СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА МЕТАЛЛОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЕ В АНАЛИТИЧЕСКОЙ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ (КРАТКИЙ ОБЗОР) 4 страница

У живых лиц экспертиза базируется на данных клинической диагностики и результатов химико-токсикологического исследования.

Порядок и правила медицинского освидетельствования регламентируются Приказом МЗ РФ № 308 от 14 июля 2003 г. «О медицинское освидетельствовании на состояние опьянения», Приказом МЗ № 06-14/33-14 (Методические указания) от 01.09.1988г. «Медицинское освидетельствование для установления факта употребления алкоголя и состояния опьянения»

Клиническая экспертиза ставит своей целью выявление медико-биологических синдромов, то есть сочетания целого ряда признаков и симптомов, специфичных для состояний опьянения разной тяжести. Отдельные проявления алкогольной интоксикации не являются специфическими, поэтому оценка производится по целому комплексу признаков, свидетельствующих о нарушениях в системах организма.

Освидетельствование основано на всестороннем клиническом обследовании с использованием необходимых лабораторных тестов, поэтому выполнять его должен только врач-нарколог, имеющий необходимую квалификацию.

Этиловый спирт обладает многообразным фармакологическим и токсическим действием на организм. Эффекты, вызываемые при его однократном введении и при систематическом приеме, могут существенно различаться, что важно учитывать для правильной квалификации состояний опьянения. Это обуславливает чрезвычайную сложность физиологического действия алкоголя, полиморфизм клинических проявлений и поведения индивида при алкогольной интоксикации. Отсюда возникает сложность квалификации состояний опьянения.

Клиническая диагностика состояний, обусловленных потреблением алкоголя, проводится на основании оценки психической сферы и поведения, выявления неврологических и сердечно-сосудистых нарушений. Как правило, при алкогольном опьянении отмечаются три симптомокомплекса.

Простые типы опьянения.

1. Алкогольная эйфория. Она возникает после приема сравнительно небольших доз алкоголя и непродолжительна - длится 1-3 часа. Основные признаки - повышенная речевая и моторная активность, расторможенность поведения.

2. Дисфорическое состояние - раздражительность, недовольство. Больные угрюмы, озлоблены, возможно агрессивное поведение.

3. Состояние психомоторной заторможенности: вялость, медлительность, сонливость, нарушение мышления и памяти. Такие расстройства часто возникают после употребления больших доз алкоголя.

Наряду с изучением психического состояния, важнейшее место в клиническом освидетельствовании занимает выявление нарушений со стороны нервно-двигательного аппарата. Характерным признаком является нарушение походки, координации, равновесия. Диагностической ценностью обладают симптомы, указывающие на нарушение в системе вегетативной регуляции покраснение склер глаз, тахикардия, гиперемия кожных покровов, изменение артериального давления и температуры тела.

В зависимости от характера и выраженности клинических проявлений выделяются следующие степени опьянения:

1. Легкая степень алкогольного опьянения устанавливается на основании выявления следующего симптомокомплекса:

• незначительные изменения психической деятельности (например, замкнутость, замедленное реагирование, вспыльчивость, демонстративные реакции, эйфория, эмоциональная неустойчивость, затруднение при концентрации внимания, отвлекаемость и др.);

• усиление вегето-сосудистых реакций (гиперемия кожи и слизистых, инъецированность склер, повышенная потливость, тахикардия и т.д.);

• отдельные нарушения в двигательной сфере (возможны изменения походки, пошатывания при ходьбе с быстрыми поворотами, неустойчивость в сенсибилизированной и простой позе Ромберга, неточность выполнения мелких движений и координаторных проб, горизонтальный нистагм при взгляде в сторону, положительная проба Ташена);

• запах алкоголя изо рта;

• положительные химические реакции на алкоголь, Содержание алкоголя в крови 0,5 - 1,5 % (определение методом ГЖХ).

