ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эти методы представляют собой варианты описанных биологических исследований in vitro. Они обычно обладают большей чувствительностью, чем радиоиммунологические методы, но значительно более громоздки и дороги при расчете на одно определение. Результаты цитохимических биологических исследований количественно оценивают на гистологических срезах с помощью специального устройства — микроденситометра. Гистологические срезы готовят из специфических для данного гормона тканей или клеток-мишеней, до того подвергшихся воздействию разных концентраций стандартного и испытуемого гормона. С помощью денситометра сканируют область диаметром 250—300 нм для количественной оценки цветной реакции, обусловленной изменением редокс-состояния объекта под влиянием гормональной стимуляции. Для количественного анализа используют гистологические красители, чувствительные к этим изменениям.
Первая система цитохимического биологического исследования была разработана для АКТГ, и тканью-мишенью в этой системе служила кора надпочечников [8]. Другие способы биологического определения АКТГ либо слишком малочувствительны, либо требуют больших объемов плазмы. Таким образом, цитохимическое определение редокс-состояния ткани является ценным средством анализа нормальной и измененной функции системы гипоталамус—гипофиз—надпочечники по уровню АКТГ. Разработан цитохимический метод определения и Л Г, но при этом встретились существенные трудности, связанные со значительными колебаниями результатов разных определений и непостоянной чувствительностью объекта, что, возможно, отражает известные биологические расхождения у разных животных [9]. Чувствительные специфические цитохимические методы предложены для определения паратгормона, АД Г и тиротропина [10, 11]. При дальнейшем усложнении оборудования, которое позволит увеличить число исследований в одном определении, этот метод может найти более широкое применение. Он особенно привлекателен потому, что не требует использования радиоактивных соединений. Цитохимические методы нешироко применяются в клинике и используются в основном в качестве чувствительного способа в научных исследованиях.
Таблица 5—1. Биологические методы определения гормонов in vivo и in vitro
| Гормон | Метод | Показатель | Ссылка |
| АКТГ | In vivo (гипофизэктомированные крысы) | Снижение уровня аскорбиновой кислоты в надпочечниках | [12] |
| АДГ | In vivo (голодные крысы с водной нагрузкой) | Снижение скорости мочевыделения или увеличение удельной массы мочи | [13-16] |
| Холецистокинин | In vitro (полоски желчного пузыря кролика) | Сокращение полосок | [17] |
| ФСГ | In vivo (неполовозрелые самки крыс) | Увеличение массы яичников | [18] |
| СТГ | In vivo (гипофизэктомированные крысы) | Ширина некальнифицированного эпифизарного хряща большеберцовой кости | [19j |
| ЛГ/ХГЧ | In vivo (21-дневные гипофизэктомированные крысы) | Увеличение массы вентральной части предстательной железы | [1,2] |
| ЛГ/ХГЧ | In vitro (изолированные клетки Лейдига) | Увеличение синтеза и секреции тестостерона в культуральную среду | [6] |
| Паратгормон | In vitro (корковый слой почек крыс) | Образование цАМФ | [20] |
| Пролактин | In vitro (эксплантаты молочной железы мыши) | Активность лактозаминсинтетазы или синтез фосфопротеина | [21] |
| Ренин | In vitro (активность ренина) | Образование ангиотензина I из субстрата ренина | [22] |
| Соматомедин | In vitro (тазовые рудименты 11-дневных куриных эмбрионов) | Включения 35S-сульфата | [24] |
| ТТГ | 1. In vivo (интактные мыши, получившие предварительно 131I и тироксин) | 1. Высвобождение 131I из щитовидной железы в кровь | [25] |
| 2. In vitro (цитохимический, сегменты щитовидной железы морской свинки) | 2. Активность лизосомной нафтиламидазы | [11] |
В табл. 5—1 перечислены различные биологические методы in vivo и in vitro, применяемые для определения полипептидных гормонов. Для многих гормонов специфические чувствительные методы биологического определения не разработаны.
Дата добавления: 2015-01-19; просмотров: 905;