ПРАВИЛА ПОЛЬЗОВАНИЯ ФАРМАКОПЕЙНЫМИ СТАТЬЯМИ 56 страница

Хроматографируют раствор сравнения А, раствор сравнения Б и испытуемый раствор. Время регистрации хроматограммы испытуемого раствора должно не менее чем в 4 раза превышать время удерживания основного пика.

Площадь пика любой посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,3%); сумма площадей всех пиков посторонних примесей должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,5%).

Потеря в массе при высушивании. Около 1 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Бактериальные эндотоксины (альтернативный метод). Не более 16,7 ЕЭ на 1 мг субстанции.

Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовления инъекционных лекарственных форм.

Пирогенность (альтернативный метод). Тест-доза 0,5 мг субстанции в 1 мл воды для инъекций на 1 кг массы животного.

Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовления инъекционных лекарственных форм.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,4 г (точная навеска) субстанции помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 40 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 10 мл раствора ртути окисной ацетата, 5 мл уксусного ангидрида и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 49,11 мг C27H38N2O4 x HC1.

Хранение. Список Б. В сухом, защищенном от света месте.

ГАЛОПЕРИДОЛ (ФС 42-0225-07)

4-[4-Гидрокси-4-(4-хлорфенил)пиперидино]-4'-фторбутирофенон

C21H23ClFNO2 М.м. 375,87

Содержит не менее 99,0% и не более 101,0% C21H23CIFNO2 в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте 96%, растворим в хлороформе.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать спектру стандартного образца галоперидола.

0,01 г субстанции растворяют в смеси спирт 96% - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (9:1) и разбавляют той же смесью до 50 мл. 1 мл полученного раствора разбавляют смесью спирт 96% - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (9:1) до 100 мл. Ультрафиолетовый спектр поглощения полученного раствора в области от 230 до 300 нм должен иметь максимум при 245 нм.

0,1 г субстанции сплавляют на открытом пламени с 0,5 г безводного натрия карбоната и охлаждают. Остаток взбалтывают с 5 мл азотной кислоты разведенной 16% и фильтруют. Фильтрат дает характерную реакцию на хлориды.

Температура плавления. От 149 до 153 град. C.

Прозрачность раствора. Раствор 0,1 г субстанции в 20 мл 0,5% раствора молочной кислоты должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен выдерживать сравнение с эталоном Y7.

4,4'-Бис[4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидино]бутирофенон.

0,05 г субстанции (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл метанола, прибавляют 5 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объем раствора метанолом до метки. Оптическая плотность полученного раствора, измеренная на спектрофотометре при 335 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, должна быть не более 0,3 (не более 1%).

Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ. Растворы готовят непосредственно перед использованием, защищая от света.

Испытуемый раствор. 0,1 г субстанции растворяют в метаноле и разбавляют метанолом до 10 мл.

Раствор сравнения. 5 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора метанолом до метки. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объем раствора метанолом до метки.

Раствор для проверки пригодности системы. 0,005 г субстанции и 0,0025 г стандартного образца бромперидола (стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в 50 мл метанола.

Хроматографические условия

Колонка - 10 x 0,46 см с октадецилсилил силикагелем (C18),

3 мкм;

Подвижная фаза - А - 1,7% раствор тетрабутиламмония гидросульфата;

(ПФ) Б - ацетонитрил;

Скорость потока - 1,5 мл/мин.;

Детектор - спектрофотометрический, 230 нм;

Объем пробы - 10 мкл.

Хроматографический режим

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Времена удерживания: галоперидол - около 5,5 мин.; бромперидол - около 6 мин. Разрешение (R) между пиками галоперидола и бромперидола должно быть не менее 3,0.

Хроматографируют раствор сравнения не менее 5 раз. Относительное стандартное отклонение площади пика галоперидола должно быть не более 5%.

Хроматографируют раствор сравнения и испытуемый раствор.

Площадь пика любой посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%); сумма площадей всех пиков посторонних примесей должна быть не более удвоенной площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1%).

Потеря в массе при высушивании. Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1,0 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,3 г (точная навеска) субстанции растворяют в 15 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 5 мл уксусного ангидрида и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 37,59 мг C21H23ClFNO2.

Хранение. Список Б. В сухом, защищенном от света месте.

ГВАЙФЕНЕЗИН (ФС 42-0226-07)

(RS)-3-(2-Метоксифенокси)пропан-1,2-диол

C10H14O4 М.м. 198,22

Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% C10H14O4 в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в спирте 96% и хлороформе, умеренно растворим в воде, мало растворим в эфире.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать рисунку спектра гвайфенезина (Приложение 1).

