Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат: содержимое карбункула и пузырьков, мокрота, испражнения, кровь и моча
Материалом для исследования служат: содержимое карбункула и пузырьков, мокрота, испражнения, кровь и моча. При патолого-ана-томическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы. По эпидемиологическим показаниям исследуют различные объекты внешней среды, а также шерсть и щетину животных. Все образцы помещают в герметичные сосуды и транспортируют закупоренными в опломбированных боксах или деревянных ящиках в лаборатории особо опасных инфекций.
Микробиологическую диагностику проводят с соблюдением правил техники безопасности как при особо опасных инфекциях. Для диагностики применяют все пять методов микробиологической диагностики.
Первоначально из материала готовят мазки и окрашивают их по Граму и для обнаружения капсул (по Романовскому—Гимзе) и спор (по Ауэске). Наличие в мазках крупных грам-положительных стрептобацилл, окруженных капсулой, дает возможность поставить предварительный диагноз. Люминесцентная микроскопия применяется как дополнительный метод диагностики сибирской язвы, при этом сибиреязвенные бациллы, обработанные лю-минесцирующей сывороткой, выглядят как палочки с ободком, светящиеся зеленоватым светом.
Для выделения чистой культуры исследуемый материал засевают на МПА и МПБ, а также заражают лабораторных животных (белые мыши, морские свинки). Выделенную чистую культуру идентифицируют по общепринятой схеме с учетом морфологии, характера роста на МПА и МПБ, разжижения желатина в виде перевернутой елочки, отсутствия подвижности, положительного теста «жемчужного ожерелья» и лизиса сибиреязвенным бактериофагом «ВА-9» и «Саратов». Дополнительно определяют лецитиназную, фосфатазную и гемолитическую активность. Дифференциально-диагностические признаки сибиреязвенных и почвенных бацилл представлены в табл. 16.26.
В биопробе патологический материал или испытуемую культуру вводят подкожно: морским свинкам в паховой области, мышам в корень хвоста. Обычно мыши погибают через 1—2 суток, морские свинки — через 2—4 суток. Наблюдение за животными продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезенку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца, места введения исследуемого материала. О наличии возбудителя сибирской язвы свидетельствуют типичная патолого-анатомическая картина у подопытных животных: отек в месте введения исследуемого материала, темная не свернувшаяся кровь, кровоизлияния в клетчатке, рыхлая селезенка и плотная красная печень. В мазках-отпечатках из органов и крови — наличие грамположительных капсулированных палочек.
Серодиагностика проводится в тех случаях, когда не удается обнаружить возбудителя в материале. Для определения антител в сыворотке крови больного используют реакцию латексной агглютинации или РПГА с протективным сибиреязвенным АГ. Сибиреязвенные антигены определяют в РИФ, ИФА, РСК, РИГА, РП в геле и реакции термопреципитации по Асколи. Реакция Асколи имеет большое значение, так как позволяет обнаружить возбудитель при отрицательных результатах бактериологического исследования. Наличие сибиреязвенного антигена в разложившемся или мумифицированном трупе животного, коже (свежей, сухой, выделанной) и изделиях из нее, шкурках, ме-
хе, шерсти определяют с помощью реакции термопреципитации по Асколи. Однако для прижизненной диагностики она не дает серьезных преимуществ перед бактериологическим и серологическим методами.
Для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях ставят кожные аллергические пробы с антраксином. Антраксин вводят внутрикожно объемом 0,1 мл, результаты учитывают через 24—48 ч. Пробу считают положительной при наличии гиперемии диаметром более 16 мм и инфильтрата.
Лечение.Применяют антибиотики и сибиреязвенный иммуноглобулин. Для антибактериальной терапии препарат выбора — пенициллин, при его непереносимости — тетрациклин.
Профилактика.Проводится в направлении всех трех звеньев эпидемического процесса: мероприятия 1 группы направлены на источник инфекции, мероприятия 2 группы — на разрыв механизма и путей передачи, мероприятия 3 группы — на восприимчивый коллектив. Для специфической профилактики применяется живая сибиреязвенная вакцина СТИ (Санитарно-технический институт). Вакцина получена Н. Н. Гинсбургом с соавт. в 1942 г. Иммунизацию проводят по эпидемическим показаниям группам риска. Для экстренной профилактики назначают сибиреязвенный иммуноглобулин. Не специфическая профилактика такая же, как и при всех зоонозах, и сводится в основном к санитарно-ветеринарным мероприятиям:
1. Изоляция больных и подозрительных животных.
2. Сжигание трупов погибших животных и зараженных объектов (подстилка, навоз).
3. Обеззараживание мест содержания больных животных.
4. Очистка водопоев.
5. Осушение заболоченных участков (перепахивание, хлорирование).
6. Организация скотомогильников. При невозможности сжигания трупов их хоронят на отдельных сухих и пустынных участках; глубина ямы должна быть не меньше 2 м, труп кладут на толстый слой хлорной извести и засыпают ею сверху слоем до 10 см. Все ме-
роприятия по захоронению следует проводить с соблюдением санитарных норм.
7. Санитарный надзор за предприятиями, занятыми переработкой животного сырья. Все поступающее сырье проверяют в реакции термопреципитации по Асколи, меховые изделия изготовляют только из сырья, давшего отрицательный результат в этой реакции.
16.5.2. Спорообразующие бактерии рода Clostridium
К роду Clostridium относятся подвижные палочки (реже неподвижные); которые образуют овальные или круглые споры, придающие клеткам веретенообразную форму (от греч. kloster — веретено). С возрастом могут изменять отношение к окраске по Граму, но на ранних стадиях культивирования всегда грам-положительны. Хемоорганотрофы; одни виды проявляют сахаролитическую, другие — про-теолитическую активность (возможно сочетание этих свойств либо их полное отсутствие). Наиболее характерные признаки — способность вызывать масляно-кислое брожение и анаэробный распад углеводов с образованием масляной кислоты и газов (С02, водород, иногда метан). Восстанавливают сульфиты до сульфидов. Большинство видов — строгие анаэробы; также имеются аэротолерантные виды. Типовой вид — Clostridium butyricum — первый анаэроб (вызывает масляно-кислое брожение углеводов), открытие которого позволило Луи Пастеру (1861) выделить анаэробные микробы; термин «клостридии» ввел Трекюль (1863). Род включает виды, обитающие в почве, на дне пресных и соленых водоемов, в кишечнике человека и животных; отдельные виды патогенны, а другие нашли применение в биотехнологическом производстве некоторых органических кислот и спиртов. Современная систематика выделяет пять групп микробов, разделяемых по расположению спор, способности гидролизовать желатину и особым требованиям для роста. По экологическим свойствам выделяют 3 группы клостридии: возбудители бродильных процессов (с преобладанием сахаролитических свойств); возбудители процессов гниения (с преобладанием протеолитических свойств) и патогенные виды (могут быть протеолитическими и сахароли-
тическими). Последнюю группу составляют: возбудители раневых клостридиозов (газовой гангрены, столбняка); возбудители энтераль-ных клостридиозов и непатогенные виды, вызывающие патологические процессы в ассоциациях с другими патогенными клостридиями. Клостридиозы, как правило, имеют экзогенное происхождение. Из более чем 80 видов в патологии человека играют роль около 20 видов; их основные дифференциальные признаки представлены в табл. 16.27.
