Спектроскопія NOESY-2D

Хоча метод одномірного ЯЕО є одним із найстаріших в спектроскопії ЯМР, його двомірний варіант було спочатку використано для дослідження лише біологічних макромолекул. З цією метою була розроблена імпульсна послідовність NOESY-2D. Вона є засобом вивчення нестаціонарних ЯЕО. Тому найбільш легко її застосувати для об’єктів, в яких ЯЕО виникає доволі швидко. Цим умовам найбільш повно відповідають біологічні макромолекули, ЯЕО для яких є негативними, сильним і виникає за декілька десятків мілісекунд. Традиційно ця методика для малих молекул використовувалася рідше, оскільки за умов граничного звуження ліній величини ЯЕО наростають набагато повільніше, що збільшує час експерименту. Існування досить ефективного альтернативного підходу, що базується на різницевій спектроскопії, у багатьох випадках робило використання NOESY менш бажаним. Однак, в останні роки, після того, як прилади стали значно більш досконалими і чутливими, даний метод усе ширше використовують і для вивчення малих молекул. Для вирішення ряду задач він виявляється навіть кращим у порівнянні зі стаціонарним ЯЕО. Найбільш важливою перевагою такого підходу є те, що цей експеримент є неселективним. Тому в одному експерименті можна одержати всі можливі ЯЕО (це аналогічно до порівняння спектрів COSY з експериментами по селективній розв'язці ССВ). Крім того, для NOESY непотрібна ручна установка параметрів і частот придушення, що дозволяє проводити його в автоматичному режимі.

Вимірювання стаціонарних ЯЕО добре підходять для вивчення конфігурації і конформації малих молекул, оскільки чисельні величини ЯЕО, що отримані при цьому, набагато перевищують ті, які вдається знайти в експериментах з нестаціонарного ЯЕО. Це пов'язано з безперервним припливом у систему енергії зовнішнього радіочастотного опромінення, що сприяє збільшенню ЯЕО. На відміну від цього, в експериментах по нестаціонарному ЯЕО зміни інтенсивностей сигналів обумовлені первинною інверсією резонансних сигналів, що приводить до виникнення ЯЕО лише на короткий час. Тому збір даних повинен бути здійснений досить швидко, але навіть у цьому випадку максимально можливої величини для ЯЕО зареєструвати не вдається. Для дуже малих молекул (М<200), які в розчині обертаються з високою швидкістю, величини ЯЕО виявляються малими. Це пов'язане з неефективністю крос-релаксації для таких молекул. Тому вивчати малі молекули методами нестаціонарного ЯЕО практично не вдається. Якщо маса молекул вище за 200, то такі дослідження стають можливими.