберной крышки ножницами. Отмечают степень ослизне- ния, изменения их окраски и рисунка, наличие кровоизлияний, очагов некроза, цист паразитов и т. д. Ножницами отрезают 2—3 дуги и просматривают их под лупой. Иногда готовят препараты от­дельных лепестков на предметном стекле. Накрыв их покровным стеклом, определяют толщину складок и патологические измене­ния.

Брюшную полость карповых рыб вскрывают двумя разрезами (рис. 32). Ножницами делают надрез брюшной стенки впереди анального отверстия, вставляют тупой конец ножниц в брюшную полость и делают первый разрез вдоль белой линии до области межчелюстного пространства. Вторым полулунным разрезом, проходящим по уровню боковой линии, отсекают брюшную стен­ку, обнажая внутренние органы. Разрезы делают осторожно, что­бы не повредить внутренние органы. Вначале осматривают брюш­ную и сердечную полости, обращая внимание на их содержимое, наличие жидкости (транссудат или экссудат, ее количество, цвет, запах, консистенция) или газа, крупных паразитов, внешний вид внутренних органов. У половозрелых рыб отделяют гонады, отме­чая стадию их зрелости, цвет, кровоизлияния, наличие мертвых икринок (белого цвета) и др. Затем, надрезав кишечник в области псевдодиафрагмы и ануса, извлекают комплекс внутренних орга­нов. Осторожно отделяют желудок, кишечник, печень с желчным пузырем и селезенку.

После отделения плавательного пузыря обнажают почки, лежа­щие вдоль позвоночника в виде ленты темно-красного цвета.

При осмотре плавательного пузыря определяют его форму, тол­щину и прозрачность оболочек, наличие кровоизлияний, пятен ге- мосидерина, экссудата в полости и т. д.

Состояние паренхиматозных органов (печени, почек, селезен­ки) оценивают по внешним признакам: размеру, консистенции, цвету, кровенаполнению, наличию кровоизлияний, очагов некро­за, рисунку на разрезе и др. Кишечник разрезают вдоль, промывают в воде, просматривают состояние слизистой, учитывают количество гельминтов и др.

При осмотре сердца отмечают его размер, форму, состояние ми­окарда, степень наполнения полостей кровью и ее свертываемости, наличие сгустков, кровоизлияний.

Вскрывают черепную коробку с помощью четырех разрезов, из которых первым поперечным разрезом отсекают крышку у носо-

а — карпа и других карповых; б — форели и лососевых; в — угря

вых ямок; два боковых разреза проходят от носовых ямок до заты­лочной области, а четвертый — в области затылка. Сначала прово­дят внешний осмотр оболочки головного мозга, затем его извлека­ют и характеризуют состояние вещества мозга, его кровенаполне­ние и др.

При осмотре скелетной мускулатуры обращают внимание на цвет, консистенцию, наличие кровоизлияний, отека, припухлос­тей, цист паразитов, степень прикрепления к костям.

Патологоанатомические изменения сопоставляют с клинически­ми симптомами, выявляют характерный комплекс признаков основ­ного заболевания и сопутствующие осложнения (болезни), а также используют их для определения главной и непосредственной причи­ны гибели рыб. В сомнительных случаях данные вскрытия уточняют с помощью гистологического исследования патматериала.

Обработку патматериала проводят общими методами гистологи­ческой техники. По нашему опыту, кусочки органов рыб лучше зали­вать в целлоидин-парафин, а жабры, кожу и плавательный пузырь — в целлоидин. Срезы окрашивают общепринятыми методами.

ПРАВИЛА ОТБОРА И ПЕРЕСЫЛКИ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Пробы воды берут в нескольких точках водоема с таким расче­том, чтобы собранные образцы отражали гидрохимическое состоя­ние водоема или загрязненность его отдельного участка (зоны гибе­ли рыб, места впадения ручья или сбросного канала, района интен­сивного поверхностного стока и т.д.), а также в незагрязненном участке (выше по течению). В прудах и других проточных емкостях берут пробы на вытоке воды.