16.5.2.1. Клостридии столбняка (Clostridium tetani)
Столбняк (tetanus) тяжелая раневая инфекция, вызываемая Clostridium tetani; характеризуется поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог.
Возбудитель столбняка практически одновременно открыли Н. Д. Монастырский (1883) и А. Николайер (1884); в чистой культуре впервые выделен С. Китазато (1889).
Морфология.Гамположительные палочки с закругленными концами, длиной 4—8 мкм и толщиной 0,3—0,8 мкм (в молодых культурах иногда образуют нитевидные клетки); располагаются одиночно или цепочками; подвижны (содержат 20 и более жгутиков, пере-трихи), в старых культурах (30 суток и более)
преобладают неподвижные формы. Споры круглые, реже овальные; расположены терминально; их диаметр в 2—3 раза превышает толщину бактерий, вследствие чего клетка имеет форму «барабанной палочки».
Культуральные свойства.Облигатные анаэробы; отличаются высокой чувствительностью к кислороду. На МПА и желатине в строго анаэробных условиях возбудитель растет медленно и образует тонкие прозрачные колонии с ровными или шероховатыми краями; рост колоний характерный — сначала на поверхности среды появляется «сеточка», образованная сливающимися колониями с отростками. Растет в виде прозрачных или серовато-желтых шероховатых (R-) и гладких (S-) колоний. При посеве столбиком в полужидкий агар через 24-48 ч формирует колонии в виде «чечевичек» (R-форма) или «пушинок» с плотным коричневым центром (S-форма). Спорообразование начинается на 2—3-е сутки; на 4—6-е сутки роста на жидкой среде вегетативные клетки разрушаются, и в среде остаются почти одни споры.
Биохимическая активность.Низкая, отсутствуют цитохромы, цитохромоксидаза, перок-сидаза и каталаза. Основные продукты метаболизма — уксусная, масляная, пропионовая
кислоты и этанол. Большинство штаммов не обладает сахаролитической активностью, но выделено несколько штаммов, ферментирующих глюкозу. Проявляет слабые протеолити-ческие свойства; медленно расщепляет белки и пептоны до аминокислот, последние разлагаются до угольной кислоты, водорода, аммиака, летучих кислот и индола. Для роста необходимы аргинин, гистидин, тирозин, валин, изолейцин, лейцин и триптофан. Образуют желатиназу и рениноподобный фермент, обуславливающий появление затемненных зон вокруг колоний на молочном агаре.
Антигенная структура.Имеют О- и Н-АГ; по жгутиковым АГ выделяют 10 сероваров, все серовары продуцируют идентичные по своим антигенным свойствам экзотоксины.
Факторы патогенности.Патогенность обусловлена способностью продуцировать экзотоксины — тетаноспазмин и тетанолизин.
• Тетаноспазмин — полипептид; Мт — 150 000 Да; действует дистанционно, так как бактерии редко покидают рану. Антигенно однороден; хотя обнаружено 4 группы детерминант, но их структура и локализация недостаточно изучены. Токсин фиксируется на поверхности отростков нервных клеток, проникает в них за счет лиганд-опосредованного эндоцитоза и посредством ретроградного аксонного транспорта попадает в ЦНС. Механизм действия связан с подавлением высвобождения тормозных нейромедиаторов, в частности глицина и gama-аминомасляной кислоты, в синапсах (токсин связывается с синаптическими белками синап-тобревином и целлюбревином). Первоначально токсин действует на периферические нервы, вызывая местные тетанические сокращения мышц. Токсин появляется в культурах на 2-е сутки, достигая пика образования к 5—7-му дню. Разрушается при длительном хранении в термостате, под действием света и кислорода.
• Тетанолизин (тетаногемолизин) обладает гемолитическим, кардиотоксическим и летальным эффек-
тами, в патогенезе заболевания играет менее важную роль; максимальное накопление токсина в культуре наблюдают уже через 20—30 ч; процессы его образования не связаны с синтезом тетаноспазмина.
Устойчивость в окружающей среде.Споры способны длительное время сохраняться в окружающей среде; в регионах с теплым климатом способны прорастать и размножаться в почве.
Чувствительность к антисептикам и дезин-фектантам.Споры отличает высокая устойчивость к химическим и физическим воздействиям; они выживают в течение 8—10 ч в 1% растворе сулемы и 5% растворе фенола, а также выдерживают кипячение в течение 0,5-1 ч.
Эпидемиология.Естественный резервуар и источник возбудителя инфекции — почва; хотя многие исследователи склонны считать резервуаром инфекции толстый кишечник сельскохозяйственных и диких животных. Повышенную заболеваемость отмечают в регионах с теплым климатом, создающим условия не только для длительного сохранения спор в почве, но и для их прорастания и размножения вегетативных форм. Механизм передачи — контактный, путь — раневой (бытовая травма, огнестрельные ранения и др.). Восприимчивость — высокая; заболеваемость значительно возрастает среди раненных во время военных действий; основная группа риска в мирное время — работники сельского хозяйства, жители сельских районов (80—86 % заболевших), дорожные и строительные рабочие и т. д. Ежегодная смертность от столбняка превышает 1,2 млн человек. Столбняк часто поражает новорожденных при родах в антисанитарных условиях. У них развивается «пупочный столбняк», от которого ежегодно гибнет более 1 млн новорожденных.
Патогенез.Входные ворота инфекции — бытовые и производственные травмы, причем наиболее часто поверхностные или колотые, когда больной не обращается за медицинской помощью. Столбняк — токсинемическая инфекция, основным патогенетическим фактором которой является столбнячный токсин. Возбудитель остается в ткани на месте входных ворот; продуцирует экзотоксин, который поступает в кровь и распространяется
по организму по кровеносным и лимфатическим сосудам, а также по нервным стволам, и достигает спинного и продолговатого мозга. Токсин фиксируется на поверхности отростков нейронов, проникает в них за счет ли-ганд-опосредованного эндоцитоза и посредством ретроградного аксонного транспорта попадает в ЦНС. Механизм действия токсина связан с подавлением высвобождения тормозных нейромедиаторов, в частности глицина и у-аминомасляной кислоты, в синапсах (токсин связывается с синаптическими белками синаптобревином и целлюбревином), в результате чего нарушается проведение импульсов по нервным волокнам. Первоначально токсин действует на периферические нервы, вызывая местные тетанические сокращения мышц. При столбняке поражается не только нервная система — в патологический процесс вовлекаются все системы организма.
Клиника.Инкубационный период 6—14 дней. Легкая форма (локальный столбняк) характеризуется периодическими спазмами в пораженной области. Генерализованный столбняк — наиболее часто встречаемая форма с характерными мышечными спазмами; из других проявлений можно отметить разбитость, тахикардию, аритмии, менингит, гипокальциемию.
Ведущее проявление болезни — судорожный синдром, включающий болезненные сокращения мышц (тетанус) и длительное напряжение мышц (мышечная ригидность). Характерными проявлениями последнего считаются опистотонус (тетанический спазм, при котором позвоночник и конечности согнуты; больной лежит на спине и опирается на затылок и пятки) и сардоническая улыбка (подобие оскала, вызванного спазмом лицевых мышц). Мозговые поражения включают поражения черепно-мозговых нервов (наиболее часто — VII пары); характерны тонические спазмы лица и глотки. У человека столбняк носит нисходящий характер. Столбняк новорожденных протекает в основном так же, как и у взрослых.
