Г. КУРЯЧИЙ ЕМБРІОН

Курячі ембріони широко використовуються для виділення і розмноження вірусу ще з часу першого опису зараження в порожнину амніону (Burnet, 1940). Класична робота Beveridge і Burnet з культивування вірусів і рік-КЕТС в курячому ембріоні була опублікована в 1946 р. З тих пір майже не було отримано істотних доповнюючих даних.

Деякі ранні рекомендації зараз виглядають, однак, застарілими у зв'язку з біологічної мінливістю вірусів грипу. У 40чх тодах для виділення вірусів грипу типів А і В рекомендувалося зараження 13-14-денних ембріонів в порожнину амніону, а для адаптованих в лабораторії штамів - зараження в порожнину аллантоиса 10 - 12-денних ембріонів. Аж до 1968 р. виділення вірусів грипу А і В можна було здійснити, як правило, лише за допомогою зараження в порожнину амніону і для успішної адаптації було потрібно багато пасажів. Дуже рідко виділяли штам шляхом зараження в порожнину аллантоиса. З 1968 р. людські штами вірусу грипу А виділяються з однаковою легкістю при обох шляхах зараження: введення матеріалу в порожнину амніону не дає ніяких переваг. Відносно вірусу грипу типу В протягом багатьох років теж можна спостерігати зміни. Оскільки важко передбачити заздалегідь нахил штаму того чи іншого вірусу до розмноження при певному способі введення, в якості стандартної процедури рекомендується зараження 11-денних ембріонів в порожнину як амниона, так і аллантоиса.

Неадаптовані віруси, введені в амніон 13-денних ембріонів, розмножуються спочатку в трахеї і легень. Вони можуть викликати загибель ембріона, але можуть і не викликати її. Віруси, багаторазово пасеровані цим шляхом, розмножуються в амніотичної оболонці і епітеліальних покривах ембріона, а також в респіраторних шляхах, викликаючи множинні крововиливи і швидку загибель його. Після кількох пасажів штам набуває здатність розмножуватися при зараженні в порожнину аллантоиса.

Штами, що не адаптовані до курячого ембріону (фаза О-від original, тобто вихідна), нерідко дають більш високі титри гемаглютиніну з еритроцитами морської свинки або людини, ніж з курячими еритроцитами. 'Після адаптації (фаза D - від derived, тобто похідне) вірус зазвичай

агглютинирует курячі еритроцити до тих же титрів, що еритроцити ссавців. Цей перехід із фази О в фазу D (Burnet, Bull, 1943) утворилася не 'завжди. Більшість штамів вірусів грипу А і В, виділених після 1968 р., агглютинируют еритроцити морокою свинки і курячі еритроцити до однакових титрів.

Адаптовані віруси, введені в порожнину аллантоиса подневная курячого ембріона, розмножуються предже всього в ентодермальних-клітинах хоріон-аллантоісной оболонки, хоча вірус можна виявити також у клітинах амніотіче-ської оболонки і респіраторних шляхів.

Накопичення вірусу в порожнині аллантоиса має очевидні переваги, оскільки виходить великий обсяг вірусеодержащего матеріалу і його легко збирати. Добре адаптовані штами можуть давати 109-1011 вірусних частинок на 1 мл. Вірус однаково добре розмножується в ембріонах від 10 - до 13-дневното віку, але обсяг аллан-тоіеной рідини різко зменшується, починаючи з 13-го дня. Крім того, у ембріонів 'більш раннього віку міститься менше солей сечової кислоти ш аллантоісной рідини; в міру розвитку ембріона їх зміст наростає. Ембріони, заражені в 12 - '13-денному віці, містять аллантоісную рідина, яка мутніє відразу після охолодження; за кілька днів у ній утворюється рясний осад. Опади-солей сечової кислоти містять вірус і їх утворення може різко знижувати титр вірусу в рідині.

Величина заражающей дози вірусу-може істотно впливати на його урожай. Рекомендується використовувати дози від 104 до Ю5 ЕІД50 на 1 мл. При використанні більш низької дози урожай вірусу може бути низьким, а динаміка репродукції-нерівномірною. Більш високі заражають дози можуть вести, до зниження врожаю (Miller, 1944). При цьому може також розвиватися ефект фон Магнуса (von Magnus, 1952), тобто збільшення відношення неінфекційних часток <до інфекційних. Цей феномен обговорюється в гл. 1.

Для деяких спеціальних досліджень може виявитися необхідним культивування (вірусу в клітинах оболонки аллантоїса без репродукції вірусу в інших тканинах ембріона. Для'такіх досліджень можуть використовуватися. Деембріо-вані яйця (Bernkoff, 1949). Однак урожай вірусу в них набагато нижче, ніж в ннтактних ембріонах, і цей метод не може бути рекомендований для постійного використання.