ЭФФЕКТ СЫВОРОТОЧНЫХ БЕЛКОВ

Поскольку между различными стероидами, между тироксином и трийодтиронином и некоторыми их метаболитами и между различ­ными формами витамина D отмечается выраженная структурная гомология, не всегда возможно получить антисыворотку, доста­точно специфическую, чтобы без предварительного применения методов экстракции и разделения избирательно определять эти гормоны и их метаболиты. Некоторые гормоны циркулируют в кро­ви, будучи связанными со специфическими белками-переносчика­ми или более рыхлой связью с альбумином. Для того чтобы избе­жать загрязнения радиоиммунологической системы связывающими белками сыворотки, необходимо вначале экстрагировать гормон соответствующим растворителем. Начальную экстракцию следует проводить и при малой специфичности антител к гормону. В неко­торых случаях может оказаться достаточной дифференциальная экстракция, но в других необходимо произвести хроматографическое разделение гормонов. К наиболее распространенным средст­вам разделения структурно близких стероидов относятся тонко­слойная хроматография и хроматография на колонках сефадекса LH-20. Поскольку крупные полипептидные гормоны циркулируют в крови, не будучи связанными с белками-переносчиками, началь­ный этап экстракции в этом случае не нужен, и аликвоту сыворот­ки можно прямо помещать в пробирку для анализа. Однако содер­жащиеся в сыворотке протеазы могут обусловить занижение кон­центрации некоторых полипептидных гормонов. Если разрушение гормона существенно изменяет его структуру, он может и не реа­гировать с антителами. В результате появляется необходимость добавления в пробу ингибиторов ферментов, чтобы противодейст­вовать эффекту протеаз. К ингибиторам протеаз, добавляемых в сосуды с пробами на АКТГ, глюкагон и другие гормоны, которые могут подвергаться быстрой протеолитической деградации, отно­сятся трасилол и бензамидин.

В отношении некоторых полипептидных гормонов отмечаются неспецифические эффекты сывороточных белков. Эти неспецифи­ческие белковые эффекты можно нивелировать, добавляя пустую сыворотку в пробирки для исследования, не содержащие сыворот­ки, с тем, чтобы все пробирки содержали сравнимые концентрации мешающих определению сывороточных белков. Каждую антисыворотку можно эмпирически проверять на неспецифический эффект белка в отношении реакции антиген—антитело.