Приготовление питательных сред

5.1.1. Для восстановления и приготовления коллекционных и лабораторных заквасок бифидобактерий используют кукурузно-лактозную среду (КЛС), гидролизатно-молочную среду (ГМС), среду Блаурокка (печеночно-цистиновую) по методикам, утвержденным Министерством здравоохранения-Республики Беларусь, и др. среды.

5.1.3. Кукурузно-лактозную среду (КЛС) готовят из компонентов следующим образом:

10 г пептона или дрожжевого автолизата согласно рецептуре, 150 см³ водного раствора кукурузного экстракта (разбавленного 1:6), 50 см³ гидролизованного панкретатином обезжиреныого молока, 6 г натрия лимоннокислого 3-х замещенного, 0,12 г магния сернокислого, 2 г калия фосфорнокислого однозамещенного, 1 г натрия фосфорнокислого двузамещенного смешивают небольшим количеством дистиллированной воды.

Смесь нагревают до температуры (80±5)°С, после чего соединяют с расплавленным агаром, добавляют 10 г лактозы и 0,2 г цистина (цистеина) солянокислого или 0,5 г аскорбиновой кислоты.

Цистин (или цистеин) предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, где устанавливают активную кислотность среды (8,5±0,5) ед. рН с помощью 10% раствора NaOH и нагревают на водяной бане до полного растворения.

Смесь доливают горячей дистиллированной водой до объема 1,0 дм³ и устанавливают активную кислотность среды (7,1±0,2) ед. рН с помощью 40% раствора NaOH.

Среду разливают в колбы необходимого объема или пробирки столбиком по (10,0±0,5) см³ или (20,0±0,5) см³ и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±2) мин. Допускается хранить среду в тёмном месте в течение одного месяца при температуре (6±2)°С.

5.1.3.1. Кукурузный экстракт сгущенный предварительно разводят водой в соотношении 1:6, устанавливают рН 6,5-7,0 40%-ным раствором NаОН и стерилизуют во фляге вместимостью 10 дм³ при (121±1) °С в течение 35-40 мин. Затем дают раствору отстояться в течение 12-16 часов и фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в колбы по 250-300 см³ и стерилизуют при (121±1) °С в течение 30 мин.

5.1.3.2. Гидролизованное молоко готовят по п.1.6.7.2 "Инструкции по микробиологическому контролю производства на предприятиях молочной промышленности".

5.1.4. Приготовление гидролизатно-молочной среды (ГМС) ведется следую ним образом:

Гидролизованное молоко, приготовленное по п.5.1.3.2, разводят водой 1:1, вносят 0,75% агара, 0,5% поваренной соли, нагревают до (80±1) °С. Устанавливают значение рН 7,5-7,6 10%-ным раствором NаОН, кипятят 15 мин, дают отстояться, сливают с осадка, доводят до 1 дм³ добавляют 10 г лактозы, ά-цистеин - 100 мг, стерилизуют при температуре (121±2)⁰С в течение (30±2) мин..

5.1.5. Производственную закваску готовят на стерильном обезжиренном (или нормализованном) молоке с внесением 2% ростового фактора от объема молока.

5.1.5.1. В качестве ростовых факторов могут быть использованы разведенный стерильный кукурузный экстракт (по п.5.1.3.1), Гидролизованное панкреатином обезжиренное молоко (по 4.5.1.3.2), стимулятор роста бифидобактерий ГМК-3. печеночный бульон, дрожжевой автолизат

5.1.5.2. Печеночный бульон готовят как для среды Блаурокк (печеночно-цистиновый) по методикам, утвержденным Министерством здравоохранения Республики Беларусь.

5.1.5.3. Для приготовления дрожжевого автолизата используют жидкие пивные дрожжи. Пивные дрожжи разводят горячей водой (t=60°С) в соотношении 1:1. Полученную смесь выдерживают в термостате при (45±2) °С в течение 30 мин и охлаждают. Затем смесь фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в колбы и стерилизуют при (121±2) °С в течение 15 мин.

5.1.5.4. Внесение ростовых факторов в стерильное молоко проводят в условиях асептики.