Биохимических показателей

При проведении биохимических исследований широко применяют оптические методы, позволяющие определять малые количества различных веществ, образующиеся в процессе метаболизма в организме животных. Эти методы основаны на взаимодействии света с анализируемым веществом. В зависимости от характера взаимодействия света с веществом и способа его измерения различают:

1) рефрактометрию – она основана на изменении показателя преломления света, при прохождении его через неоднородные среды. Используется для определения общего белка в сыворотке крови и молоке. Этот метод считается не эффективным из-за того, что преломляющая способность раствора зависит от уровня не только белков, но и не белковых элементов.

2) поляриметрию – основана на свойстве прозрачных веществ вращать плоскость поляризационного луча света. Применяется для определения сахара в крови.

3) адсорбционную фотометрию, которая включает в себя более 80% используемых лабораторных методов и лабораторных исследований.

При взаимодействии света с веществом могут иметь место два случая:

а) свет, проходя через вещество, поглощается очень слабо, т.е. есть вещество прозрачно. Отношение объема света в вакууме к его скорости в данном веществе составляет показатель преломления вещества;

б) вещество поглощает значительную часть световой энергии, а согласно квантовой теории, энергия света поглощается порциями (квантами), при этом отдельные молекулы обладая совокупностью близкорасположенных энергетических уровней могут переходить с относительно низкого энергетического уровня на более высокий уровень. Оказавшись в таком возбужденном состоянии, они способны флюоресцировать и претерпевать фотохимические изменения. В результате возбуждения сложных атомов испускаются электромагнитные волны разнообразных частот, образующих спектр испускания.

Адсорбционный анализ основан на физическом свойстве вещества избирательно поглощать монохроматический (однородный) поток световой энергии. С его помощью изменяется светопоглощение раствора или интенсивность окраски, которая непосредственно связана с концентрацией вещества.

Примером данного биохимического анализа является разделение липидов на классы методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). В основе данного метода лежит адсорбционная хроматография, которая основана на сорбции растворенного вещества твердой фаза – активным сорбентом. Растворитель разделяемой смеси веществ движется по сорбенту, и при этом разделяемые компоненты перемещаются с различной скоростью в направлении движения растворителя.

Метод ТСХ позволяет разделять сложные смеси липидов на классы: фосфолипиды, моно-, ди- и триглицерины, холестерин свободный и связанный и т.д. В свою очередь фосфолипиды можно разделить на подклассы: фосфотидилхолин, фосфотидилэтаноламин и т.д., тем самым повышается точность количественного определения отдельных классов и подклассов липидов, а так же их выделение для дальнейшего изучения.