Иммунофенотипические и цитогенетические особенности «волосатых клеток».

1. Иммунофенотип.

Иммунофенотипическая характеристика лимфатических клеток при ВКЛ позволила охарактеризовать их как поздние активированные В-лимфоциты, с профилем CD-маркеров, как общим для многих хронических лимфопролиферативных заболеваний, так и имеющим ряд характерных отличий. Несмотря на то, что не найдено какого-либо однозначно специфического для ВКЛ маркера, выявлена характерная комбинация CD, позволяющая с высокой степенью достоверности диагностировать это заболевание.

Так, «ВК», как и все зрелые лимфоциты, несут поверхностный иммуноглобулин (sIg) и ряд общих В-клеточных маркеров (CD19, CD20, CD79a), но экспрессия sIg при этом, в отличие от хронического лимфолейкоза, выражена сильно [13,84,145,148,269]. Частота выявления легких каппа и лямбда цепей примерно одинакова (κ/λ=1,13), что свидетельствует об увеличенном представительстве лямбда-цепи, так как обычное соотношение κ/λ=2. Отмечена также большая по сравнению с другими В-клеточными лимфопролиферациями частота обнаружения тяжелой цепи sIgG, экспрессируемой нередко в сочетании с Ig других классов, чаще с Ig M или Ig D [144,162]. Такая коэкспрессия Ig разных классов на одной клетке отличается от нормального процесса дифференцировки В-клеток и встречается при ВКЛ гораздо чаще, чем при других хронических лимфопролиферативных заболеваниях [144,161].

Отличие фенотипа ВКЛ от хронического лимфолейкоза в первую очередь касается экспрессии CD5, CD23 и FMC7. Так, в отличие от хронического лимфолейкоза, «ВК» FMC7-позитивны, сильно экспрессируют CD22, но, как правило, CD5 и CD23-негативны [194]. Фенотип «ВК» характеризует их как поздние активированные В-лимфоциты: маркеры, утрачиваемые в процессе активации В-клеток (CD21, CD24) при ВКЛ отрицательны, или экспрессированы крайне слабо.

В то же время, в отличие от других В-зрелоклеточных лимфом, в 2/3 случаев ВКЛ отсутствует CD79b [357]. Маркеры CD10 и CD38 также чаще отрицательны, хотя известны случаи CD10+ВКЛ. В большинстве случаев ВКЛ клетки позитивны по CD11c, HC2, CD103 и CD25 (альфа-цепь рецептора интерлейкина-2) [168,228,251,290]. При этом уровень растворимого рецептора интерлейкина-2 (CD25) в сыворотке крови коррелирует со степенью активности болезни и ответом на лечение [12,238].

Несмотря на то, что ни один из указанных маркеров (CD11c, HC2, CD103, CD25) не является специфичным только для ВКЛ и может обнаруживаться при других В-клеточных лимфатических нозологиях, например, при лимфоцитоме селезенки, их сочетание и высокая степень экспрессии является исключительно характерным признаком ВКЛ [195,196]. Выявлен еще целый ряд маркеров, выявляемых при ВКЛ, в частности, соответствующих рецепторам адгезии (CD18, CD54), однако отсутствие четкого дифференциально-диагностического значения для разграничения внутри В-клеточных нозологий не позволила считать их пригодными для целей диагностики [65].

Таким образом, в общем случае фенотип типичных «ВК» соответствует sIg+, CD19+, CD20+, CD79a+, CD22+, CD5-, CD23-, FMC7+, CD11c+, HC2+, CD103+, CD25+, CD10-. Для вариантной формы заболевания считается характерным отсутствие или более слабая степень экспрессии CD25, HC2 и CD103 [134,243,205].

Поскольку в крови популяция «ВК» может быть невелика, а аспират костного мозга нередко «сухой» и малоклеточный, особое значение для диагностики ВКЛ приобретает иммуногистохимическое исследование трепанобиоптата [35,36,157,180]. При этом выявляется сильная экспрессия В-клеточных маркеров CD20, CD79a и DBA.44 – высокоспецифичного маркера ВКЛ, выявляемого более чем в 95 % случаев [135,244]. Цитохимическую реакцию на TRAP невозможно провести на фиксированном материале, однако можно провести иммуногистохимическое исследование с анти-TRAP-антителом 9С5 [140,141]. Еще одним чувствительным маркером волосатоклеточного лейкоза является CD103 [206]. Хотя эти маркеры порознь могут встречаться при других хронических лимфопролиферациях (лимфоплазмоцитарная лимфома, в редких случаях - лимфома мантийной зоны), наличие CD103, DBA.44 и 9С5 в сочетании с гистологической картиной характерной инфильтрации костного мозга и характерной морфологией «волосатых клеток» позволяет установить диагноз.

2. Цитогенетика.

Сообщения о цитогенетических исследованиях при ВКЛ появляются нерегулярно, возможно в связи с относительной редкостью заболевания, но скорее из-за трудностей в получении достаточного материала для анализа. Использование В-клеточных митогенов позволило увеличить число выявляемых клональных аномалий [30,31]. Характерным для ВКЛ оказалось наличие различных комбинаций множественных клонов [122]. Но, хотя в разных исследованиях обнаруживаются разнообразные хромосомные аномалии, специфических для этого заболевания перестроек не выявлено. Так, в одном из исследований, включавшем 21 случай ВКЛ, у 30% пациентов найдена аномалия 14q+, затрагивающая локус тяжелой цепи Ig, включая 1 случай t(14;18)(q32;21), как при фолликулярной лимфоме [30,31]. У двух пациентов с вариантной формой волосатоклеточного лейкоза была найдена транслокация t(2;8)(p12;q24), характерная для лимфомы Беркитта [30,296]. Нередко находят нарушения в 12 хромосоме (12p, 12q24,12q13) [30]. В исследовании с помощью FISH с пробами к хромосомам 1,3,6,7,8,9,10,11,12,15,16,17,18,20, выполненным в группе из 24 пациентов, была выявлена только диплоидия [183], в то время как в другом исследовании среди 10 пациентов с помощью FISH в двух случаях была выявлена трисомия 12 хромосомы [66]. В еще одном цитогенетическом исследовании среди 30 пациентов с ВКЛ у 12 (40 %) выявлялись аномалии 5 хромосомы, преимущественно трисомия, перицентричная инверсия и делеция 5q13 [122]. Наряду с аномалиями 5 хромосомы выявлялись аномалии 14 хромосомы, а также 1q42 и +del(12)(p11). Структурные нарушения 5 хромосомы упоминались и в вышеуказанных исследованиях [30,215]. Интересно, что трисомия 12 является довольно частой аномалией при хроническом лимфолейкозе, в то время как аномалии 5 хромосомы редко обнаруживаются при лимфопролиферациях [66,152]. Выявленные количественные (чаще трисомия) и структурные нарушения в 5 хромосоме позволили предположить, что у части пациентов в патогенезе болезни может участвовать потеря супрессора опухоли, локализующегося в 5q13.3 [23].

Проявлением В-клеточной клональности при ВКЛ являются реарранжировки гена иммуноглобулинов как легких, так и тяжелых цепей. Интересно, что волосатоклеточный лейкоз является еще одним, наряду с лимфомой мантийной зоны, заболеванием, при котором выявлена гиперэкспрессия циклина D1, но в отличие от лимфомы, эта экспрессия не связана с транслокацией 11;14 (и, соответственно, реарранжировкой или амплификацией Bcl-1).