2. Алкогольное опьянение средней степени устанавливается при выявлении следующих расстройств:

• выраженные изменения психической деятельности (поведение, сопровождающееся нарушением общественных норм, неправильная оценка ситуации, заторможенность, возбуждение с агрессивными или аутоагрессивными действиями и неадекватными высказываниями, эйфория, дисфория, нарушение последовательности изложения мыслей, фрагментарность высказываний, элементы персеверации, замедление и обеднение ассоциаций и т.д.),

• вегето-сосудистые расстройства (гиперемия или побледнение кожных покровов и слизистых, учащение пульса, дыхания, колебания артериального давления, потливости, слюнотечение, расширение зрачков, вялая фотореакция);

• двигательные и нервно-мышечные нарушения (выраженная дизартрия, неустойчивость при стоянии и ходьбе, отчетливые нарушения координации движений, снижение сухожильных рефлексов и болевой чувствительности, горизонтальный нистагм);

• резкий запах алкоголя изо рта;

• положительные химические пробы на этиловый спирт. Содержание алкоголя в крови 1,5- 2,5% (определение методом ГЖХ).

3. Тяжелая степень алкогольного опьянения устанавливается на основании выявления следующих нарушений:

• тяжелые расстройства психической деятельности (нарушение ориентировки, резкая заторможенность, сонливость, малая доступность контакту с окружающими, непонимание смысла вопросов, отрывочные бессмысленные высказывания);

• выраженные вегето-сосудистые нарушения (тахикардия, артериальная гипотония, дыхание хриплое из-за скопления слизи в полости рта и носоглотки, бледность кожи и слизистых, потливость, в ряде случаев непроизвольное мочеиспускание, слабая реакция зрачков на свет);

• тяжелые двигательные и нервно-мышечные нарушения (неспособность самостоятельно стоять и выполнять целенаправленные действия, подавление сухожильных рефлексов, снижение корнеальных рефлексов, иногда спонтанный нистагм);

• резкий запах алкоголя изо рта;

• положительные химические пробы на этиловый спирт. В крови, как правило, 2,5 - 3% алкоголя.

4. Алкогольная кома диагностируется при следующих симптомах:

• отсутствие признаков психической деятельности (бессознательное состояние, отсутствие реакций на окружающее);

• тяжелые нарушения вегетативной регуляции и деятельности сердечно - сосудистой системы (коллаптоидное состояние, непроизвольное мочеиспускание и дефекация, расстройства дыхания);

• тяжелые нервно-мышечные нарушения (резкое понижение мышечного тонуса, отсутствие болевых, роговичных, сухожильных рефлексов, в ряде случаев - патологические рефлексы, гиперкинезы и др.);

• резкий запах алкоголя;

• концентрация алкоголя в крови свыше 3,0 -5,0%.

Следует подчеркнуть, что диагностика тяжелой степени опьянения и тем более алкогольной комы является абсолютным показанием для оказания медицинской помощи. При установлении факта употребления алкоголя и степени алкогольного опьянения диагностическое значение, помимо клинических симптомов, имеют также лабораторные химические пробы и газохроматографическое определение этанола.

При экспертизе алкогольного опьянения наряду с клинической диагностикой применяются химические методы определения алкоголя в выдыхаемом воздухе.

Для предварительного обнаружения метилового и этилового спиртов в моче и крови применяются так называемые предварительные пробы.

Для этого к 1 мл мочи добавляют 10% раствор калия дихромата в 50% растворе кислоты серной. При наличии спиртов протекает реакция их окисления, а Сr+6 восстанавливается до Сr+3, при этом раствор окрашивается в зеленый цвет. Поскольку реакция эта неспецифична, то положительный результат требуется подтвердить дополнительными пробами: кровь (5 мл) или мочу (10 мл) подвергают перегонке с водяным паром, а затем проделывают реакцию образования йодоформа на этанол и реакцию окисления метанола до формальдегида.

При экспертизе алкогольного опьянения наряду с клинической диагностикой применяются химические методы определения алкоголя в выдыхаемом воздухе.

1. Проба Рапопорта A.M. - наиболее проста и доступна для применения в любом медицинском учреждении.

В две чистые сухие пробирки наливают по 2 мл очищенной воды. В одну из них опускают пипетку с узким вытянутым концом, и испытуемый пропускает через нее 1,9-2,1 л выдыхаемого воздуха. Объем воздуха может дозироваться продолжительностью выдоха или с помощью дозирующего устройства. В первом случае для продувания воздуха используют пипетку типа пастеровской и воздух продувают в течение 20-30 секунд.

