РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ

Сущность метода. Реакция преципитации основана на выпадении осадка под воздействием преципитирующей сыворотки на соответствующий антиген. Это наиболее точный метод в определении мяса животного того или другого вида. С помощью реакции преципитации можно распознать видовую принадлежность мяса, если оно подверглось посолу или тепловой обработке. Для постановки реакции необходимо иметь набор соответствующих преципитирующих сывороток. Необходимо также иметь запас нормальных сывороток крови животных различных видов (коровы, лошади, свиньи, овцы, козы, собаки). При длительном хранении под сыворотки подслаивают хлороформ и разливают их в склянки с притертыми пробками. Предварительно устанавливают титр преципитирующих сывороток и определяют их специфичность. Титр сыворотки проверяют следующим образом: из нормальной сыворотки крови определенного животного делают последовательные разведения 1 : 100, 1 : 1000,1 : 5000, 1 : 10 000 и далее (в зависимости от титра, указанного на этикетке ампулы). Разведения производят в малых пробирках (удобнее с суживающимся нижним концом). К 0,9 мл нормальной сыворотки в указанных разведениях подслаивают пастеровской пипеткой по 0,1 мл 30 преципитирующей сыворотки. Подслаивать можно одной пипеткой, начиная с минимального разведения. Специфичность преципитирующей сыворотки определяют так же, но с сыворотками различных животных. Преципитирующая сыворотка считается годной, если она имеет титр 1 : 10 000, т. е. осаждает белок сыворотки животного того вида, на который она изготовлена, в разведении 1 : 10 000 в течение 10 минут и не дает осадков с сыворотками животных других видов в разведениях1 : 1000 в течение 1 часа. Для приготовления экстракта пробу исследуемого мяса освобождают от жира и соединительно-тканых волокон, мелко измельчают и помещают в пробирку; туда же приливают физиологический раствор, так чтобы он покрывал мясо слоем в несколько миллиметров. Пробирку не встряхивают. Сырое мясо экстрагируют в течение 3 часов, вареное или засушенное — до суток. После этого экстракт отсасывают и пропускают через стерильный бумажный фильтр или центрифугируют до полной прозрачности. Концентрация белка в экстракте должна равняться приблизительно 1 : 1000. Это определяют следующим образом: стеклянный капилляр длиной около 10 см опускают в экстракт, и последний в силу капиллярности поднимается по трубке (не до конца). Затем тот же капилляр вносят наклонно в концентрированную азотную кислоту, налитую на часовое стекло. Азотная кислота, так же как и экстракт, входит в капилляр. На месте соприкосновения жидкостей в капилляре образуется осадок белка в виде белого кольца. Если осадок получается густой и массивный, то экстракт нужно развести физиологическим раствором и пробу повторить еще раз. Так поступают до тех пор, пока белое кольцо свернувшегося белка не будет едва заметным. Полное отсутствие осадка при постановке капиллярной пробы указывает, что концентрация белка в экстракте менее чем 1 : 1000. С таким экстрактом реакцию ставить можно, так как титр преципитирующих сывороток выше чем 1 : 1000.

Для постановки реакции преципитации готовят несколько (4—7) рядов мелких пробирок, по три пробирки в ряду. В первые пробирки каждого ряда наливают по 0,9 мл экстракта из исследуемого мяса, во вторые — по 0,9 мл физиологического раствора и в третьи — такой же объем нормальных сывороток различных животных. Сыворотки берут в разведении 1 : 1000. Во все три пробирки первого ряда подслаивают различными пастеровскими пипетками по 0,1 мл сыворотки, преципитирующей белок коровы, в пробирки второго ряда — по 0,1 мл сыворотки, преципитирующей белок лошади, в пробирки третьего ряда — по 0,1 мл преципитирующей свиной сыворотки, в пробирки других рядов —по такому же количеству овечьей, козьей и собачьей сывороток. Реакцию читают на темном фоне. Положительной реакцией считается появление на месте соприкосновения жидкостей в течение первых минут после добавления преципитирующей сыворотки мутно-белого кольца. Реакция будет специфической, если мутно-белое кольцо появится в течение часа после добавления к экстракту преципитирующей сыворотки; осадки, образовавшиеся спустя час, считаются неспецифическими.

Положительная реакция в первой и третьей пробирках одного ряда показывает, что исследуемое мясо принадлежит животному, которому соответствует специфичность сыворотки. Во всех остальных рядах в первых пробирках реакция должна быть отрицательной, а в третьих пробирках — положительной. Во вторых пробирках всех рядов (контрольная проба с физиологическим раствором) реакция должна быть отрицательной. Например, если исследуемая вытяжка оказалась приготовленной из мяса лошади, то результат реакции во всех пробирках должен быть следующим (табл.4 ).