Иммунитет.Естественный иммунитет у человека к столбняку отсутствует. Постинфекционный иммунитет, как правило, не формируется, поскольку токсигенная доза столбнячного токсина во много раз ниже дозы иммуногенной и отмечаются повторные случаи заболевания.
Микробиологическая диагностика.Микробиологические исследования лишь подтвержда-
ют клинический диагноз. Возбудитель обычно обнаруживают в месте его проникновения в организм больного. Поэтому наиболее рационально исследование различного материала, взятого в месте ранения. В тех случаях, когда входные ворота неизвестны, следует тщательно осмотреть больного для выявления ссадин, царапин, катаральных и воспалительных процессов; необходимо обратить внимание на старые рубцы после ранений, так как возбудитель может долго в них сохраняться; в некоторых случаях исследуют слизь из носа, бронхов, глотки, налет с миндалин, а также выделения из влагалища и матки (при послеродовом столбняке или аборте). При бактериологическом исследовании трупов также принимают во внимание возможность генерализации инфекции. Для анализа забирают кровь (10 мл) и кусочки печени и селезенки (20-30 г).
Для диагностики применяют бактериоско-пический, бактериологический и биологический методы.
Обнаружение в мазках из материала, взятого от больного или трупа, тонких длинных грамположительных палочек с круглыми терминальными спорами «барабанные палочки» вызывает подозрение на наличие Clostridium tetani, однако на основании бактериоскопии нельзя делать заключение о присутствии возбудителя, так как в материале могут находиться морфологически сходные с ним клостридии.
Выделение возбудителя проводят по обычной схеме. Исследованию подлежат материал от больного или трупа, перевязочный и шовный хирургический материал, а также почва, пыль и воздух. Исследуемый материал засевают на среду Китта—Тароцци, инкубируют в термостате 3—4 суток, после чего пересевают на плотные среды для получения колоний. Выделенную культуру идентифицируют и определяют ее токсигенность на белых мышах или в РП в геле.
При исследовании материала от больного или трупа параллельно бактериологическому анализу проводят обнаружение столбнячного токсина в биологической пробе на мышах. Для этого материал измельчают, добавляют двойной объем физиологического раствора, фильтруют; часть фильтрата смешивают с противостолбнячной сывороткой из расчета 0,5 мл (200 АЕ/мл) сыворотки на 1 мл экс-
тракта и инкубируют в течение 40 мин. Затем одной группе животных вводят экстракт без предварительной инкубации с сывороткой, а другой группе — проинкубированную смесь; при наличии столбнячного токсина у животных первой группы развиваются симптомы столбняка.
Лечениенаправлено на нейтрализацию столбнячного токсина антитоксином. Применяют противостолбнячную лошадиную сыворотку в дозе 50-100 тыс. ME (курс — 2 инъекции, в тяжелых случаях — 3 инъекции дробно) или донорский противостолбнячный иммуноглобулин в дозе 900 ME.
Профилактика.При травмах обязательна хирургическая обработка раны. Для специфической профилактики проводится плановая или экстренная иммунизация.
Для создания искусственного активного иммунитета в плановом порядке применяют столбнячный анатоксин, сорбированный на гидроокиси алюминия в составе вакцин АКДС, АДСм, АСм или секстанатоксин. Первичную вакцинацию проводят детям в 3-месячном возрасте (курс включает 3 инъекции АКДС с интервалом 30—40 суток), затем в соответствии с календарем прививок периодически проводят ревакцинации. Для иммунизации военнослужащих используют секстанатоксин.
Экстренная профилактика проводится при травмах, ожогах и обморожениях, укусах животных, при внебольничных абортах путем введения ранее привитым одного столбнячного анатоксина (0,5 мл). Непривитым вводят 1 мл столбнячного анатоксина и 250 ME донорского иммуноглобулина (если он отсутствует, то проведя предварительную внутрикожную пробу, вводят 3000 ME противостолбнячной сыворотки по Безредке).
16.5.2.2. Клостридии ботулизма {Clostridium botulinum)
Ботулизм — острая пищевая токсикоин-фекция, протекающая с преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы.
В России первое клинико-эпидемиологическое описание ботулизма привел Зенгбуш (1818); возбудитель открыл Э. ван Эрменген (1869).
Морфология.Палочки с закругленными концами размером 4/8x0,6/0,8 мкм; подвижны, перитрихи. При неблагоприятных условиях образуют субтерминально расположенные споры; их диаметр в 2—3 раза превышает толщину бактерий, вследствие чего клетка имеет форму «теннисной ракетки». Молодые культуры окрашиваются грамположительно, 4—5-суточные — грамотрицательно.
Культуральные свойства.Строгие анаэробы. На кровяном агаре с глюкозой образуют очень мелкие сероватые или желтоватые мутные колонии линзообразной формы с зоной гемолиза различной ширины. На печеночном агаре образуют полиморфные звездчатые колонии; на желатине — сероватые, окруженные зоной разжиженного желатина. В столбике агара можно обнаружить диссоцианты; R-формы имеют форму чечевичных зерен, S-формы — пушинок. Хорошо растут на жидких средах (на среде Китта—Тароцци, бульонах из гидролизатов казеина, мяса или рыбы) при условии предварительного удаления кислорода из среды кипячением в течение 15— 20 мин с быстрым охлаждением. Вызывают помутнение среды и газообразование; иногда имеется запах прогорклого масла, но этот признак непостоянен. Оптимум рН для роста — 7,3—7,6; для прорастания спор — 6,0—7,2. Температурный оптимум роста 25—35 "С.
Биохимическая активность.По биохимическим свойствам выделяют 4 группы:
• бактерии I группы — проявляют выраженные протеолитические свойства, гидро-лизуют желатину и эскулин, ферментируют глюкозу и мальтозу; проявляют липазную активность на яичном агаре;
• бактерии II группы — проявляют саха-ролитическую, но лишены протеолитической активности;
• бактерии III группы — проявляют липазную активность и гидролизуют желатину;
• бактерии IV группы — гидролизуют желатину, но не проявляют сахаролитических свойств и липазной активности, что послужило основанием для предложения выделить их в отдельный вид — Clostridium argentiense.
Все типы Clostridium botulinum образуют же-латиназу, лецитиназу и H2S. Проявляют широкий спектр сахаролитической активности:
бактерии типов А, В, Е и F ферментируют глюкозу, левулезу, фруктозу, мальтозу и сахарозу; типов С и D — глюкозу и мальтозу, тип G инертен к углеводам. Clostridium botulinum типов А и В обладают выраженными протеолитическими свойствами, разлагают свернувшийся яичный белок и гидролизуют желатину.
Антигенная структура.Имеются группос-пецифические жгутиковые (Н-) и типоспе-цифические соматические (О-АГ) бактерий, не проявляющих токсических свойств. По структуре экзотоксинов бактерии разделяют на 8 сероваров: А, В, С|(аl), С2(be), D, E, F и G.
