III. Методы количественного анализа ЛРС

Фармакологическое действие ЛР обусловлено наличием в них БАВ. Содержание действующих веществ зависит от сроков, района заготовки сырья и должно быть не менее указанной в НД нормы. Недостаточное содержание БАВ может привести к неэффективности проводимой терапии. Методы количественного анализа ЛРС можно классифицировать на:

1. Физические и физико-химические методы:

а) Гравиметрические, или весовые методы – основаны на выделении суммы веществ путем их осаждения из различных растворителей или за счет получения нерастворимых комплексных соединений и последующего установления массы взвешиванием осадка на аналитических весах; метод используется при количественном определении полисахаридов в ламинарии слоевищах, мать-и-мачехи листьях, подорожника большого листьях, череды траве; алкалоидов в барбариса обыкновенного листьях.

б) Метод перегонки, или дистилляции, летучих веществ с водяным паром. Метод используется для определения содержания эфирного масла (2.8.12) и будет рассмотрен ниже.

в) Оптические методы:

●Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (2.2.25). Метод основан на измерении оптической плотности раствора (А), пропорциональной длине пути (b), через который проходит излучение, и концентрации (c) вещества в растворе в соответствии с уравнением:

А=ε·с·b

где: ε – молярный показатель (коэффициент) поглощения,

с – концентрация вещества в растворе, в молях на литр,

b – длина оптического пути, в сантиметрах.

Спектрофотометрическое определение БАВ может проводиться как с построением градуировочного графика (определение производных антрацена в марены корневищах с корнями, суммы фенольных соединений в ольхи черной листьях), так и без него (определение флавоноидов в березы почках, суммы флавоноидов и суммы процианидинов в боярышника листьях, антоцианов в василька синего цветках, флавоноидов в бузины черной цветках и т.д.), когда для расчета используется удельный показатель поглощения – величина, которая представляет собой оптическую плотность раствора вещества с концентрацией 10,0 г/л в кювете с толщиной слоя 1 см:

А = , где

ε – молярный показатель (коэффициент) поглощения,

М – молярная масса вещества.

●Флуориметрический анализ (2.2.21) основан на измерении интенсивности флуоресценции испытуемых веществ относительно флуоресценции стандартного вещества. Это самый чувствительный метод при анализе кумаринов, флавоноидов, антрахинонов.

●Рефрактометрия – для определения показателя преломления жирных и эфирных масел. Показатель преломления n среды относительно воздуха равняется отношению синуса угла падения луча света в воздухе к синусу угла преломления луча света в данной среде. Абсолютным показателем преломления называют отношение скорости распространения света в вакууме к скорости распространения света в испытуемом веществе. Относительный показатель преломления – это отношение скорости распространения света в воздухе к скорости распространения света в испытуемом веществе. Если нет других указаний в частной статье, определение показателя преломления проводят при температуре (20+0,5)˚С при длине волны линии D спектра натрия ( =589,3 нм); показатель преломления, определенный в таких условиях, обозначают n . Показатель преломления зависит от температуры и длины волны света, при которой проводят определение.

●Поляриметрия – метод, основанный на определении содержания веществ в сырье по вращению плоскости поляризации. Этим методом можно определять только оптически активные соединения (например, алкалоиды, терпеноиды, гликозиды).

г) Хроматографические методы эффективны для разделения многокомпонентных смесей, очистки, идентификации и количественного определения соединений.

Метод ВЭЖХ (2.2.29) используется для количественного определения суммы сесквитерпенов в арники цветках, валерианы корневищах с корнями, суммы панаксозидов в женьшеня корнях, флавоноидов в гинкго листьях, эллаговой кислоты и гиперозида в ольхи черной листьях и т.д. Метод газовой хроматографии (2.2.28) применяют при количественном определении анетола и фенхола в фенхеля горького плодах, тимола и карвакрола в тимьяна траве.

д) Электрохимические методы – потенциометрия (потенциометрическое титрование (2.2.20) – метод количественного определения суммы аралозидов в аралии маньчжурской корнях), полярография – используются редко.

2. Химические методы:

а) Титриметрические (объемные) методы разнообразны и зависят от химических свойств исследуемых соединений. Используются методы прямого и обратного титрования. В основе могут лежать реакции следующих типов: кислотно-основные, окислительно-восстановительные, реакции осаждения и образования комплексных соединений. Определение некоторых оснований и кислот, титрование которых в воде затруднено или невозможно (например, некоторые алкалоиды, аминокислоты и др.), проводят в неводных средах. Широко распространены методы титрования окислителями – перманганатометрия (определение дубильных веществ в бадана корневищах, дуба коре), йодометрия (определение арбутина в толокнянки листьях). Также часто используется тиосульфатометрия (определение йода в ламинарии слоевищах, фукусе) и др.

3. Биологические методы – используются в тех случаях, когда качество ЛРС не может быть удовлетворительно определено химическими и физическими методами (анализ сердечных гликозидов).

Методики количественного определения некоторых групп БАВ приведены в 1 томе ГФ РБ II (например, 2.8.12 «Определение эфирного масла в лекарственном растительном сырье»).