Пробы воды (не менее 2 л) отбирают батометром из поверхност­ных (на глубине 50 см) и придонных слоев в чистые стеклянные или полиэтиленовые бутылки (см. рис. 20). Перед заполнением посуду ополаскивают 2—3 раза исследуемой водой. В тех случаях, когда время транспортирования пробы составляет более 1 сут, их реко­мендуется фиксировать различными консервантами в зависимости от целей исследования. Зимой воду при транспортировании следует утеплять, чтобы исключить ее замерзание.

Пробы грунта (массой 2 кг) берут также из разных зон водоема дночерпателем Экмана или Кирпичникова. Грунт сушат, на воздухе и упаковывают в широкогорлые банки или полиэтиленовые мешки (рис. 33).

Бентосные организмы (хирономиды, олигохеты, моллюски) в ко­личестве 100—150 г отмывают от ила водой из водоема.

Планктон собирают планктонной сеткой, фильтруя такое коли­чество воды, которое необходимо для получения около 50 г живой массы планктона.

Больных или подозрительных по заболеванию рыб доставляют в ветеринарную лабораторию живыми. Для исследования берут 10— 15 рыб на различных стадиях болезни.

Живых рыб перевозят в молочных бидонах или других емкостях, заполненных на ³/₄ объема водой из того же водоема, откуда взята проба, или водой из артезианской скважины.

Летом при длительном транспортировании воду с рыбой посте­пенно охлаждают до температуры 12—15 °С, добавляя мелкие ку­сочки льда. Чтобы не вызывать у рыб температурного шока, нельзя допускать перепад температуры воды исходного водоема и транс­портной емкости более 5—7 °С.

В случае невозможности выполнить эти условия отбирают патматериалы от больных рыб и соответствующим способом кон­сервируют. Для химико-токсикологического анализа пригодны снулая рыба или свежие трупы, которые отправляют в охлажден­ном, замороженном виде или консервируют 70°-ным спиртом.

Кусочки органов для бактериологических и вирусологических исследований отбирают стерильно, замораживают или консерви­руют 40—50%-ным раствором глицерина в кипяченой воде или физиологическом растворе. Кровь, экссудат и другой жидкий пат- материал доставляют в запаянных пастеровских пипетках. Пробы для микологических исследований консервируют в растворе анти­биотиков (пенициллина или стрептомицина по 100 ЕД/мл раство­ра). В исключительных случаях делают посевы в лаборатории ры­боводного хозяйства.

Кровь для исследований берут пастеровской пипеткой из хвос­товых сосудов (артемии и вены) или из сердца с соблюдением пра­вил асептики и антисептики (рис. 34). Взятую кровь используют для посева, приготовления мазков, гематологических и биохими­ческих исследований. Цельную кровь стабилизируют гепарином (1000 ЕД/мл) или лимоннокислым натрием. Сыворотку крови по­лучают общепринятым методом, помещают в стерильные запаян­ные ампулы, а летом консервируют 5%-ным раствором фенола (1—2 капли на 1 мл сыворотки) или тиомерсалом из расчета 10 мг препарата на 10 мл сыворотки. Отобранные жидкие материалы пе­ревозят в термосе со льдом.

Материал для гистологичес­ких исследований берут от по­гибших и вынужденно убитых рыб. Мелких рыб (мальки и се-

Рис. 34. Места взятия крови из хвостовых сосудов карпа:

1 — у сеголетков; 2— у карпов старшего возраста

голетки) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных особей берут органы или кусочки органов размером 2 х 3 см и толщиной 0,5—1,0 см. Кусочки из пораженных органов и тканей вырезают так, чтобы были захвачены нормальные и изме­ненные участки. Независимо от степени поражения берут кусочки кожи с подлежащей мускулатурой, жабр, печени, почек, селезенки, сердца, кишечника, плавательного пузыря, головного мозга. Ки­шечник перед фиксацией осторожно вскрывают или делают на нем несколько надрезов, чтобы фиксирующая жидкость проникла в его полость. Головной мозг осторожно извлекают целиком после вскрытия черепной коробки. Подлежащий исследованию материал помещают в стеклянные банки и фиксируют 10%-ным нейтраль­ным формалином, жидкостью Буэна или Карнуа.