Проходя через воду, алкоголь, содержащийся в выдыхаемом воздухе, растворяется в ней, и затем наличие его определяется с помощью следующей реакции окисления:

В обе пробирки приливают осторожно по 20 капель химически чистой концентрированной серной кислоты и после этого по 1 капле 0,5% свежеприготовленного раствора калия марганцовокислого. Необходимо тщательное выполнение технологии проведение пробы: соблюдение последовательности операций, использование свежеприготовленных дистиллированной воды и 0,5% раствора перманганата калия, чисто вымытых и высушенных пробирок и пипеток, шлангов, проведение реакции в контрольной пробирке.

При полном или частичном обесцвечивании раствора пробу через 15-20 минут проводят повторно. Полное обесцвечивание раствора за 1-2 минуты при повторной пробе свидетельствует о наличии экзогенного алкоголя в выдыхаемом воздухе, что при точном соблюдении методики исследования может подтвердить факт потребления испытуемым спиртных напитков.

Если при повторной пробе полного обесцвечивания раствора в течение 2 минут не наступило, результаты пробы расцениваются как отрицательные.

Изменение цвета раствора в контрольной пробирке свидетельствует о нарушении условий проведения пробы (загрязненная посуда, некачественные регенты) и опровергает результаты исследования.

2. Индикаторные трубки Мохова-Шинкаренко и «Контроль трезвости»

Эти трубки имеют сухую индикаторную набивку (реагент), что исключает необходимость в проведении каких-либо манипуляций с реактивами в момент экспертизы. Реагент индикаторных трубок состоит из носителя (силикагеля), импрегнированного раствором хромового ангидрида в концентрированной серной кислоте. При воздействии на реагент парами этилового спирта происходит реакция, во время которой этиловый спирт восстанавливают ионы шестивалентного хрома до ионов трехвалентного хрома, в связи с чем оранжевый или желтый цвет реагента изменяется на зеленый, что оценивается как положительная реакция.

Несмотря на некоторую неспецифичность метода, все же индикаторные трубки выгодно отличаются от других проб тем, что при воздействии на реагент парами некоторых веществ, лекарств и ядов отсутствует положительная реакция реагента, в то время как она имеет место в других пробах. Реагент изменяет цвет на зеленый при воздействии паров следующих веществ: этилового и метилового спиртов, эфиров, ацетона, альдегидов, сероводорода. При воздействии бензина, скипидара, уксусной кислоты, камфоры, а также фенола, дихлорэтана, реагент приобретает темно-коричневую или коричневую окраску. При воздействии паров валидола, ментола, воды, хлороформа, хлоралгидрата, керосина, аммиака, щелочи, этиленгликоля, окиси углерода, чистого выдыхаемого воздуха и слюны цвет реагента - оранжевый.

Ввиду гигроскопичности индикатора трубки вскрываются непосредственно перед употреблением. По этой же причине индикаторные трубки рассчитаны только для однократного употребления даже при наличии отрицательной реакции.

Индикаторные трубки, имеющие нарушение герметизации, а также изменившие окраску реагента на зеленый цвет, употреблению не подлежат.

3.Термокаталитический метод. Метод основан на сорбировании паров алкоголя выдыхаемого воздуха с последующей термодесорбцией и сжиганием на элементах чувствительного детектора. Этот принцип реализуется с помощью прибора для определения паров спирта в выдыхаемом воздухе - ППС-1.

Конструкция прибора обеспечивает подогревание выдыхаемого воздуха и отбор для анализа пробы именно альвеолярного воздуха. Калибровка приборе производится с помощью генератора контрольных смесей ГС-2, производящего пароспиртовоздушные смеси с определенным содержанием в них алкоголя.

Прибор ППС-1 более чувствителен и точен в сравнении с качественными реакциями.

Инструкция по медицинскому применению прибора ППС-1 с описанием порядка работы и указанием критериев выявления паров алкоголя в выдыхаемом воздухе входит в комплект прибора.

Следует отметить, что термокаталитический метод, реализуемый с помощью прибора ППС-1, также как и качественные пробы на алкоголь (Рапопорта, трубки Мохова-Шинкаренко и «Контроль трезвости»), неизбирателен по отношению к этиловому спирту. Указанные способы дают положительные результаты и при наличии в выдыхаемом воздухе ряда других летучих веществ, например, ацетона, эфиров, метанола. В связи с этим в практике экспертизе алкогольного опьянения перечисленные методы используются как предварительные пробы. Доказательное значение имеет лишь отрицательный результат качественных проб и исследований с помощью прибора ППС-1 или сочетание положительных реакций с клинической картиной опьянения. В ряде случаев у освидетельствуемого необходимо отбирать на исследование жидкие биологические среды (мочу, слюну или кровь) для проведения количественного определения алкоголя в них предпочтительно методом газовой хроматографии.

