СИСТЕМА АВО И РЕЗУС-ФАКТОР

Группы крови. По общепринятой классификации, основанной на принципе агглютинации с обозначением агглютиногенов больши­ми буквами латинского алфавита А и В и агглютининов в плазме ма лыми буквами греческого алфавита аир, принято различать четы­ре группы крови: 0αβ (I), Аβ (II), Вα (III), AB0 (IV) (табл. 4.1).

Группа крови постоянна в течение жизни и не меняется под влиянием болезни или других причин. При переливании несовме­стимой по группе донорской крови агглютинины реципиента (а, β) адсорбируются на поверхности эритроцитов донорской крови, в которых находятся одноименные агглютиногены (А, В). Происхо­дит склеивание эритроцитов, и они выпадают в осадок. Чтобы это­го не случилось, перед переливанием крови всегда нужно опреде­лять группу крови реципиента и донора. После этого будет извест­но, какие агглютинины имеются у реципиента и какие агглютино­гены — в донорской крови. Нельзя допустить наличия одноимен­ных агглютининов и агглютиногенов (α и А), (β и В), иначе разо­вьется гемотрансфузионный шок с опасными для жизни последствиями.

Определение групп крови системы АВО. Определение групп кро­ви стандартными изогемагглютинирующими сыворотками. Стан­дартные сыворотки системы АВО двух различных серий каждой груп­пы наносят на планшетку под соответствующими обозначениями таким образом, чтобы получилось два ряда по три больших капли (0,1 мл) в следующем порядке слева направо: 0αβ (I), Аβ (II), Вα (III). Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) ря­дом с каждой каплей сыворотки и перемешивают кровь с сыворот­кой углами предметного стекла или отдельными колпачками от инъ­екционных игл. Наблюдение за ходом реакции осуществляют при комнатной температуре, легко покачивая пластинки (планшетки) в течение 5 мин. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин в капли, в которых наступила агглютинация эритроци­тов, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия (для исключения ложной агглютинации) и продол­жают наблюдение до истечения 5 мин (рис. 4.1).

Реакция в каждой капле может быть положительной (наличие аг­глютинации эритроцитов) и отрицательной (отсутствие агглютина­ции) .

В тех случаях, когда положительный результат получен с сыво­ротками всех трех групп, для исключения неспецифической агглю­тинации проводится контрольное исследование со стандартной сы­вороткой группы AB0 (IV), не содержащей групповых агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой контрольной пробе позволя­ет учесть положительный результат с сыворотками 0αβ (I), Аβ (II), Вα (III)как истинный, т. е. принадлежность исследуемой крови к груп­пе АВ0 (IV).

Определение группы крови системы АВО моноклональными анти­телами (цоликлоны Анти-АВ, Анти-А и Анти-В). Цоликлоны Анти-АВ, Анти-А и Анти-В наносят на планшет или пластинку по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-АВ,

анти-А и анти-В (рис. 4.2). Рядом с каплями антител наносят иссле­дуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл). После смешива­ния реагентов за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2,5 мин.

В лунки второго ряда планшетов вносят по одной-две капли цоликлона Анти-D Супер и одну маленькую каплю исследуемой крови для определения резус-принадлежности.

Оценка результатов агглютинации с цоликлонами Анти-АВ, Анти-А, Анти-В и Анти-D Супер приведена в табл. 4.2.

1. Если агглютинация отсутствует (-) и с доли клоном Анти-А, и с цоликлоном Анти-В, исследуемые эритроциты не содержат агглю­тиногенов А и В и кровь принадлежит к группе О (I).

2. Если агглютинация наблюдается (+) только с цоликлоном Анти-А, исследуемые эритроциты содержат только агглютиноген А и кровь принадлежит к группе А (II).

3. Если агглютинация наблюдается (+) только с цоликлоном Анти-В, исследуемые эритроциты содержат только агглютиноген В и кровь принадлежит к группе В (III).

4. Если агглютинация наблюдается (+) как с цоликлоном Анти-А, так и с цоликлоном Анти-В, исследуемые эритроциты содержат оба агглютиногена (А, В) и кровь принадлежит к группе АВ (IV). В этом случае для исключения ложной агглютинации необходимо провести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического рас­твора натрия хлорида смешать с маленькой каплей (0,01 мл) иссле­дуемой крови — агглютинация должна отсутствовать.

Ошибки при определении групп крови. Выделяют несколько основ­ных ошибок:

1) установление агглютинации там, где ее нет. Это случается при подсыхании смеси сыворотки с кровью, возникновении псевдоаг­глютинации, при низкой температуре в помещении (12 °С и ниже);

2) неправильное обозначение группы на этикетках стандартных сывороток;

3) небрежное обращение с пипетками;

4) невнимательность при смешивании крови с сыворотками;

5) неправильное соотношение сыворотки и крови;

6) недостаточное время наблюдения;

7) замедление агглютинации при температуре в помещении свыше 26 "С. Может быть принято ошибочное решение о 0 (I) группе крови;

8) «монетные столбики», которые принимают за агглютинацию.

Для профилактики ошибок следует применять свежие сыворот­ки с действующим сроком годности, соблюдать соотношение сыво­роток и крови (10: 1), следить за температурой в помещении. Сыво­ротки нужно хранить в холодильнике при температуре 4—6 °С. По­сле смешивания сывороток с исследуемой кровью результат читает­ся через 5 мин.

Определение резус-принадлежности крови. Применение универ­сального реагента-антирезус. В пробирку вносят одну-две капли универсального реагента-антирезус и одну каплю исследуемой кро­ви. В течение 3 мин содержимое пробирки помешивают. После это­го в пробирку добавляют 3 мл физиологического раствора, закрыва­ют пробкой и трижды ее переворачивают. Оценивают результат на белом фоне. При наличии агглютинации кровь считают резус-положительной (Rh⁺), при отсутствии агглютинации — резус-отрицательной (Rh -).

Использование цоликлонаАнти-D Супер. На планшет или пласти­ну наносят одну каплю (0,1 мл) цоликлона Анти-D Супер, рядом по­мещают маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови и смешива­ют их индивидуальной чистой стеклянной палочкой (см. рис. 4.2). Реакция агглютинации начинает развиваться уже через 30 с при мяг­ком покачивании пластинки. Результаты учитываются через 3 мин после смешивания капель. При наличии агглютинации кровь счита­ется резус-положительной, при отсутствии агглютинации — резус-отрицательной .