0,05 г субстанции смешивают с одной каплей формалина и двумя каплями серной кислоты концентрированной; появляется окрашивание от глубокого вишнево-красного до пурпурного.

Температура плавления. От 79 до 83 град. C (метод 1).

Прозрачность раствора. Раствор 1 г субстанции в 50 мл воды должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B9.

pH. От 5,0 до 7,0 (1% раствор).

Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях, описанных в разделе "Количественное определение".

Испытуемый раствор. 0,02 г субстанции растворяют в 10 мл ацетонитрила.

Раствор сравнения. 1 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Хроматографируют раствор сравнения и испытуемый раствор. Пики гвайфенезина бета-изомера и гваякола идентифицируют по хроматограмме раствора для проверки пригодности системы.

Содержание любой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

k x S

i i

X = --------,

I S

где:

S - площадь пика примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

i

k - поправочный коэффициент для площади пика примеси

i (k = 0,63 для гваякола; k = 1 для всех остальных примесей);

i i

S - площадь пика гвайфенезина на хроматограмме раствора сравнения.

Содержание гвайфенезина бета-изомера не должно превышать 1,5%, гваякола - 0,03%; любой неидентифицированной примеси - 0,5%. Суммарное содержание неидентифицированных примесей не должно превышать 1,0%.

Потеря в массе при высушивании. Около 0,5 г субстанции (точная навеска) сушат при остаточном давлении около 15 мм рт. ст. и температуре 60 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Бактериальные эндотоксины. Не более 0,05 ЕЭ на 1 мг субстанции.

Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовления стерильных лекарственных форм.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Подвижная фаза А (ПФ А). Смесь вода - уксусная кислота ледяная (990:10).

Подвижная фаза Б (ПФ Б). Ацетонитрил.

Испытуемый раствор. Около 0,05 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в ацетонитриле, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Стандартный раствор. Около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца гвайфенезина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в ацетонитриле, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности системы. 1 мг стандартного образца гваякола (2-метоксифенол; стандарт ВР, USP или аналогичного качества) растворяют в 50 мл стандартного раствора.

Хроматографические условия

Колонка - 25 x 0,46 см с октадецилсилил силикагелем (C18),

5 мкм;

ПФ - градиентное элюирование:

┌───────────┬──────────┬─────────┬───────────────────┐

│время, мин.│ ПФ А, % │ ПФ Б, % │ режим │

├───────────┼──────────┼─────────┼───────────────────┤

│ 0-32 │ 80 -> 50 │ 20 -> 50│ линейный градиент │

├───────────┼──────────┼─────────┼───────────────────┤

│ 32-35 │ 50 -> 80 │ 50 -> 20│ линейный градиент │

└───────────┴──────────┴─────────┴───────────────────┘

Скорость потока - 1,0 мл/мин.;

Детектор - спектрофотометрический, 276 нм;

Объем пробы - 10 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Относительные времена удерживания компонентов: гвайфенезина бета-изомер - около 0,9; гвайфенезин - 1,0 (около 8 мин.); гваякол - около 1,3. Разрешение (R) между пиками гвайфенезина и гваякола должно быть не менее 3,0.

Пять раз хроматографируют стандартный раствор. Относительное стандартное отклонение площади пика гвайфенезина должно быть не более 1,0%.

Хроматографируют испытуемый и стандартный растворы.

Содержание гвайфенезина в субстанции в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

S x a x P x 100

1 0

X = --------------------,

S x a x (100 - W)

0 1

где:

S - площадь пика гвайфенезина на хроматограмме испытуемого раствора;

S - площадь пика гвайфенезина на хроматограмме стандартного раствора;

A - навеска субстанции, в граммах;

a - навеска стандартного образца гвайфенезина, в граммах;

W - потеря в массе при высушивании субстанции, в процентах;

P - содержание основного вещества в стандартном образце гвайфенезина, в

процентах.

Для расчета содержания C10H14O4 в субстанции в процентах к полученному результату прибавляют содержание гвайфенезина бета-изомера в процентах, определенное в разделе "Посторонние примеси".

Хранение. В плотно закрытой упаковке.

ГИДРОКОРТИЗОНА АЦЕТАТ (ФС 42-0227-07)

21-Ацетокси-11бета,17-дигидроксипрегн-4-ен-3,20-дион

C23H32O6 М.м. 404,5

Содержит не менее 97,0% и не более 103,0% C23Н32O6 в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Практически нерастворим в воде, мало растворим в хлороформе, очень мало растворим в спирте 96%.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать рисунку спектра гидрокортизона ацетата (Приложение

1).

Ультрафиолетовый спектр поглощения раствора субстанции, приготовленного для количественного определения, в области от 200 до 300 нм должен иметь максимум при 241 нм.

