ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ СИСТЕМЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

После получения антител от иммунизированного животного и опре­деления их концентрации проводят оценку чувствительности и спе­цифичности антисыворотки. Концентрацию антител в сыворотке вначале определяют по связыванию меченого гормона, который применяли для иммунизации, причем используют разные разве­дения антисыворотки. Этот способ называется титрованием и под титром понимают концентрацию молекул антител в сыворотке. После нахождения той концентрации антител, которая в равновес­ных условиях связывает 30—40% меченого гормона, определяют чувствительность и специфичность антител. Получение и харак­теристика специфических систем для определения ХГЧ и инсули­на очень подробно изложена в других публикациях и может слу­жить ориентиром при получении других специфических радиоим­мунологических систем определения гормонов.

В реальных условиях антитела, получаемые для использования в клинических радиоиммунологических исследованиях, содержат популяцию иммуноглобулинов, обладающих различной специфич­ностью и сродством. Следует выбрать антисыворотку, содержащую популяцию антител с достаточно высоким сродством и специфич­ностью к тому гормону, который предстоит определить. На прак­тике выбрать такую популяцию антител с высоким сродством мож­но путем достаточно высокого разведения антисыворотки, чтобы роль других популяций антител, обладающих низшим сродством и, возможно, неспецифических, стала относительно несущественной.

Рис. 5—3. Кривая доза — реакция для ХГЧ-a, определяемого в гомологич­ной для него радиоиммунологической системе. Три кривые доза — реакция для ХГЧ-а получены в условиях, отличающихся только концентрацией антител к ХГЧ-a. При увеличении начального отношения В/Т с 25 до 60% вследствие увеличения концентрации антител точка на оси абсцисс, соот­ветствующая 50% снижению исходного связывания, сдвигается с 0,12 до 0,24 нг в пробе. 1 — В/Т=25%: 2 — В/Т=32%: 3 — В/Т =60%. Обозначения см. на рис. 5-1;

При выборе такого разведения антисыворотки, которое отлича­ется от использованного вначале для характеристики системы, необходимо заново определить ее чувствительность и специфич­ность, поскольку в ином разведении концентрация других по­пуляций антител может оказаться относительно высокой, и разве­денная антисыворотка будет обладать меньшей чувствительностью и специфичностью. Такая ситуация графически представлена на рис. 5—-3, на котором кривая доза—реакция для высокоочищенного лиганда смещена вправо, что отражает снижение чувствитель­ности системы по мере увеличения концентрации антител. Поскольку гормоны содержатся в крови в относительно низких концентрациях (10^–12—10^–9 М), необходимо отбирать антитела с высоким сродством и специфичностью. Сродство и специфичность каждого разведения антител нужно определять эмпирически. Боль­ше того, антисыворотка, получаемая от одного и того же животно­го в разное время после иммунизации, может обладать сущест­венно различающимися сродством и специфичностью по отноше­нию к гормону, которым иммунизировали животное.