IV. ВИДІЛЕННЯ ВІРУСУ

Проби для виділення вірусу слід брати не пізніше ніж через 3 дні після початку захворювання. Ймовірність виділення вірусу швидко знижується після цього терміну, але в деяких випадках вірус можна виділити на 7-й і навіть 10-й день хвороби. Найкраще вірус виділяється з носових змивів. Однак мазки, узяті з глотки і носа, 'більш зручні для лікаря і менш неприємні для хворого. Проби, призначені для виділення вірусу, слід постійно тримати на холоді і якомога швидше використовувати. Якщо не можна інокулювати їх протягом 48 год після взяття, слід помістити проби в закритий посудину і. Зберігати в сухому льоду або в рефрижераторі при -70 ° С. У летальні випадки при підозрі на грипозну пневмонію слід намагатися виділити вірус з тканини легенів, слизової трахеї, а також крові. У цих випадках виділення вірусу здійснювалося з перемінним успіхом (iDowdle, Coleman, 1974).

Віруси грипу А і В розмножуються в курячих ембріонах і у ряду лабораторних тварин. Курячі ембріони і культури клітин точок макак резусів і зеленої мавпи вважаються найбільш чутливими для виділення вірусу. Вірус грипу типу С виділяли лише на курячих ембріонах.

Для максимально успішного виділення вірусів слід заражати 10-11-денні ембріони одночасно в порожнині амніону і аллантоиса. Ембріони інкубують при 33 ° С 3 - 4 дні і проби амніотичної і аллантоісной рідини перевіряють на наявність вірусу, додаючи еритроцити курей або морських свинок. Еритроцити морської свинки (або групи крові 0 людини) вважаються більш чутливими, ніж курячі, для виявлення вірусів H0N1 і H1N1 на ранніх пасажах в курячому ембріоні. Це не відноситься до вірусів,

поширеним в-даний час: вони-однаково агглютинируют і ті й інші еритроцити. Курячі еритроцити мають деякі переваги: ??швидше осідають, ніж еритроцити (ссавців, титри гемаглютинації їх легше враховуються і вони менш 'схильні неспецифічної аглютинації сироватками ссавців. У деяких випадках необхідні два або три «сліпих» амниотических ІАС-сажа, перш ніж вірус досягає титру, достатнього для гемаглютинації. Якщо вірус розмножується або легко адаптується до розмноження при інокуляції в іолость аллан-тоіса, амніотічеекіе пасажі не потрібні.

Для виділення вірусу грипу типу С 7-денні курячі ембріони заражають в порожнину амніону і інкубують при 33 ° С 5 днів. У порожнині аллантоиса вірус погано накопичується навіть після (численних пасажів на ембріонах.

Клітини нирок зелених мавп або макак резусів в мо-нослой'ной культурі в пробірках є найбільш чутливою культуральної системою для виділення вірусів грипу А і В. Неопеціфіческое (придушення вірусів речовинами, що містяться в сироватках в культуральному середовищі, є серйозною проблемою; моношар слід кілька разів промити середовищем без сироватки і використовувати таке середовище для підтримки культури після зараження. Віруси грипу А гірше ростуть в культурах клітин, ніж віруси грипу В. цитопатичної ефект проявляється у вигляді накопичення вакуолізуються клітин, які потім дегенерують або відокремлюються від скла. цитопатичної ефект проявляється у вигляді накопичення вакуолізуються клітин, які потім дегенерують або відокремлюються від скла. цитопатичної ефект слабовиражени, непатогнамонічен, може не виявлятися при перших пасса'жах. Присутність вірусу зазвичай встановлюється гемадсорбції еритроцитів морської свинки (Vogel, Shelokov, 1957) протягом 3-4 днів після зараження , задовго до розвитку вираженого цитопатического ефекту.

Більшість виділених штамів вірусу грипу типу В може бути виявлено гемадсорбції або тим агглютинацией протягом 3-4 днів після зараження. Цитопатичної ефект зазвичай теж помітний. Клітини стають зернистими, набухають, округлюються; пізніше розвиваються пікноз і фрагментація, шар клітин зрештою руйнується. Розвиток цітолатічесшго дії, і накопичення (гемагглютининов можуть бути прискорені для вірусів А і В, якщо помістити пробірки в обертовий барабан, хоча ймовірність виділення вірусу від цього не збільшується.

Слід одночасно культивувати незаражені культури клітин в пробірках, щоб виключити можливість випадкової контамінації вірусами. Вірус парагрипу типу 2 (SV5), що викликає гемадсорбції, є нерідким кон-

тамінантом в культурах нирок макак резусів. Неспецифічна адсорбція старих еритроцитів характерна для більшості культур ниркових клітин і може бути помилково прийнята за вказівку на присутність вірусу (Dowdle, Robinson, 1966), тому для гемадсорбції повинні використовуватися тільки свіжі еритроцити. Більшість культур клітин нирки макак резусів містить віруси типів SV40 і SV13 («пеня» вірус). Хоча присутність цих агентів небажано і може перешкодити інтерпретації цитопатического ефекту, вони не впливають, 'мабуть, на чутливість клітин - до вірусів грипу при їх виділенні.

Важко оцінити кількісно ефективність виділення вірусів грипу А і В у культурі тканини і на ембріонах. Велика кількість виділюваних штамів обох вірусів сильно варіює по роках. Взагалі кажучи, культура клітин нирок мавп має перевагу при виділенні вірусів В, але ступінь цього (переваги варіює. Вірус А ще більш вариабелен і для нього курячі ембріони дошкульніше клітинних культур. | З цієї причини, а також у зв'язку зі значною біологічної (як і антигенної) мінливістю вірусів грипу не завжди можна сказати заздалегідь, який метод виділення виявиться більш ефективним. Зараження первинних культур нирок макак резусів або зелених мавп одночасно із зараженням курячих ембріонів в порожнину аллан-. тоіса і амніону рекомендується для виділення максимальної кількості штамів вірусів грипу А і 'В.