Факторы патогенности.Патогенность обусловлена сильным экзотоксином, чувствительность к которому различна у человека и животных. Человек наиболее чувствителен к токсинам типов А, В, Е, а животные и птицы — к токсинам типов С, D, F; однако известны случаи заболевания человека, вызванные токсинами ТИПОВ С и F. Ботулотоксин — белок, проявляющий нейротоксическое действие, молекулярная масса может варьировать от 60 до 150 кДа. Токсин разрушается при кипячении в течение 20 мин; легко кристаллизуется в белый хлопьевидный порошок. Человек и животные очень чувствительны к токсинам ботулизма. Ботулотоксин является самым сильным ядом, известным человеку. По расчетным данным, 1 г кристаллического токсина содержит 10^12 смертельных для человека доз токсина. Токсины всех типов проявляют гемолизирующее действие. Оптимальная температура для токсинообразования вариабельна: для бактерий типов А, В, С и D — 35 'С, для бактерий типов Е и F — 28-30 °С.
Устойчивость в окружающей среде.С. botulinum обитает в почве. Споры способны длительное время сохраняться в окружающей среде; в регионах с теплым климатом способны прорастать и размножаться. Споры отличает высокая устойчивость к химическим и физическим воздействиям. Инактивация спор может быть достигнута автоклавирова-нием при 160—170 °С в течение 60—120 мин.
Эпидемиология.Заболевание регистрируют повсеместно, исключая районы вечной мерзлоты. Наиболее часто заболевания вызывают типы А, В и Е. Типы Е и F впервые выявлены в России; тип G первично выявлен в Аргентине. Естественный резервуар и источ-
ник возбудителя инфекции — почва и различные животные. Повышенную заболеваемость отмечают в регионах с теплым климатом, создающим условия не только для длительного сохранения спор в почве, но и их прорастания и размножения вегетативных форм. Механизм передачи — фекально-оральный, путь — алиментарный. Споры, попадая в пищевые продукты (мясные, овощные, особенно консервированные), прорастают, образуют токсин, который при употреблении пиши вызывает отравление.
Патогенез.Ботулизм — токсинемическая инфекция; основным патогенетическим фактором является токсин, который поступает в кровь и распространяется по организму по кровеносным сосудам. Фармакокинетическая активность токсинов различных типов практически одинакова, они сорбируются на клетках слизистой оболочки кишечника, проникают в кровь и в периферические нервные окончания. Действие токсина включает связывание Н-цепи с мембраной, поглощение токсина и формирование пор в синаптических пузырьках (каждую пору формируют 4 молекулы токсина), что приводит к блокированию слияния синаптических пузырьков с мембраной; мишень для действия — интегральные синаптические белки. В частности, токсины серотипов В, D, F расщепляют синаптобре-вин, А и Е — SNAP-25, С — синтаксин, D и F — целлюбревин. Избирательно поражают а-моторные нейроны передних рогов спинного мозга, что обусловливает характерные параличи мышц.
Клиника.Инкубационный период обычно составляет 24 ч, но может варьировать от 4—6 до 96 ч и более. Проявления зависят от природы продукта, ставшего причиной отравления, количества накопившегося в нем и поступившего в организм токсина, состояния больного. Первые, но не постоянные признаки — расстройства ЖКТ (тошнота, рвота, боли в животе). Часто больные жалуются на сухость во рту или гиперсаливацию. Одновременно развиваются головная боль и нервно-паралитические явления — нарушение глотания, диплопия (двоение в глазах), птоз (опущение век), анизокория (поражение сфинктера зрачка). Затем возникает парез и паралич мышц шеи, конечностей, дыхательной мускулатуры и сердечной мышцы, в результате чего наступает смерть.
Иммунитет.Естественный иммунитет человека к ботулизму отсутствует. Перенесенное заболевание не оставляет иммунитета, поскольку токсигенная доза ботулотокси-на во много раз ниже дозы иммуногенной. Чувствительность к ботулиническому токсину у различных животных подвержена резким колебаниям. Абсолютно резистентные виды неизвестны, но всеядные животные обладают меньшей чувствительностью.
Микробиологическая диагностика.Исследованию подлежат остатки пищевых продуктов; рвотные массы, промывные воды желудка, фекалии, моча, кровь, секционный материал. Кровь берут из вены в количестве 5—10 мл и разводят 3—4% раствором цитрата натрия в соотношении 2:1; промывные воды из желудка забирают в объеме 50—100 мл; кал— 50—60 г. От трупа забирают кусочки печени (50—60 г), отрезки кишечника и желудка и их содержимое, лимфатические узлы, головной и спинной мозг, кровь. До поступления в лабораторию образцы хранят на холоде.
Исследования проводят одновременно в двух направлениях: обнаружение в материале ботулотоксина и выделение возбудителя. Ботулотоксин определяют в биопробе на животных или в РИГА. Для выявления ботулотоксина и определения его типа, что крайне важно при назначении антитоксической терапии, мышам вводят исследуемый материал и смесь материала с антитоксической боту-линической сывороткой типов А, В, С и др. По гибели животных устанавливают наличие токсина и его тип. Кровь исследуют только на наличие токсина в биологической пробе на мышах или морских свинках. Испражнения исследуют только на наличие возбудителя посевом на питательные среды, весь остальной материал — на наличие токсина и возбудителя. Банки с консервированными продуктами выдерживают в термостате 10—12 суток, стерильно отбирают 50— 100 г, растирают в ступке и центрифугируют; в надосадочной жидкости определяют токсин, в осадке — возбудитель. Мясо и рыбу обрабатывают спиртом и забирают пробы из внутренних частей; пробы рыбы рекомендуют брать от хребта и внутренних органов. Пробы изучают аналогично исследованиям консервированных продуктов.
Выделение возбудителя проводят по общепринятой схеме.
Лечение.Для лечения по Безредко больному внутривенно вводят одну международную лечебную дозу (содержит по 10 000 ME сывороток типов А и Е и 5000 ME типа В); однократного введения обычно бывает недостаточно, поэтому ее вводят ежедневно до достижения клинического эффекта. После лабораторного выявления типа возбудителя вводят сыворотку только против данного типа.
Профилактика.Для специфической профилактики применяют ботулинический полианатоксин, содержащий анатоксины А, В и Е. Для экстренной профилактики используется поливалентная (типов А, В, Е) лошадиная сыворотка, выпускаемая в жидком и сухом виде. При производстве консервированных (мясных, рыбных, овощных) продуктов необходимо соблюдать санитарно-гигиенические условия стерилизации консервов и их хранения, исключающие накопление токсина в продукте. При консервировании мяса широко применяют нитриты.
16.5.2.3. Клостридии газовой гангрены
Анаэробная раневая газовая инфекция (газовая гангрена, анаэробный миозит) — тяжелая раневая инфекция человека и животных, вызываемая бациллами рода Clostridium в ассоциации между собой и с аэробными или анаэробными УПМ, которая характеризуется острым тяжелым течением, быстро наступающим и распространяющимся некрозом преимущественно скелетных мышц с развитием отеков и газообразованием, тяжелой интоксикацией и отсутствием выраженных воспалительных явлений.