С пораженных органов собирают паразитов и консервируют раз­ными способами в зависимости от их систематического положения и размеров. Для определения простейших — инфузорий, жгутико­носцев — готовят мазки соскобов из жабр и кожных покровов на предметных стеклах, подсушивают их на воздухе и хранят в бумаге или фиксируют жидкостью Шаудина 15—20 мин. Из цист миксо- споридий также готовят мазки на предметных стеклах, которые сра­зу заключают в глицерин-желатину.

Гельминтов собирают с органов в солонки или чашки Петри, промывают от слизи водой или физиологическим раствором и вы­держивают в них до гибели паразита. Моногенетических сосальщи­ков сразу заключают в глицерин-желатину на предметных стеклах или фиксируют в 4%-ном растворе формалина. Трематод, ленточ­ных червей и скребней фиксируют 70°-ным спиртом между стекла­ми так, чтобы они расправились, а у скребней вышел хоботок; нема­тод и личинок цестод консервируют в жидкости Барбагалло. Пара­зитических рачков фиксируют в 70°-ном спирте или 4%-ном фор­малине, пиявок —в 4%-ном формалине, не раздавливая, и глохидий — в 70°-ном спирте.

Отобранные материалы подробно описывают, этикетируют, упаковывают в водонепроницаемую тару, опечатывают и высылают с нарочным в ветеринарную лабораторию или другое учреждение, где имеются возможности для исследования. В сопроводительном письме сообщают данные обследования водоема, указывают пред­полагаемый диагноз и какие лабораторные исследования необходи­мо провести.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ И ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для доказательства бактериальной или вирусной этиологии бо­лезней рыб необходимо выделить возбудителя из организма боль­ных рыб, идентифицировать его по культурально-морфологичес- ким, антигенным и биологическим признакам, воспроизвести бо­лезнь на здоровых рыбах, повторно выделить (реизолировать) воз­будителя от экспериментальных животных. Все эти исследования

проводят по общепринятой схеме с учетом особенностей организма рыб и возбудителей болезней (схема I, табл. 11).

Схема I. Лабораторная диагностика бактериальных болезней рыб Патологический материал от больных рыб

f ^

Посевы на МПБ, МПА, Микроскопия мазков кро-

дифференциальные среды ви и отпечатков органов

^ ---------------------------------------- ---------

Выращивание пер- I Окраска по Граму, окраска Миксобактерии, мико-

вичных культур г>- на оксидазу, определение бактерии и др.

(/ = 24...26 °С) I подвижности

Чистые культуры сем. Vibriomceae и др.

i t I. Изучение биохимичес- II. Определение патоген-

ких свойств

III. Изучение антигенных свойств

1. Среды Гисса

2. Среда Хью-Лейфсона

3. Протеолитическая активность и др.

вида

2. Клинические признаки

3. Реизоляция возбудите­ля

смесью сывороток

2. Капельная РА с моно­валентной сывороткой

3. Пробирочная РА с моновалентной сыво­роткой

Бактериологические посевы проводят вначале с пораженных уча­стков кожи, мышц (язвы, абсцессы и др.), жаберной ткани, крови и асцитной жидкости, а после вскрытия полости — обязательно с пече­ни, почек или селезенки. Материал для вирусологических исследова­ний отбирают из органов и тканей, где концентрируется вирус, а при малоизученных болезнях — из наиболее пораженных органов.

Язвы перед отбором патологического материала промывают сте­рильным физиологическим раствором; содержимое абсцессов, фу­рункулов, асцитной жидкости набирают пастеровской пипеткой после прижигания места прокола.

Для асептического вскрытия рыбу обездвиживают, фиксируют препаровальными иглами на деревянной или пробковой доске. Туловище с левой стороны освобождают от слизи и чешуи, удаля­ют грудной и брюшной плавники, дезинфицируют 70°-ным спир­том или фламбируют спиртовым тампоном. Брюшную стенку от­секают стерильными ножницами полулунным разрезом от ануса к жаберной крышке. Патматериал с паренхиматозных органов от­бирают стерильно пастеровскими пипетками или бактериологи­ческой петлей.

