ЙОДИРОВАНИЕ

Наиболее широко применяемым методом йодирования белков яв­ляется, вероятно, модифицированный метод, предложенный Green­wood, Hunter и Glover [27]. В нем используется окисляющий агент хлорамин Т, превращающий Na125I в свободный йод, который затем включается главным образом в остатки тирозина. При использова­нии этого метода могут йодироваться и остатки гистидина. Для сохранения максимальной иммунореактивности необходимо, чтобы на молекулу гормона приходился только один атом 131I или 125I, поскольку большая степень йодирования обычно снижает иммуно­логическую и биологическую активность гормона, изменяя его химические свойства [27].

В настоящее время применяют и другие способы йодирования. Второе по популярности место занимает, по-видимому, фермента­тивный метод с использованием лактопероксидазы [28, 29]. В при­сутствии перекиси водорода, добавляемой непосредственно в реак­ционную смесь, лактопероксидаза превращает Na125I в свободный йод, который избирательно включается в остатки тирозина. По­скольку перекись водорода является сильным окислителем, дейст­вие ее высоких концентраций на гормон может изменять его химические свойства; поэтому перекись водорода обычно добавля­ют двумя или тремя небольшими порциями, которые быстро ис­пользуются в реакции. Другим, более новым, но менее распростра­ненным методом йодирования, является метод, разработанный Bolton и Hunter [30]. В нем возможность вредных эффектов хлора­мина Т, бисульфита натрия и перекиси водорода, применяемых в двух других методах йодирования, на гормон сводится к минимуму. С помощью хлорамина Т йодируют промежуточное соединение-­сложный эфир, образованный N-оксисукцинимидом и 3-(р-оксифенил)-пропионовой кислотой, которое затем конденсируется с аминогруппами полипептидного гормона. Такой подход позволяет избежать воздействия на гормон сильных окислителей или восста­новителей. Эта методика несколько громоздка и пока не получила широкого распространения.

 

 

Рис. 5—2. Схематическое изо­бражение молекулы g-глобулина или антитела. Участки, «узнающие» гормон, могут содержать разные аминокис­лотные области легких и тя­желых цепей иммуноглобули­на. Легкие цепи ковалентно связаны с тяжелыми дисуль­фидными мостиками, обозна­ченными знаком S. Одна дисульфидная связь имеется и между двумя тя­желыми цепями. Недавно полученные данные указывают на Y-образную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, в которой участки коплексирования с антигеном расположены в верхней части этой фигуры.

 

В настоящее время используют не Na131I, a Na125I, поскольку он обладает значительно большим периодом полураспада: 59 дней вместо 6. Однако при работе с 125I необходима особая тщатель­ность, так как его удельная g-активность значительно ниже, чем у 131I. Стероидные гормоны и витамин D метят тритием, что позволя­ет получить более высокую удельную активность, чем с помощью метки 14C. Полипептиды, не имеющие в своем составе остатков ти­розина или гистидина, можно модифицировать, вводя или присо­единяя тирозин к их структуре без видимого изменения конформа­ции нативного соединения. Выбирают такие замещения, которые с наименьшей вероятностью изменят конформацию молекулы.









Дата добавления: 2015-01-19; просмотров: 423; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ


Поиск по сайту:

При помощи поиска вы сможете найти нужную вам информацию, введите в поисковое поле ключевые слова и изучайте нужную вам информацию.

Поделитесь с друзьями:

Если вам понравился данный ресурс вы можете рассказать о нем друзьям. Сделать это можно через соц. кнопки выше.
helpiks.org - Хелпикс.Орг - 2014-2020 год. Материал сайта представляется для ознакомительного и учебного использования. | Поддержка
Генерация страницы за: 0.013 сек.