Впервые раневая госпитальная гангрена была описана А. Паре в 1562 г. А. Вельпо (1839) опубликовал свои наблюдения над подобным заболеванием, названным им «травматическая эмфизема». Полное описание клинической картины и течения различных форм газовой инфекции дал Н. И. Пирогов во время Севастопольской и Кавказской военных кампаний. В 1861 г. Л. Пастер описал Vibrion septique (септический вибрион), который со времени выделения культуры Пастером совместно с Ж. Жубером (1877) длительное время оставался
единственным идентифицированным микробом, с которым связывали многие заболевания. М. В. Вейнберги К. Сеген (1891) установили, что открытая ими бацилла злокачественного отека {Clostridium oedematiens типа А) способна вызывать инфекции у человека; позднее возбудитель был охарактеризован Ф. Нови (1894) и получил имя исследователя. Clostridium perfiingens типа А открыли американские патологи М. Уэлч и Г. Неттал (1892); в чистой культуре получили А. Вейон и Ж. Жубер (1893), давшие ему название perfringens. Дальнейшая история открытия возбудителей анаэробных инфекций включает выделение сапрофитов С. putriflcus (Биншток, 1883) и Clostridium spomgenes (И. И. Мечников, 1908), а в 1915 г. М. В. Вейнберг и К. Сеген выделяют С. fallax, «бациллу злокачественного отека» Clostridium oedematiens (1915) и «ткане-расплавляющую» бациллу Clostridium histolyticum (1917). Clostridium sordellii выделена Сорделли от больного газовой гангреной в Буэнос-Айресе (1922).
16.5.2.3.1. Clostridium perfringens
Морфология.Вегетативные клетки — крупные, грамположительные, неподвижные. Классические формы представлены короткими палочками с обрубленными под прямым углом концами (0,6/1,0x1/1,5 мкм). Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями; в старых культурах могут быть грамотрицатель-ными. Форма может варьировать: например, на углеводных безбелковых средах могут образовывать коккобациллярные формы, а на белковых безуглеводных средах — нити с заостренными концами. В организме образуют капсулы; в течение некоторого времени капсулы сохраняются и при культивировании на средах, содержащих нативный белок; капсулы наиболее выражены у вирулентных штаммов, резистентных к фагоцитозу. Споры крупные, овальные, расположены центрально (у С. perfiingens типа А — также субтерминально); клетка практически не деформируется.
Культуральные свойства.На плотных питательных средах С. Perfiingens!! типа А образует S- и R-колонии. S-колонии круглые, куполообразные, с гладкими ровными краями; в начале роста прозрачные, напоминающие капли росы, позднее становятся мутными,
серовато-белыми. R-колонии неправильной формы, бугристые, с шероховатыми неровными краями; в глубине агара напоминают комочки ваты. У некоторых штаммов отмечают слизистые М-колонии. Колонии окружены зоной гемолиза; который может быть полным либо частичным. Зона гемолиза может быть двойной: вокруг колоний полный гемолиз за счет действия гемолизинов, на отдалении — неполный за счет действия лецитиназы. При контакте с кислородом колонии могут приобретать зеленоватую окраску. Рост на жидких и полужидких средах, особенно содержащих глюкозу, происходит очень бурно с образованием Н2 и С02 и обычно заканчивается через 8—12 ч; при стоянии среда постепенно светлеет, и образуется обильный осадок; культуры С. perfringens типа А имеют характерный запах масляной кислоты. Оптимум рН — 7,2-7,4, но могут расти в интервале 5—8,5. Первые признаки роста на среде Китта—Тароцци могут проявляться уже через 1-2 ч особенно при 43 °С; последние проявляются появлением пузырьков газа из-под кусочков печени при встряхивании. Помутнение среды и активное газообразование можно наблюдать через 4—8 ч культивирования.
Биохимическая активность.Расщепляет с образованием кислоты и газа глюкозу, ксилозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, раффинозу, маннозу, крахмал, гликоген и инозит; глицерин разлагают не все штаммы; не сбраживает маннит, дульцит; редко ферментирует салицин и инулин. От прочих клостридий отличается способностью восстанавливать нитраты, расщеплять лактозу, образовывать лецитиназу. Протеолитическая активность слабая; разжижает желатину, не разлагает казеин; только некоторые штаммы медленно разжижают свернувшуюся сыворотку. Интенсивно створаживают молоко с образованием крупноячеистого губчатого сгустка уже через 3 ч, феномен известен как «штормовая реакция».
Антигенная структура.Выделяют 6 серова-ров (А, В, С, D, E, F), различающихся по антигенным свойствам продуцируемых экзотоксинов. Все серовары образуют а- токсин (лецитиназу). Тип А включает много подтипов, идентифицируемых в РА, что облегчает диагностику в случаях пищевых токсикоин-фекций и анаэробных раневых инфекций.
Факторы патогенности.Для человека патогенны С. perfringens типов А, С и D; типы В,
С, D и Е вызывают аналогичные заболевания у сельскохозяйственных животных (см. табл. 16.31). Возбудитель образует как минимум 12 идентифицированных токсинов и ферментов, играющих роль в патогенезе газовой гангрены (табл. 16.28). Мишенью для действия основных токсинов являются биологические мембраны клеток; в основе механизма поражения лежат ферментативные процессы, катализирующие гидролитическое расщепление и нарушение клеточной проницаемости, что в последующем ведет к отеку в области поражения тканей, который сопровождается снижением окислительно-восстановительного потенциала в клетках, активацией эндогенных протеаз, приводящих к аутолизу тканей, характерному для газовой гангрены.
С. perfringens типов А и С образуют энтеро-токсин, вызывающие пищевые токсикоин-фекции; по своей природе это термолабильный протеин, продуцируемый при споруляции бактерий в толстой кишке; его практически не образуют лабораторные культуры, и он быстро разрушается при термической обработке пищевых продуктов, что значительно затрудняет его биохимическое изучение и идентификацию. Энтеротоксин вызывает рвоту и диарею, оказывает летальное действие, а также обуславливает появление эритематоз-ной кожной сыпи у лабораторных животных. Диарея развивается вследствие потери воды и электролитов за счет дилатации и повышения проницаемости капилляров.
Экологическая ниша.С. perfringens широко распространен в окружающей среде; его выделяют из воды, почвы, сточных вод; часто обитает в кишечнике людей и животных. Наиболее часто в почве и испражнениях обнаруживают серотип А. Место постоянного обитания представителей серотипа С, ответственных за пищевые токсикоинфекции у человека, пока не установлено; возбудителей выделяют из мясных и рыбных консервов и органов людей, скончавшихся от «некротического энтерита».
Устойчивость в окружающей среде. Споры способны длительное время сохраняться в окружающей среде; способны вегетировать в почве, богатой гумусом. С. perfiingens типа А относительно толерантен к кратковременным
кислородным воздействиям, хотя имеются чувствительные штаммы, погибающие при воздействии 02 на культуру в течение 3 мин. При варке мяса некоторые споры погибают в течение нескольких мин, тогда как другие выдерживают кипячение в течение 2 ч; споры, находящиеся в жировой ткани, выживают на протяжении длительного времени. Термоустойчивость спор серотипов В и D относительно невысока (погибают при кипячении в течение 15—30 мин), споры типов А и С более устойчивы и выживают при кипячении и даже автоклавировании в течение 1—6 ч. Споры отличает высокая устойчивость к химическим и физическим воздействиям.