Первичные бактериологические посевы проводят на МПБ, МПА и некоторые дифференциальные среды (например, кровяной агар, Китт—-Тароцци). Патологический материал для вирусологи-

V. hydrophila + + + + кг кг — кг кг +

A. hydrophila, v. anaerogenes + + + + к к — к к +

V. salmonicida — + + + кг кг — — кг —

Pseudomonas fluorescens + + + — — — — к к ±

Ps. cyprinisepticum ++ + — __ ___ +

Ps. putida + + + — — к к к ± к +

Ps. capsulata + + + ______ +

Vibrio anguillarum + + + + к к — + к —

Обозначения: О — окисление; Ф — ферментация; (+) — положительная реакция, наличие признака; (—) — отрицательная реакция, отсутствие признака; ± — сомнительный результат; к — образование кислоты; кг — образование кис­лоты и газа.

ческих исследований засевают на первичные однослойные или пе­ревиваемые клеточные культуры, полученные из органов и тканей рыб. В нашей стране выращивают в основном две клеточные ли­нии: ЕРС, полученную из эпителия оспенных разростов карпа, и FHM, полученную из кожно-мышечной ткани рыбы пимефала. Посевы бактерий и вирусов инкубируют в термостате при темпе­ратуре 24—26 °С.

Для ускоренной дифференциации псевдомонад и аэромонад от сходных с ними родов бактерий определяют оксидазную актив­ность культур и способность их расщеплять глюкозу на среде Хыо- Лейфсона (тест окисления — ферментации).

Одновременно или после окончания посевов готовят мазки кро­ви и отпечатки из некротических участков, язв, паренхиматозных органов, трассудата или экссудата. Их окрашивают по Романовско­му—Гимза или по Граму общепринятыми способами.

МИКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

При подозрении на грибковые заболевания рыб проводят мико­логические, а при бранхиомикозе и глубоких микозах -— гистологи­ческие исследования.

При большинстве микозов рыб (бранхиомикоз, сапролегниоз и др.) достаточно надежным методом диагностики является микро­скопическое исследование патологического материала. Исследуют нативные препараты из пораженных органов с добавлением не­скольких капель 50%-ного водного раствора глицерина, 0,9%-ного раствора хлорида натрия или водопроводной воды.

При исследовании на бранхиомикоз микроскопируют некроти- зированные участки или подвергнутые гнилостному разложению жабры больных рыб. Соскобы с жабр помещают на предметное стекло, добавляют несколько капель воды или других растворов, раздавливают покровным стеклом и просматривают при малом и среднем увеличении. В поле зрения микроскопа хорошо видны гифы гриба со спорами. В гистологических срезах они располагают­ся в просвете сосудов и респираторных складках, окрашиваются ге­матоксилин-эозином в темно-лиловый цвет.

Для обнаружения сапролегниевых грибов исследуют под мик­роскопом соскобы с кожи, жабр, носовых ямок, а также икру. При этом хорошо видны гифы гриба, заканчивающиеся зооспоран- гиями.

При глубоких микозах (ихтиофонозе, экзофиаламикозе, мико- тическом грануломатозе) исследуют микроскопически нативные раздавленные препараты из пораженных органов (печени, почек, селезенки и др.).

Чистые культуры грибов выделяют на обычных грибных сре­дах — агаре Сабуро, Чапека, МПА. Для выделения возбудителя бранхиомикоза посевы делают из жабр, подвергшихся гнилостно­му разложению. Возбудителей ихтиофоноза и других глубоких ми­козов культивируют на МПА с добавлением 1 % сыворотки крупно­го рогатого скота, а также на глюкозо-дрожжевом агаре.

Сапролегниевые грибы хорошо растут на стерилизованных ки­пячением семенах конопли и льна, помещенных в агаровые пласти­ны (1,5%-ный агар на воде), которые раскладывают в чашках Петри. Грибок растет при комнатной температуре в виде ватообразных ко­лоний. Его также культивируют на МПА, агаре Чапека и Сабуро, для чего вырезают из них небольшие блоки, засевают культурой и раскладывают в чашки Петри.

ПОСТАНОВКА БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ

В ряде случае для установления окончательного диагноза на ин­фекционную болезнь, а также при решении вопроса о снятии ка­рантина или карантинных ограничений с хозяйства ставят биологи­ческие пробы. При постановке их с целью определения патогеннос- ти возбудителей используют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, при­готовленные из различных органов и тканей больных или подозре­ваемых в заражении рыб.