В настоящее время в сулебно-химическом анализе и в диагностике алкогольного опьянения наиболее предпочтительным, а иногда и единственным допустимым методом идентификации и количественного определения спиртов является метод газожидкостной хроматографии.

4.4.4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПИРТОВ

Количественное определение спиртов базируется на их общих реакциях: окислении до альдегидов и образовании сложных эфиров.

Из всех спиртов, имеющих токсикологическое значение, только этиловый подлежит обязательному количественному определению при судебно-химических исследованиях. Это обусловлено следующими причинами:

• чрезвычайно широкое распространение и особое токсикологическое значение этанола, о чем уже говорилось,

• возможность естественного образования этанола в организме, а именно: при брожении и гниении сахаристых веществ в желудке, при бактериальном распаде белковых веществ, при метаболическом превращении высших спиртов.

В судебно-химической практике для количественного определения этанола используют методы, основанные на окислении его до ацетальдегида и образовании сложного эфира с азотистой кислотой - этилнитрита. Известно много методов, в том числе химических, но в настоящее время наибольшее значение приобрели наиболее чувствительные и точные современные методы - биохимический и инструментальный (метод ГЖХ). На их рассмотрении мы и остановимся.

Метод биохимический (энзимный, ферментативный, метод АДГ) был разработан в 1951г. Бюхером и Родецки и применяется, в основном, в зарубежных лабораториях. Метод основан на реакции окисления этанола до ацетальдегида под действием фермента алкогольдегидрогеназы (АДГ).

Акцептором водорода в реакции служит дифосфопиридин-нуклеотид (ДПН), восстановленная форма которого обладает характерным светопоглощением при длине волны 366 нм. Измеряя оптическую плотность продукта реакции, можно рассчитать содержание этанола в исследуемом объекте, т.к. количество восстановленной формы ДПН, т.е. его оптическая плотность, пропорциональны количеству этанола. Расчет ведут по калибровочному графику, построенному по растворам этанола с известной концентрацией.

Судебно-химическая оценка метода.

Метод чувствителен (0,1-0,2%) на уровне естественного содержаний этанола в организме, специфичен, позволяет проводить серийные анализы, однако требует специального оборудования и особо чистых ферментов (АДГ и ДПН), в связи с чем в нашей стране не нашел применения.

Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) основан на переведении этанола в более летучее соединение - этиловый эфир азотистой кислоты (этилнитрит). Прежде, чем перейти к описанию этого метода, рассмотрим основные его теоретические положения и аппаратурное оформление и остановимся на преимуществах его перед химическими методами анализа.

Достоинства метода ГЖХ.

· Высокая разделяющая способность, что позволяет анализировать сложные многокомпонентные смеси. Это удобно в случаях комбинированных отравлений суррогатами алкоголя.

· Универсальность метода. Анализировать можно любые соединения при условии их летучести и термостабильности.

· Возможность качественного и количественного определения в одной пробе.

· Высокая чувствительность (10-5 – 10-9 г, т.е. на уровне естественного содержания этанола в организме).

· Возможность выполнения анализа в малом объеме образца (0,5-2 мл биожидкости).

· Точность метода (ошибка не превышает 1-2%). Экспрессность (время определения 3-5 минут) и возможность проведения, в связи с этим, серийных анализов.

· Простота и легкость выполнения.

· Доказательность и объективность. Результат в виде хроматограммы может быть приложен к акту судебно-химического исследования.

Теоретические предпосылки метода

Теоретические основы метода ГЖХ изложены Мартином и Синджем в 1941г., а для аналитических целей он предложен в 1952г. Мартином и Джеймсом. В химико-токсикологическом анализе метод применяется с 1968г., когда он был предложен В.Ф.Пономаревым для определения одноатомных спиртов C1 - С5 . В настоящее время эта методика расширена для определения алкилгалогенидов и других «летучих» ядов.

Газожидкостная хроматография является одним из видов распределительной хроматографии, где в качестве подвижной фазы используется газ, а неподвижной - жидкость, нанесенная в виде тонкой пленки на гранулы твердого носителя, которым заполняется колонка.

Разделение компонентов смеси основано на различии коэффициентов распределения этих компонентов между подвижной и неподвижной фазами, что приводит к различной скорости передвижения компонентов по колонке.