К 0,05 г субстанции прибавляют 2 мл спирта 96%, 2 мл серной кислоты концентрированной и кипятят в течение 1 мин.; выделяется этилацетат, обнаруживаемый по запаху.

Температура плавления. От 218 до 222 град. C (с разложением, метод 1).

Удельное вращение. От +158 до +167 град. в пересчете на сухое вещество (1% раствор субстанции в диоксане; раствор готовят при нагревании до кипения).

Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Испытуемый раствор. 0,025 г субстанции растворяют в 5 мл метанола и разводят подвижной фазой (ПФ) до 10 мл.

Раствор сравнения. 1 мл испытуемого раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности системы. 0,002 г субстанции и 0,002 г стандартного образца кортизона ацетата (стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в 40 мл ПФ.

Условия хроматографирования

Колонка - 25 x 0,46 см с октадецилсилил силикагелем (C18),

5 мкм;

ПФ - ацетонитрил - вода (40:60);

Скорость потока - 1,0 мл/мин.;

Детектор - спектрофотометрический, 254 нм;

Объем пробы - 20 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Время удерживания пика гидрокортизона ацетата должно быть около 10 мин., пика кортизона ацетата - около 12 мин. Разрешение (R) между пиками должно быть не менее 4,0.

Хроматографируют раствор сравнения не менее 5 раз. Относительное стандартное отклонение площади пика гидрокортизона ацетата не должно превышать 5%.

Хроматографируют раствор сравнения и испытуемый раствор. Время регистрации хроматограммы испытуемого раствора должно не менее чем в 2,5 раза превышать время удерживания основного пика.

Площадь пика любой посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика гидрокортизона ацетата на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%); сумма площадей всех пиков посторонних примесей не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь пика гидрокортизона ацетата на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,5%).

Потеря в массе при высушивании. Около 0,5 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,05 г (точная навеска) препарата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 70 мл спирта 96% при нагревании на водяной бане, после охлаждения доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (испытуемый раствор).

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 241 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют спирт 96%.

Содержание С23Н32O6 в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

A x 500000

X = ----------------------,

1%

A x a x (100 - W)

1 см

где:

A - оптическая плотность испытуемого раствора;

a - навеска субстанции, в граммах;

1%

A - удельный показатель поглощения гидрокортизона ацетата при

1 см

241 нм, равный 395;

W - потеря в массе при высушивании, в процентах.

Хранение. Список Б. В защищенном от света месте.

ГЛИКЛАЗИД (ФС 42-0228-07)

2-[3-(4-Толилсульфонил)уреидо]октагидроциклопента[c]пиррол

C15H21N3O3S М.м. 323,42

Содержит не менее 99,0% и не более 101,0% C15H21N3O3S в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Легко растворим в метиленхлориде, умеренно растворим в ацетоне, мало растворим в спирте 96%, практически нерастворим в воде.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать спектру стандартного образца гликлазида.

Посторонние примеси. Подвижная фаза (ПФ). Триэтиламин - трифторуксусная кислота - ацетонитрил - вода (0,1:0,1:45:55).

Испытуемый раствор. 0,05 г субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 25 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор сравнения А. 1 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора смесью ацетонитрил - вода (9:11) до метки. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора смесью ацетонитрил - вода (9:11) до метки.

Раствор сравнения Б. 0,01 г стандартного образца примеси F (1-(гексагидро-циклопента[c]-пиррол-2(1H)-ил)-3-[(2-метилфенил)сульфонил]мочевина, стандарт ВР или аналогичного качества) смесью ацетонитрил - вода (9:11) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 45 мл ацетонитрила и доводят объем раствора водой до метки. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора смесью ацетонитрил - вода (9:11) до метки.

Раствор для проверки пригодности системы. 0,004 г субстанции и 0,015 г стандартного образца примеси F (1-(гексагидроциклопента[с]пиррол-2(1H)-ил)-3-[(2-метилфенил)сульфонил]мочевина, стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в 25 мл ацетонитрила и разбавляют водой до 50 мл. 1 мл полученного раствора разбавляют смесью ацетонитрил - вода (9:11) до 20 мл.

Хроматографические условия

Колонка - 25 x 0,4 см, с октилсилил силикагелем (C8),

5 мкм;

Скорость потока - 0,9 мл/мин.;

Детектор - спектрофотометрический, 235 нм;

Объем пробы - 20 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Разрешение (R) между пиками гликлазида и примеси F должно быть не менее 1,8.

Пять раз хроматографируют растворы сравнения. Относительное стандартное отклонение для площади пика гликлазида и примеси F должно быть не более 5,0%.