Биопробы ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбуди­телей. Наблюдения ведут ежедневно, учитывают число погибших рыб, клинические признаки болезни и характер патологоанатоми- ческих изменений. Продолжительность опытов устанавливают с учетом инкубационного периода и длительности течения заболева­ния в естественных условиях. В опыты отбирают восприимчивых к данному заболеванию рыб из благополучного хозяйства. В каждой серии для заражения и контроля берут по 10 рыб.

При вирусных болезнях в качестве инфекционного материала берут свежеприготовленную вируссодержащую суспензию культу­ры клеток или безбактериальные фильтраты суспензий органов больных рыб. Количество вируссодержащего материала и способ заражения подбирают индивидуально для каждого заболевания. Материал вводят внутрибрюшинно, контактным методом, ороше­нием жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей вирус. Па­раллельно ставят контрольные опыты.

Для подтверждения бактериальной природы болезни испыты­вают чистые культуры. Здоровых рыб заражают 2-суточными буль­онными культурами внутрибрюшинно или внутримышечно в до­зах 0,1—0,2 мл (рис. 35). Молодые или старые культуры для био­пробы непригодны, так как у них меняются вирулентные свойства. Музейные штаммы перед опытом пассируют через восприимчивых рыб.

Для ускорения исследований предварительно патогенность оп­ределяют по ДНК-азной активности выделенных культур.

При постановке биологической пробы для диагностики мико­зов используют нативный материал, в котором содержится возбу-

Рис. 35. Внутрибрюшинное заражение рыб и введение лекарственных препа­ратов:

а — фиксация рыб; б — место инъекций

дитель на всех стадиях развития, или выращивают патогенные грибы на специальных пита­тельных средах до стадий, при­годных для заражения. Дозу вводимого патологического ма­териала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биологическая проба счита­ется положительной, если у 80 % зараженных рыб проявля­ется комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погиба­ет не менее 50 % заболевших рыб при полном сохранении их в кон­троле, а также при выделении исходных возбудителей. ¹

По окончании опытов воду в аквариумах обеззараживают, созда­вая в ней 4%-ную концентрацию формалина или 10%-ную концен­трацию суспензии хлорной извести. Через 1 ч воду спускают в кана­лизационную сеть, а рыб утилизируют. Весь инвентарь и посуду, бывшие в контакте с больной рыбой, дезинфицируют в 4%-ном растворе формальдегида в течение 1 ч.

При завершении биологической пробы в бетонированных бас­сейнах, земляных садках, карантинных прудах проводят дезинфек­цию воды хлорированием, доводя содержание свободного хлора в воде до 4—5 мг/л. Через 24 ч воду пропускают через известковый фильтр (используя только свежую негашеную известь). После этого ложе прудов дезинфицируют негашеной (10 т/га) или хлорной из­вестью (3 т/га) и оставляют без воды в течение 1 мес.

В случае, если ставится вопрос о снятии карантина или других ограничений, биопробу проводят непосредственно в прудах хозяй­ства согласно инструкции по борьбе с соответствующим заболева­нием.

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Кровь рыб четко реагирует на воздействие различных патоген­ных факторов: неблагоприятных условий среды, токсикантов, воз­будителей заразных болезней и т. д. По изменениям крови можно су­дить о характере патологических процессов, происходящих в орга­низме рыб. Результаты гематологических и биохимических иссле­дований крови относятся к дополнительным и позволяют уточнить диагноз болезни.

Основными гематологическими показателями, используемы­ми при диагностике болезней рыб, являются: определение коли­чества эритроцитов и лейкоцитов, уровня гемоглобина, скорости оседания эритроцитов (СОЭ) и выведение лейкограммы. Из био­химических показателей наиболее часто определяют содержание в крови сахара, общего белка и его фракций, активность основных ферментов (каталазы, пероксидазы, ацетилхолинэстеразы и мно­гих других).

Для исследования крови рыб применяют те же методики, что и для теплокровных животных, с учетом ряда особенностей, связан­ных с клеточным составом, физико-химическими свойствами кро­ви рыб и др. Активность ферментов рыб определяют при темпе­ратуре 24—26 °С.

Кровь у рыб берут из хвостовых сосудов (артерии и вены) или из сердца с помощью пастеровских пипеток или шприца с максималь­но толстой иглой. Предварительно их орошают раствором гепарина или лимоннокислого натрия (цитрата натрия).