16.5.2.3.2. Clostridium novyi
Clostridium novyi (Clostridium oedematiens типа А) — наряду с С. perfringens основной возбудитель анаэробной раневой инфекции. В годы Второй мировой войны инфекции, вызванные С. novyi, составляли 42 % от всех регистрируемых случаев гангрены.
Морфология.Крупные или слегка изогнутые подвижные грамположительные палочки размером 4/10x1/2 мкм; перитрихи, имеют 20—25 жгутиков. Обладает выраженным полиморфизмом, некоторые штаммы образуют короткие цепочки или нити. В молодых культурах похожи на С. perfringens, но отличаются подвижностью. Молодые клетки хорошо окрашиваются основными анилиновыми красителями; бактерии из старых культур могут изменять отношение к окраске по Граму. Споры овальные, расположены субтерминально. На мясных и казеиновых средах спорообразование наблюдают на 2—6-е сутки; на обогащенных средах спорообразование менее обильное и более медленное.
Культуральные свойства. Облигатный анаэроб. На плотных средах в анаэростате уже через 48 ч образует круглые сочные сероватые полупрозрачные колонии, иногда с зернистой поверхностью и неровными краями. С. Novyi типов А, В и С имеют тенденцию к образованию дочерних и подвижных колоний. На кровяном агаре образуют шероховатые колонии; у бактерий типов А, В и С они окружены зоной гемолиза. Бактерии типа D эритроциты не разрушают. Колонии типов А и В, выросшие на кровяном агаре с бензидином, быстро
чернеют на воздухе за счет образования Н202. В глубине агара образуются колонии, напоминающие линзы, комочки ваты, снежные хлопья и т.д.; часто окрашены в желтоватый или коричневатый цвет. На жидких средах растет сравнительно медленно и вызывает сдвиг рН в кислую сторону за счет образования органических кислот и H2S. На МПА с 0,5 % глюкозы или 3 % декстрина при 37 "С происходит равномерное помутнение среды, затем образуется рыхлый осадок.
Биохимическая активность.Типы А, В иС ферментируют глюкозу, фруктозу и мальтозу, а тип D — только глюкозу; все штаммы разлагают глицерин. Показано наличие у типа А глицерокиназы, а-амилазы и al-глюкозидазы, что указывает на способность разлагать полисахариды путем гидролиза и фосфорилирования. Протеолитические свойства выражены слабо; все штаммы разлагают желатину, медленно сворачивают молоко, но не разлагают свернувшийся яичный белок; тип D образует индол и H2S.
Антигенная структура.У штаммов типов А, В и D представлена двумя одинаковыми соматическими АГ, находящимися в различных соотношениях; сыворотки к штаммам типа В могут иногда перекрестно реагировать с АГ других типов.
Факторы патогенности.Вырабатывает 8 токсинов, определяющих патогенность (табл. 16.29); у- и (3-токсины не тождественны одноименным токсинам С. perfringens, но соответствуют alfa-токсину. Образует гиалуронидазу, идентичную nu-токсину С. perfringens.
Устойчивость в окружающей среде.Широко распространены в природе; выделяются из
почвы и ЖКТ здоровых животных. Устойчивы к нагреванию, выживают при кипячении в течение 1 —2 ч; в костях животных сохраняются до 10 лет. Споры отличает высокая устойчивость к химическим и физическим воздействиям.
16.5.2.3.3. Clostridium histolyticum
Морфология.Палочка размером 3/5 х х 0,5/0,8 мкм; грамположительна (в старых культурах может быть грамотрипательной). В мазках часто образует пары или цепочки. Очень подвижна в молодых культурах, клетки из старых культур неподвижны, также известны изначально неподвижные штаммы. Почти на всех средах быстро образует субтерминальные споры с трехслойной оболочкой, не деформирующие клетку.
Культуральные свойства.Строгий анаэроб, растет при давлении 3—15 мм рт. ст. (оптимум — 8 мм рт. ст.), обладает аэротолерантностью. В аэробных условиях растет плохо и не образует спор. В анаэробных условиях на кровяном агаре образует прозрачные выпуклые колонии диаметром 0,5—1 мм, окруженные тонкой зоной гемолиза. При продолжительном отборе можно получить штаммы, формирующие колонии в виде «головы Медузы». В толще агара неподвижные штаммы образуют «пушинки» с уплотненным центром, подвижные — чече-вицеобразные колонии или колонии с протуберанцем. Вызывают сплошное помутнение жидких сред с протеолизом кусочков мяса и печени на дне. Через 2 суток среда становится прозрачной, а на дне образуется осадок, рН почти не меняется; запах отсутствует.
Биохимическая активность.Инертен к углеводам; к ферментации без образования кислоты способны лишь некоторые штаммы; не образует индол, вырабатывает в больших количествах сероводород. Проявляет выраженные протеолитические свойства — разлагают желатину, свернувшуюся сыворотку, яичный белок и коллаген (табл. 16.30).
Факторы патогенности.Продуцирует 5 типов токсинов:
• а-токсин (основной токсин), проявляющий летальное и некротическое действие;
• beta-токсин (коллагеназа), расщепляющий азоколл и желатину;
• gama-токсин (протеиназа), активируемый восстановителями и не разрушающий натив-ный коллаген, но расщепляющий азоколл, желатину и казеин;
• delta-токсин (эластаза), проявляющий аналогичную активность;
• eps-токсин, проявляющий 02-зависимую гемолитическую активность (лабилен к кислороду, в антигенном отношении близок к стрептолизину О).
У человека С. histolyticum иногда вызывает газовую гангрену, обычно в ассоциации с другими анаэробами.
Устойчивостьвокружающейсреде.Экологичес-кая ниша — почва. Споры способны длительное время сохраняться в окружающей среде; вегетативные формы остаются жизнеспособными в аэробных условиях в течение 10 ч. Споры отличает высокая устойчивость к химическим и физическим воздействиям.
16.5.2.3.4. Clostridium septicum
Морфология.Полиморфные подвижные палочки размером 4/5х0,8 мкм; в тканях способны образовывать нити длиной до 500 мкм. В культурах клетки могут быть яйцевидные, вере-теновидные, образуют цепочки. При контакте с кислородом теряют подвижность, но не так быстро, как С. oedematiens. Через 24 ч культивирования образуют субтерминальные споры.
Культуральные свойства.Строгие анаэробы; растут при давлении 8—15 мм рт. ст. (выдерживают до 25 мм рт. ст.). На поверхности твердых сред образуют блестящие полупрозрачные колонии с неровными краями, имеют тенденцию к ползучему росту. На агаре Цейсслера
через 48 ч палочки образуют сплошной нежный налет, окруженный зоной гемолиза. В столбике 1% агара образуют колонии с отходящими переплетающимися нитями, на 2% агаре колонии имеют вид дисков, иногда с протуберанцем. На среде Китта—Тароцци дает обильный рост; газообразование вариабельное; через 2 суток образует осадок.
Биохимическая активность.Ферментирует некоторые углеводы, не разлагает сахарозу, что используют для дифференциальной диагностики с С. chavoei; протеолитическая активность выражена умеренно (см. табл. 16.30).