Хроматографируют растворы сравнения и испытуемый раствор и определяют площади пиков. Время регистрации хроматограммы испытуемого раствора должно не менее чем в 2 раза превышать время удерживания основного пика.

Площадь пика примеси F на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,1%).

Площадь пика любой другой примеси на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика гликлазида на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,1%). Сумма площадей этих пиков на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более двукратной площади пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,2%).

Определение примеси В (2-нитрозооктагидроциклопента[c]пиррол) проводят методом ВЭЖХ в описанных выше условиях.

Испытуемый раствор. 0,4 г субстанции растворяют в 2,5 мл диметилсульфоксида, разбавляют водой до 10 мл, перемешивают в течение 10 мин., выдерживают при температуре 4 град. C в течение 30 мин. и фильтруют.

Раствор сравнения. 0,02 г стандартного образца примеси В (стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в диметилсульфоксиде и разбавляют диметилсульфоксидом до 100 мл. К 1 мл полученного раствора прибавляют 12 мл диметилсульфоксида и разбавляют водой до 50 мл (раствор А). К 1 мл раствора сравнения А прибавляют 12 мл диметилсульфоксида и разбавляют водой до 50 мл.

Хроматографируют 50 мкл раствора сравнения Б и 50 мкл испытуемого раствора и определяют площадь пика примеси В. Площадь пика примеси В на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика примеси В на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,0002%).

Потеря в массе при высушивании. Около 1 г субстанции (точная навеска) сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,25%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г субстанции (точная навеска) не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Около 0,25 г субстанции (точная навеска) растворяют в 50 мл уксусной кислоты ледяной и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 32,34 мг C15H21N3O3S.

Хранение. Список Б. В сухом, защищенном от света месте.

ГЛУТАМИНОВАЯ КИСЛОТА (ФС 42-0229-07)

(2S)-2-Аминопентандиовая кислота

C5H9NO4 М.м. 147,13

Содержит не менее 98,5% C5H9NO4 в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый кристаллический порошок или бесцветные кристаллы.

Растворимость. Легко растворим в кипящей воде, мало растворим в воде, практически нерастворим в ацетоне и в спирте 96%.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия

-1

бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения

должен соответствовать спектру стандартного образца глутаминовой кислоты.

Если в спектрах обнаруживаются различия, субстанция и стандартный образец кислоты глутаминовой по отдельности растворяют в минимальном количестве воды, выпаривают досуха на водяной бане при температуре 60 град. C. Остаток сушат при температуре от 100 до 105 град. C и вновь регистрируют спектры полученных образцов.

0,02 г субстанции растворяют при нагревании в 1 мл свежепрокипяченной воды, прибавляют 1 мл свежеприготовленного раствора нингидрина и нагревают; появляется сине-фиолетовое окрашивание.

Прозрачность раствора. 1 г субстанции растворяют при нагревании в 1 М растворе хлористоводородной кислоты и разбавляют 1 М раствором хлористоводородной кислоты до 10 мл. Полученный раствор должен выдерживать испытание с эталонным раствором I.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B9.

Удельное вращение. От +30,5 до +32,5 град. в пересчете на сухое вещество (10% раствор субстанции в 1 М растворе хлористоводородной кислоты).

pH. От 3,1 до 3,7 (3 г субстанции растворяют в 60 мл горячей свежепрокипяченной воды и охлаждают).

Посторонние примеси. Испытуемый раствор. 0,1 г субстанции растворяют в 5 мл 2 М раствора аммиака и разбавляют водой до 10 мл.

Раствор сравнения. 1 мл испытуемого раствора разбавляют водой до 200 мл.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 0,01 г стандартного образца аспартамовой кислоты растворяют в воде, прибавляют 1 мл испытуемого раствора и разбавляют водой до 25 мл.

Раствор для опрыскивания. 1 г нингидрина растворяют в смеси бутанол - 2 М раствор уксусной кислоты (19:1) и разбавляют той же смесью до 50 мл.

На линию старта пластинки со слоем силикагеля 60 F наносят 5 мкл (50 мкг) испытуемого раствора, 5 мкл (0,25 мкг) раствора сравнения и 5 мкл (2 мкг глутаминовой кислоты и 2 мкг аспартамовой кислоты) раствора для проверки пригодности хроматографической системы. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью уксусная кислота ледяная - вода - бутанол (1:1:3) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат при температуре 100-105 град. C в течение 15 мин. и опрыскивают раствором нингидрина.

Пятно любой посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности окрашивания не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (0,25 мкг) (не более 0,5%).

Результаты испытания считаются достоверными, если на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы четко видны два пятна.

Потеря в массе при высушивании. Около 1 г субстанции (точная навеска) сушат при температуре от 100 до 105 град. C до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г субстанции (точная навеска) не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).