К = Cs /См,

где К - коэффициент распределения,

Cs - концентрация в стационарной (неподвижной) фазе,

См - концентрация в мобильной (подвижной) фазе.

Графическим отображением процесса разделения является хроматограмма, представляющая собой ряд хроматографических пиков, каждый из которых соответствует одному из разделяемых веществ.

Основные элементы хроматограммы

На хроматограмме отмечают ввод пробы. Первый пик - это пик несорбируемого компонента (воздух, растворитель), последующие пики - пики анализируемых веществ. В первую очередь появляются пики веществ с малой сорбируемостью неподвижной жидкой фазой, т.е. с малым коэффициентом распределения.

Нулевая линия - касательная к местам перегиба пиков (отражает сигнал детектора от газа-носителя).

Величина h - высота хроматографического пика - это перпендикуляр, опущенный от вершины пика на его основание.

Величина b1 - ширина пика у основания - часть нулевой линии, отсеченная касательными к сторонам пика.

Величина b - ширина пика на середине его высоты.

Площадь пика S численно равна площади треугольника:

S= b.h = ½.b1.h

Основные газохроматографические параметры

1. Время удерживания на колонке характерно для каждого из разделяемых веществ, поэтому служит качественной характеристикой вещества.

Время удерживания (абсолютное) - это отрезок времени, который проходит с момента ввода вещества в колонку до появления максимума пика вещества на хроматограмме. На хроматограмме оно отображается как расстояние от точки ввода пробы до выхода максимума пика вещества.

Чаще приходится использовать другие характеристики.

Исправленное время удерживания рассчитывается как разность абсолютного времени удерживания вещества и времени. удерживания несорбируемого компонента: t испр.=t а6с.- t н.к.

Время удерживания может меняться в зависимости от условий хроматографирования, поэтому более надёжной величиной является относительное время удерживания, которое рассчитывается как ношение абсолютного времени удерживания искомого вещества к времени удерживания вещества - метчика (стандарта): tотн. = t а6с./ t ст.

Относительное время удерживания является величиной более постоянной, так как на него меньше влияют условия проведения хроматографического процесса.

2. Удерживаемый объем также является качественной характеристикой анализируемого вещества.

Удерживаемый объем V - это объем газа-носителя, необходимый для вымывания всего количества вещества из колонки, который численно равен произведению скорости газа - носителя U на время удерживания t:

V = U^.t

Скорость газа измеряется в мл/мин, время удерживания - в минутах.

В зависимости от того, какое используется для расчета время удерживания - абсолютное или исправленное - получаем абсолютный или исправленный (приведенный) удерживаемый объем.

Удерживаемый объем, как абсолютный, так и исправленный, может меняться с изменением хроматографических условий, поэтому более постоянным является относительный удерживаемый объем, который рассчитывается как отношение абсолютного (или исправленного) объема к удерживаемому объему вещества-стандарта:

Vотн. = V а6с(испр)./ V ст.

Качественный анализ проводят, сравнивая время удерживания искомых веществ с временами удерживания стандартных веществ (эталонов). При совпадении этих параметров делают вывод о возможной идентичности этих веществ. Хроматографирование ведут в одинаковых условиях для стандарта и искомого вещества, используя 2-3 колонки различной полярности, что повышает надежность метода. Можно добавить предполагаемое (искомое) вещество в анализируемую смесь, и если при этом произойдет увеличение высоты и площади пика на хроматограмме (но не изменение времени удерживания), то можно предположить их идентичность.

Количественное определение разделенных компонентов смеси проводится по высоте или площади хроматографических пиков. Высоту используют в случае узких и симметричных пиков, а площадь - когда пик широкий и асимметричный. Расчет ведут по калибровочному графику зависимости концентрации от высоты или площади пиков.

Возможны два варианта количественного определения: метод абсолютной калибровки и метод с использованием внутреннего стандарта.

Более стабильные результаты дает метод внутреннего стандарта. При этом наряду с исследуемым веществом вводится вещество-стандарт в известном количестве, а при расчете учитывается соотношение высот (или площадей) соответствующих им пиков. Несмотря на колебания в работе прибора, соотношение высот пиков исследуемого вещества и внутреннего стандарта остается постоянным, что позволяет получать стабильные результаты.

К внутреннему стандарту предъявляется ряд требований:

• Вещество-стандарт не должно входить в состав исследуемой смеси.