Факторы патогенности.Продуцирует 4 экзотоксина:
• аlfa-токсин, проявляющий летальную, некро-тизирующую и гемолитическую активность;
• beta-токсин, обладающий свойствами ДНКазы;
• gama-токсин (гиалуронидаза);
• delta-токсин, проявляющий свойства 02-ла-бильного гемолизина.
Совместно с другими анаэробами вызывает газовую гангрену у человека и животных.
Устойчивость в окружающей среде.Экологическая ниша — почва. Споры способны длительное время сохраняться в окружающей среде; вегетативные формы остаются жизнеспособными при доступе кислорода в течение 10 ч. Споры отличает высокая устойчивость к химическим и физическим воздействиям.
16.5.2.3.5. Clostridium chavoei
Морфология.Грамположительные спорооб-разующие палочки.
Культуральные свойства.На среде Цейсслера образует характерные колонии, напоминающие виноградные листья, нежного фиолетового цвета; на средах с кровью дает alfa-гемолиз. На среде Китта—Тароцци характерен обильный рост, споры образует через 24 ч, колонии не имеют неприятного запаха.
Биохимическая активность.Молоко створаживает за 3—6 суток; казеин и свернувшуюся сыворотку не разжижает; желатину не гидро-лизует.
Антигенная структура.По антигенным свойствам мало отличается от С. septicum.
Факторы патогенности.По биологическим свойствам мало отличается от С. septicum.
Экологическая ниша. Почва.
16.5.2.3.6. Clostridium sporogenes
Морфология.Подвижные палочки размером 3/6x0,5 мкм.
Культуральные свойства.Напоминают другие клос-тридии.
Биохимическая активность.Проявляют выраженные протеолитические свойства и инертны в отношении большинства углеводов (см. табл. 16.30).
Антигенная структура.Мало изучена.
Факторы патогенности.Не образуют токсинов, участвующих в патогенезе анаэробной раневой инфекции. При смешанных анаэробных инфекциях увеличивают вирулентность Clostridium perfringens и Clostridium septi-сит; при попадании жизнеспособных спор в мышцы способны вызывать гнойные процессы.
Экологическая ниша.Почва.
16.5.2.3.7. Clostridium sordellii
Морфология.Подвижная палочка размером 2/4x0,6-1 мкм.
Культуральные свойства.Факультативный анаэроб; на плотных питательных средах уже через 24-48 ч образует выпуклые сероватые колонии с неровными краями. На агаре с эритроцитами лошади дает узкую зону гемолиза, а на шоколадном агаре образует узкую зону просветления (за счет протеолиза). На агаре с куриным желтком, молоком и лактозой формирует зону опалесценции вокруг колоний. На жидких мясных средах дает интенсивный рост, часто с образованием слизи.
Биохимическая активность.Ферментирует многие углеводы, но не лактозу и сахарозу, проявляет выраженные протеолитические свойства (см. табл. 16.30).
Антигенная структура.Изучена недостаточно.
Факторы патогенности.Вирулентные штаммы продуцируют высоколетальный некротизирующий токсин, напоминающий а-токсин С. novyi; также образует лецитиназу С, серологически сходную с лецитина-зой С. perfringens типа А, но проявляющую меньшую активность; продуцирует гемолизин типа 9-токсина С. perfringens типа А и 8-токсина С. novyi и С. septicum.
Экологическая ниша.Почва.
16.5.2.3.8. Clostridium fallax
Морфология.Подвижная прямая палочка размером 2/5-5x0,5 мкм с закругленными концами.
Культуральные свойства.Строгий анаэроб; на поверхности агара через 24—48 ч образует мелкие плоские прозрачные колонии с неровными краями; на кровяном агаре дает узкую полоску гемолиза.
Биохимическая активность.Ферментирует углеводы; проявляет умеренную протеолитическую активность (см. табл. 16.30), сворачивает молоко с образованием кислоты. Не образует H2S, индола, не восстанавливает нитраты.
Антигенная структура.Изучена недостаточно.
Факторы патогенности.Вырабатывает летальный токсин, не идентифицированный до настоящего времени.
Экологическая ниша.Почва.
16.5.2.3.9. Clostridium bifermentans
Морфология.Неподвижная палочка размером 4/8x1/-1,5 мкм, в молодом возрасте грамположи-тельная; в мазках располагается цепочками. Быстро образует центральные или субтерминальные споры, не деформирующие клетку.
Культуральные свойства.На агаре Цейсслера обуславливает нежный рост, напоминающий рост С. oede-matiens. На средах с кровью дает а-гемолиз; проявляет лецитиназную активность (лецитиназа С). На среде Китта—Тароцци газ не образуется, через 24 ч культивирования появляется осадок. Рост сопровождается гнилостным запахом.
Биохимическая активность.Разжижает свернувшуюся сыворотку, гидролизует желатину, ферментирует глюкозу, левулезу и мальтозу.
Антигенная структура.Изучена недостаточно.
Факторы патогенности.Образует лецитиназу С.
Экологическая ниша.Почва.
Дифференциальные признаки клостридий газовой гангрены представлены в табл. 16.30.
Эпидемиологиягазовой гангрены. Естественный резервуар и источник возбудителя инфекции — почва. Механизм пе-
редачи — контактный, путь — раневой. Восприимчивость — высокая; заболеваемость значительно возрастает во время военных действий у раненых; основная группа риска в мирное время — работники сельского хозяйства, дорожные и строительные рабочие, шахтеры. В мирное время заболеваемость возрастает при стихийных бедствиях, таких как землетрясения; часто сопровождает краш-синдром.
Патогенез газовой гангрены. Все виды травматизма могут служить причиной развития газовой гангрены. Возникновению последней способствует загрязнение ран землей, наличие обширных очагов разможжения и некроза тканей. В некротизированных тканях в условиях гипоксии споры прорастают и образуют вегетативные формы. Газовая гангрена — токсинеми-ческая инфекция, основными патогенетическими факторами которой являются гангренозные токсины и ферменты агрессии, повреждающие здоровые ткани и вызывающие тяжелую общую интоксикацию организма. Возбудители продуцируют экзотоксины, которые поступают в кровь, распространяются по организму по кровеносным и лимфатическим сосудам и достигают мышечной ткани. Лецитиназа расщепляет лецитин, являющийся важным компонентом мембран клеток. Образующийся в результате биохимической активности клостридий газ расслаивает мышцы, а гиалуронидаза и коллагена-за увеличивают проницаемость тканей.
Клиникагазовой гангрены. Инкубационный период составляет 1—3 дня. Клиническая картина разнообразна, проявляется отеком, газообразованием в ране, выраженной интоксикацией организма. Для поражений характерны некроз тканей и образование газа с гнилостным запахом. Характерная особенность гистологических препаратов из очагов поражения — практически полное отсутствие фагоцитов в очаге некротических поражений.
С. perfringens у человека вызывает два типа поражений — газовую гангрену и пищевые токсикоинфекции (табл. 16.31).
Газовая гангрена развивается при попадании С. perfringens на раневые поверхности, где бактерии активно размножаются в условиях пониженного содержания кислорода. Споры микробов могут быть занесены в раны из внешней среды, а также с кожи или из ЖКТ пациента.
