Д. ФРАГМЕНТИ ХОРІОН-аллантоісной ОБОЛОНКИ НА яєчної шкаралупи

Оскільки експерименти, що вимагають зараження великої кількості курячих ембріонів, дороги і трудомісткі, переваги техніки, що дозволяє провести такий же досвід з викорис-

зованием фрагментів одного яйця, очевидні. При цьому досягається і однорідність тканини, оскільки знімається проблема неоднакової чутливості різних ембріонів до вірусу.

Fulton і Armitage (1951) першими запропонували спосіб розрізання хоріон-аллантоісной оболонки (ХАО) на маленькі шматочки і їх підтримки в чашках на пластикових дошках, але титри вірусу при цьому (були значно нижче, ніж в интактном ембріоні. Fazekas de St. Groth і White (1958) поліпшили методику, змінивши середовище і використавши шматочки, не відокремлені від шкаралупи. (При цьому шкаралупа забу-ферівала середовище і служила опорою для тканини; експонувалася максимальна поверхню, причому тільки та сторона оболонки, яка чутлива до вірусної інфекції. Інфекційні титри більшості штамів грипу А в такій системі не поступаються титрам: в интактном ембріоні. Розмноження вірусу грипу В йшло менш успішно. Ця методика особливо зручна для титрування інфекційності і для реакції нейтралізації з вірусом грипу А, а також для швидкого виділення і клонування рекомбінантов вірусів грипу A (Webster, 1970).

Ш. КРУГ ГОСПОДАРІВ СЕРЕД ЛАБОРАТОРНИХ ТВАРИН

А. тхорів

Вірус грипу людини А був вперше виділений на тхорах (Smith et al., 1933). З тих лор тхорам приділяли багато уваги, спочатку як засобу виділення вірусу, а пізніше як моделі для вивчення патогенності та імунології грипу.

Тхори Високовоспріімчівость до зараження вірусами грипу типу А. Інтраназальне введення інфекційного вірусу викликає через 48 год температурну реакцію, яка може тривати від 24 до 72 ч. У тварин у цей період розвиваються симптоми грипу: риніт, чхання, нежить, втрата апетиту, млявість. Вірус виділяється в зовнішнє середовище протягом перших днів захворювання і легко може передаватися незараженим тхорам і людям (Smith, Stuart-Harris, 1936). Тхори можуть заражатися від людини природним шляхом при контакті, тому при експериментальному зараженні слід заздалегідь переконатися ш відсутності у них антитіл до циркулюючих серед людей вірусам грипу.

Повідомлялося, що тхори були високочутливі до вірусів грипу А, що переважали в середині 30-х років, але менш чутливі до більш пізнім штамів АЛЕ, до штамів HI і до вірусу грипу В (Hirst, 1947b; Sugg, Nagaki, 1955). Можливо, що це дійсно так, але скільки-небудь систематичних досліджень з використання тхорів для виділення вірусів А і В не проводилося після початку 40-х років. До того часу техніка використання курячих ембріонів набула широкого поширення, і, природно, застосування, тхорів для виділення вірусу 'вийшло з ужитку.

Тхори, однак, залишаються широко використовуваної моделлю для вивчення грипу людини. Картина захворювання у тхорів вельми схожа з такою у людини (Shope, 1934, Francis, Stuart-Harris, 1938; Liu, 1955; Sugg, Nagaki, 1955; Haff et al., 1966). Різні штами вірусів грипу викликають широкий спектр аслініческіх проявів хвороби. Реакція на зараження варіює від ліпленням бестемпературной респіраторної інфекції з вогнищевими гістологічними змінами в передній частині носових ходів (Haff et al., 1966) до гострої температурної реакції з швидким розвитком некрозу і відторгненням клітин миготливого епітелію (Shope, 1934; Francis, Stuart-Harris, 1938) і навіть до вірусної пневмонії с. руйнуванням клітин, що вистилають альвеоли (Hers, 1963; Mulder, Hers, 1972). Раніше за допомогою світлової мікроскопії ^ отримані дані про вірусопеціфічеекіх патологічних змінах епітелію дихальних шляхів були пізніше підтверджені електронно-мікроскопічними дослідженнями (Hotz, Bang, 1957) і методом флуоресцентних антитіл (Liu, 1955).

При інтраназальному зараженні вірус розмножується в носових раковинах, легких, трахеї, стравоході (Haff et al., 1966; Basarab, Smith, 1969). Вірус виявлявся тільки в цих тканинах, хоча інші (сечовий міхур, матка, кон'юнктива) теж сприйнятливі ж нього. Переважне розмноження вірусу в тканинах респіраторних органів спостерігається навіть при внутрішньовенному або внутрішньосерцевому введенні вірусу (Basarab, Smith, 1969). Переважне зараження саме респіраторної тканини було також підтверджено Barber і Small (1974) в досвіді, при якому сформована хірургічним шляхом сумка з тканини трахеї пересаджувалася під шкіру. Вірус вражав як трахею, так і імплантували тканину трахеї незалежно від шляху зараження. Пасивна імунізація сироваткою тхорів, що містила антитіла проти вірусу, що не запобігала поширення вірусу гематогенним шляхом.

Зараження тхорів вірусом грипу до підвищення вмісту білка і короткочасного появи нейтралізують антитіл у змивах з носа, <а також до швидкого підйому рівня нейтралізують антитіл IB сироватці. Після одужання тхори Імунозахищені до повторного зараження гомологічним вірусом (Smith et al., 1933; Francis, Stuart-Harris,

1938; Haff et al., 1966; Marois et al., 1971). Оскільки це досить близько нагадує реакцію на зараження у людини, відновився інтерес до зручної моделі для вивчення імунітету і методів імунізації. Potter et al. (1972a, b) і Potter (1973) у серії повідомлень описали відсутність захисного ефекту при внутрішньом'язовому введенні водної інактивує-ванній вакцини. Імунізація з використанням ад'юванта забезпечує деяку ступінь захисту і викликає підйом рівня антиген-аглютинінів в сироватці, але імунітет при цьому не настільки виражений, як після перенесеного захворювання. Це загалом відповідає даним, отриманим на людях, і дозволяє вважати, що відсутність повного імунітету при використанні убитої вакцини обумовлено її нездатністю викликати появу антитіл в секреті слизової оболонки носа. Антитіла в змивах з носа постійно виявляються при природному захворюванні (Haff, 1973).