• Внутренний стандарт по химическому строению должен быть близок к анализируемому веществу.

• Пик внутреннего стандарта должен хорошо отделяться от пика определяемого вещества, но находиться рядом с ним (иметь близкое время удерживания).

• Внутренний стандарт должен быть стабилен в условиях опыта.

Расчет концентрации вещества проводят по калибровочной кривой, откладывая на оси абсцисс концентрацию, а по оси ординат - отношение высот (или площадей) пиков исследуемого вещества и внутреннего стандарта.

Можно использовать метод расчета по котангенсу угла наклона калибровочной кривой, который рассчитывается заранее по растворам веществ с известной концентрацией. Метод позволяет производить расчет по рассчитанному значению котангенса без построения калибровочного графика, и дает более точное определение.

Аппаратурное оформление метода ГЖХ

Прибор для определения спиртов и других «летучих» ядов состоит из следующих блоков: баллон с газом-носителем, устройство ввода пробы, хроматографическая колонка (разделение веществ), детектор (регистрация сигналов веществ), самописец (хроматограмма).

1. В качестве газа-носителя используется инертный газ (азот, гелий, аргон), находящийся в баллоне под большим давлением, выполняющий роль подвижной фазы. К нему предъявляются следующие требования:

- инертность к материалу колонки, твердому носителю и неподвижной жидкой фазе, к исследуемым веществам;

- малая сорбируемостью на неподвижной жидкой фазе;

- обеспечение хорошего разделения веществ;

- газ должен соответствовать чувствительности и принципу работы детектора,

- газ должен обладать высокой теплопроводностью, быть достаточно чистым и доступным.

Рисунок 1. Схема газожидкостного хроматографа.

1- баллон с газом-носителем

2- устройство ввода пробы

3-хроматографическая колонка (разделение веществ)

4-детектор (регистрация сигналов веществ)

5-самописец (хроматограмма)

В химико-токсикологическом анализе в качестве газа - носителя чаще всего используются азот и гелий.

2. Хроматографические колонки представляют из себя U-образные или спиралевидные трубки из инертных материалов (металлические, стеклянные, полимерные) с внутренним диаметром 2-6 мм, длиной 2-6 метров. Основное требование к материалу колонки - инертность по отношению к газу-носителю, твердому носителю и неподвижной жидкой фазе, к исследуемым веществам. Набивка колонки состоит из твердого носителя (т.н.) и неподвижной жидкой фазы (н.ж.ф.), которая в виде точкой пленки наносится на гранулы т.н.

Большинство твердых носителей готовят из диатомитовой (диатомовой) земли, представляющей из себя разновидность окислов кремния, а также из огнеупорного кирпича (инзенский кирпич), который по свойствам близок к диатомитовой земле. В настоящее время существует большое количество синтетических т.н. различных марок. Чаще всего используется хроматон, хромосорб, полисорб, целит и др.

Основные требования к твердому носителю:

ü должен обеспечивать равномерное распределение на его поверхности н.ж.ф. (должен ею смачиваться);

ü должен иметь большую удельную поверхность (на 1г т.н. должна приходиться площадь от 1 до 20 м2);

ü должен быть инертным к материалу колонки, н.ж.ф., анализируемым веществам;

ü должен быть термостабильным при температуре опыта;

ü должен быть механически прочным, гранулы не должны ломаться при пересыпании.

В качестве неподвижной жидкой фазы обычно используют жидкие высокомолекулярные вещества (ВМС), имеющие высокую температуру кипения. Н.ж.ф. наносят тонким слоем на гранулы т.н. в количестве от 5 до 30% от его веса, чтобы не было слипания частиц т.н. К ВМС такого типа относятся полиэтиленгликоли ( полиэтиленгликоль с молекулярной массой 1000-1500, триэтиленгликоль), эфиры полиэтиленгликолей, смеси углеводородов; различные высококипящие масла и ряд других веществ (около 400 наименований). Характеристики различных н.ж.ф. приводятся в справочной литературе.

Требования к н.ж.ф,:

ü низкая летучесть (высокая температура кипения);

ü Термостабильность;

ü химическая инертность к материалу колонки, т.н., к веществам;

ü должна обеспечивать четкое разделение хроматографируемых веществ, т.е. вещества должны иметь в этой н.ж.ф. различные коэффициенты распределения и различные времена удерживания.