Пищевые токсикоинфекции, вызванные серотипа-ми А и С, приобретают все большую значимость, представляют актуальную проблему для здравоохранения большинства стран мира. С. perfringens типа А вызывает преимущественно токсикоинфекции легкой и средней тяжести; инкубационный период составляет 6—24 ч; заболевания развиваются остро, с ощущениями боли в животе, рвотой (иногда с кровью) и диареей до 20 раз в сутки; общие нарушения проявляются слабостью, головокружениями; повышение температуры наблюдают редко. Симптомы исчезают в последующие 12—24 ч. Летальные исходы наблюдают редко, обычно у ослабленных пациентов — пожилых лиц, хронических больных и детей с нарушениями питания. Следует помнить о способности микробов проникать в кровоток и вызывать тяжелый анаэробный сепсис. Более тяжело протекает некротический энтерит, вызванный штаммами серотипа С. При острых формах болезнь может закончиться смертью пациента в течение 12—24 ч; симптомы аналогичны таковым при поражениях, вызываемых бактериями серотипа А, и обусловлены действием -токсина; подобные пациенты нередко попадают на операционный стол с диагнозом «кишечная непроходимость»; смертность достигает 35 %. Заболевание регистрируют достаточно редко, большое число случаев наблюдали в Германии после Второй мировой войны (в 1945—1948 гг. — 1056 случаев), а в настоящее время периодически отмечают в Новой Гвинее, что связано с особенностями национальной кухни.
Иммунитет.Естественный иммунитет у человека к газовой гангрене отсутствует. Перенесенное заболевание не оставляет антитоксического иммунитета, поскольку токсиген-ная доза гангренозных токсинов во много раз ниже иммуногенной дозы. Ведущая роль в защите от токсинов принадлежит антитоксинам.
Микробиологическая диагностикагазовой гангрены. Исследуемый материал — поражен-
ные и некротизированные ткани, взятые на границе со здоровыми, экссудат, гной, раневое отделяемое, кровь. От трупов берут кусочки мышц, печени, селезенки; кровь из сердца, раневое отделяемое. При пищевых токсикоин-фекциях исследуют рвотные массы, фекалии, кровь, остатки пищевых продуктов.
Для диагностики используют бактериоско-пический, бактериологический и биологический методы.
Готовят мазки из исследуемого материала, окрашивают по Граму, микроскопируют, обращая внимание на наличие грубых грампо-ложительных палочек или отдельных спор.
Сеют на казеиновые или мясные жидкие и плотные среды (кровяной агар, среда Вильсона—Блера); посевы инкубируют в ана-эростате при 37 °С. Выделяют и идентифицируют чистую культуру по общепринятой схеме. Фильтраты культур или центрифугаты проверяют на наличие токсина в опытах на мышах либо морских свинках или используют для проведения реакции нейтрализации с диагностическими сыворотками С. perfringens, С. septicum, С. sordellii, С. oedematiens A и В. Необходимо четко идентифицировать роль С. perfringens в развитии тех или иных клинических состояний, так как микроб часто входит в состав нормальной микрофлоры кишечника и его содержание может достигать 10^3 микробных тел или 10 спор в 1 г фекалий здорового человека.
Для ускоренной диагностики исследуемый материал центрифугируют и с центрифугатом проводят реакцию нейтрализации со специфическими антитоксическими сыворотками.
К быстрым методам диагностики относится выявление лецитиназы в фильтратах и нейтрализация ее специфическими сыворотками.
При пищевых токсикоинфекциях проводят бактериологическое исследование с целью выделения и идентификации возбудителя, определения массивности обсеменения исследуемого материала данным микробом и типа выделяемого им токсина.
Лечение.Направлено на нейтрализацию гангренозных токсинов антитоксином; хирургическое удаление некротизированных тканей. Применяют антитоксические сыворотки, антибиотики и гипербарическую ок-сигенацию.
Профилактика.При травмах проводится хирургическая обработка раны; соблюдение правил асептики и антисептики при операциях; борьба с травматизмом.
Для специфической профилактики проводится плановая или экстренная иммунизация. Для создания искусственного активного иммунитета применяют секстанатоксин, в состав которого кроме столбнячного анатоксина и ботулинических анатоксинов типа А, В, Е входят анатоксины С. perfringens и С. oedematiens.
16.5.2.4. Клостридии диффициле {Clostridium difficile)
Clostridium difficile открыта Холлом и О'Тулом в 1935 г.
Морфология.Грамположительные палочки с овальными спорами.
Культуральные свойства.Как у клостридии других видов.
Биохимическая активность— см. табл. 16.27.
Антигенная структура.Изучена недостаточно.
Факторы патогенности.Бактерии продуцируют два вида экзотоксина: токсин А (энтеро-токсин) с Мг 44 000—50 000 Да (оказывает диа-реягенное и летальное действие, стимулирует гуанилатциклазу) и токсин В (цитотоксин) с Мг 47 000 Да (оказывает летальное действие, значительно превосходящее действие токсина А; нарушает функции мембран с потерей К+ и фибронектина; ингибирует синтез белка).
Устойчивость в окружающей среде.Обитает в толстом кишечнике человека. Споры обладают высокой устойчивостью к факторам окружающей среды. Проявляет высокую Резистентность к антибиотикам широкого спектра действия, что создает предпосылки для обширной колонизации кишечника и секреции больших доз токсинов, вызываю-
щих изменения кишечной стенки; чувствительна только к действию ванкомицина.
Эпидемиология.Носительство С. difficile особенно распространено у новорожденных (до 50 %), но именно у них наблюдают самый низкий уровень поражений. По мере развития нормальной микрофлоры (6—12 мес.) число носителей уменьшается; среди взрослых лиц не превышает 3 %. Псевдомембранозный колит — госпитальная инфекция. Среди новорожденных возможна контактная передача от ребенка ребенку или с руками персонала (при пеленании, кормлении и купании «одними и теми же руками»); среди взрослых доминируют контактно-бытовые пути госпитального распространения.
Патогенез.Возбудитель вызывает псевдомембранозный энтероколит на фоне нерациональной терапии антибиотиками (клиндами-цином, ампициллином и цефалоспоринами) и цитостатиками, вызывающими глубокий дисбаланс микрофлоры и колонизацию кишечника С. difficile.
Клиника.Псевдомембранозный энтероколит характеризуется образованием и выделением с калом пленчатого материала — структур, представленных фибрином и слизью. Больные жалуются на коликообразные боли в животе, температура тела может достигать 39 °С и выше. У больных профузные водянистые диареи; у 50 % пациентов выявляют лейкоциты в кале и лейкоцитоз.
Иммунитет.Не изучен.
Микробиологическая диагностика.Материалом для исследования служат фекалии. Для диагностики применяют бактериологический метод; выделяют возбудитель из фекалий. Для обнаружения токсина в фекалиях используют чувствительные культуры клеток (человеческие эмбриональные фибробласты и др.).
Лечение.Ванкомицин.
Профилактика.Специфическая профилактика отсутствует; не Специфическая профилактика сводится к рациональной антибиоти-котерапии и профилактике дисбиозов.
Дата добавления: 2016-02-04; просмотров: 1883;