Таблица 4

85. ВСЭ при пищевых токсикоинфекциях (сальмонеллёз, кишечный иерсиниоз, протейные инфекции, инфекции вызываемые энтеропатогенными штаммами кишечной палочки, Клостридиум перфрингенс).

Пищевые токсикоинфекции - острые заболевания, возникающие при употреблении продуктов питания, содержащих боль­шое количество живых клеток специфического возбудителя.

Содержание этих микроорганизмов в пище определяет степень тяжести болезни. Считается, что у здорового человека среднего воз­раста клинические признаки пищевой токсикоинфекции возникают в тех случаях, когда в организм поступает 10⁵— 10⁷ живых микробных клеток.

Механизм возникновения пищевой токсикоинфекции таков. При по­ступлении в организм желудочный сок не вызывает гибели возбудителей. В кишечнике они внедряются в слизистую оболочку, размножаются с после­дующей их деструкцией. В результате гибели микроорганизмов выделяют­ся эндотоксины (комплекс липополисахаридов с белками клеточных сте­нок бактерий), обладающие пирогенностыо (способность повышать температуру тела) и токсичностью, увеличивающей проницаемость сосудов с отклонением от нормы кровообращения, нервной системы, водно-солевого обмена.

Принято считать, что пищевые токсикоинфекции вызываются следую­щими микроорганизмами: рода Salmonella (хотя в последнее время сальмо-неллезу склонны придавать самостоятельное нозологическое значение), Proteus, энтеропатогенные варианты Escherichia coli, В. cereus, CI. perfringens, Str. faecalis, представители родов Citrobacter, Klebsiella, Jersinia, Pseudomonas, Campylobacter и др.

Сальмонеллез - единый инфекционный процесс, протекающий весь­ма разнообразно, в том числе и в виде типичных токсикоинфекции. Бак­териальную этиологию токсикоинфекции сальмонеллезного происхождения обосновал Гертнер в конце XIX в., выделив при большой вспышке забо­леваний из употребляющегося в пищу мяса вынужденно убитой коровы и из селезенки умершего человека идентичные бактерии. Название «саль­монелла» определено в 1934 г. в честь американского исследователя Сальмона.

В настоящее время описано около 2000 серовариантов сальмонелл, из них у человека выделено более 700.

Основным источником сальмонеллезной инфекции для человека явля­ются животные и птицы, среди которых наблюдается значительная зара­женность этим возбудителем. Этому способствует широко практикующая­ся международная торговля животными кормовыми продуктами (мясная, рыбная, костная, мясокостная мука), нередко - сильно инфицированными разнообразными серовариантами сальмонелл, что и определяет выражен­ную эпидемиологическую цепь: «животные корма - животные — пищевые продукты - человек», которая и обусловливает повышение заболеваемости людей сальмонеллезом.

Многочисленные бактерии рода сальмонелл принадлежат к семейству Enterobacteriaceae. Они встречаются в кишечнике животных и человека, а также во внешней среде.

Бактерии рода сальмонелл представляют собой палочки с закругленны­ми концами, иногда овальной формы, длиной 2-4 мкм, шириной - 0,5 мкм. Иногда бактерии, образуют нити — это аэробы или факультативные анаэро­бы. Все они, за исключением S.gallinarum и S.pullorum, подвижны. За 24 ч при комнатной температуре они проникают с поверхности мяса на глубину до 2 см. Сальмонеллы - грамотрицательные, не образующие спор и капсул бактерии. Оптимальная реакция среды для роста слабощелочная (рН 7,2-7,4), температура 37°С

Санитарная оценка при салъмонеллезе. Туши и продукты убоя от животных, больных и подозрительных в заболевании сальмонеллезом выпускать в сыром виде запрещается. При наличии дистрофических или других патологических изменений в мускулатуре тушу с внутренними орга­нами направляют на утилизацию. При отсутствии патологических измене­нии в туше решение об использовании продуктов убоя принимают после бактериологического исследования. При этом в случае обнаружения саль­монелл внутренние органы направляют на утилизацию, а туши выпускают после проварки или направляют на изготовление консервов. Шкуры дезинфицируют.

Готовые мясные изделия с наличием в них сальмонелл направляют на обезвреживание, техническую утилизацию или уничтожают.