ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО

Групповая принадлежность крови определяется реакцией агглютина­ции при помощи стандартных изогемагглютпнпрующих сывороток, моно-клональных антител или стандартных эритроцитов.

Реакция агглютинации может быть положительной (наличие агглютн-нагов эритроцитов) и отрицательной (агглютинаты отсутствуют). На осно­вании определенных сочетаний положительных и отрицательных результа­тов делается заключение о групповой принадлежности крови.

Для определения групп крови с помощью стандартных сывороток не­обходимы комплект стандартных гемагглютинирующих сывороток 0(1), А(П), В(Ш) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки AB(IV) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку); флакон с изотоническим раствором натрия хлорида с пипеткой; специальные блюдцеобразные пластины с лунками, имеющиеся в комплекте для опреде­ления групп крови, но могут использоваться любые прозрачные или белые пластины, на которых не растекаются кайли сывороток; палочки для сме­шивания крови.

Реакцию изоагглюгинации проводят в светлом помещении при опти­мальной температуре (около 20 °С). Определение группы крови при темпе­ратуре ниже 15° или выше 25 °С может дать неправильный результат.

Перед определением групп крови необходимо проверить пригодность стандартных сывороток. Гемагглютпнирующие сыворотки готовятся специ­альными лабораториями, входящими в состав системы службы крови. Они изготавливаются из сыворотки крови человека и содержат в различных ком­бинациях групповые изоагглютинины. Стандартные сыворотки выпускают­ся в герметически закрытых флакончиках или ампулах. Каждая ампула должна иметь этикетку с указанием групповой принадлежности данной сы­воротки, серии, обозначающей порядковый номер изготовления в текущем году, срока годности, места изготовления, титра. Титром сыворотки счита­ется ее максимальное разведение, при котором невооруженным шазом вид­на реакция агглютинации; его величина гарантируется изготовителем

Сыворотки окрашены: 0(1) - бесцветная; А(11) - голубая; В(Ш) - крас­ная; АВ (IV) - желтая. Кроме того, на этикетке имеется маркировка в виде цветных полос, соответствующих цвету сыворотки. На этикетке сыворотки 0(1) полос нет, сыворотки А(11) - две полосы синего цвета, сыворотки В(Ш) - три полосы красного цвета и сыворотки AB(IV) - четыре полосы желтого цвета. Сыворотки должны храниться при температуре 4-Ю °С. К использованию не пригодны сыворотки мутные; с наличием хлопьев или

ГЛАВА IX. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ

осадка; без соответствующих данных на этикетке или без этикетки; с ис­текшими сроками хранения.

Для проведения реакции стандартные сыворотки системы АВО двух различных серий наносят на пластинку под соответствующими обозначе­ниями слева направо в следующем порядке: 0(1), А(И), В(Ш). Затем к стан­дартной сыворотке добавляется маленькая капля исследуемой крови. Со­отношение сыворотка — кровь должно быть равно 10: ]. Ориентировочный объем -0,1 мл сыворотки (3 большие капли) и 0,01 мл крови (капелька размером с головку портняжной булавки). Исследуемую кровь смешивают со стандартными сыворотками путем осторожного покачивания пластин­ки либо перемешивания стеклянными палочками, используя отдельные палочки для каждой сыворотки

По мере наступления агглютинации (но не ранее чем через 3 мин) в каждую каплю смеси крови и гемагглюгинирующеи сыворотки (где насту­пила агглютинация) добавляют одну каплю изотонического раствора на­трия хлорида. Это разрушает ложную агглютинацию -- скопления эритро­цитов в виде «монетных столбиков». Окончательная оценка результата проводится через 5 мин (рис. 1).

Контроль с сывороткой АВО (IV)

"^с« 1. Определение группы крови по системе АВО (стандартные сыворотки)

Итак, если ни в одной из лунок агглютинации не будет, то исследуемая кровь относится к группе 0(1) - она не содержит ни А- ни В-антигенов.

При наличии агглютинации с сыворотками J и Ш групп исследуемая ^кРовь принадлежит к группе А(И).

ГЛАВ \ IX. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ

Если при оценке результата реакции отмечается агглютинация с сыво­ротками 1 и II групп, а с сывороткой III группы агглютинации пет, это поз­воляет отнести кровь к В(Ш) группе.

Если агглютинация произошла со всеми стандартными сыворотками трех групп крови, ю прежде чем решить вопрос о групповой принадлеж­ности, для исключения неспецифической агглютинабельности эритроци­тов, нужно провести реакцию еще и со стандартной сывороткой группы АВ(Д\). Исследование проводится с сывороткой одной серии. Лишь при отсутствии агглютинации в этой пробе испытуемую кровь можно отнести к группе AB(1V).

Определение групп крови по стандартным гемагпиотинпрующим сы­вороткам было основным методом установления групповой принадлежно­сти во всем мире до 80-х годов XX в.

В 1975 г. для определения групп крови предложены моноклональные антитела (цолпклоны). Цолпклоны получают путем иммунизации мышей антигенами А и В и представляют собой разведенную асцитнческую жид­ко стц содержащую иммуноглобулин М. Реагенты выпускают в ампулах или стандартных флаконах. Цоликлон анти-А окрашен в красный цвет, аи-ти-В - в синий.

В силу своих преимуществ метод определения групп крови при помо­щи моноклональных типирующих реагентов прочно вытесняет традицион­ный метод с использованием гемагглю типирующих сывороток. Преиму­щества моноклональных антител: высокая активность и авидноегь, пол­ная их стандартность, более быстрая реакция агглютинации. Применение цоликлонов исключает передачу вируса гепатита и ВИЧ.

Для определения групп крови применяют одну серию моноклональных антител: цоликлон аити-А и цоликлон анти-В. На планшет или в лунки пластины наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлона анти-А и цоликлона анти-В. Затем добавляют по одной малой капле (0,01 мл) иссле­дуемой крови. Цолпклоны и кровь перемешивают. Оценку результатов проводят через 2,5 мин (рис. 2).

Интерпретация возможных результатов:

• Агглютинация отсутствует как с цолнклоном анти-А, так и с цолик-лоном анти-В - исследуемая кровь принадлежит к группе 0(1).

• Аплюпшация наблюдается с цолнклоном анти-А и отсутствует с цо-

лнклоном анти-В - кровь принадлежит к группе А(И).

• Агглютинация отсутствует с цолнклоном анти-А и наблюдается с цо-

лнклоном анти-В - кровь принадлежит к i руине В(Ш).

ГЛАВА IX. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КР( ЖП

• Агглютинация наблюдается как с цол и клоном анти-А, гак и с цолпк-лоном анги-В - исследуемая кровь принадлежит к группе AU(IV)

Хотя цолпклопы и не даю г ложноположительных реакций, следует по­мнить, что при некоторых заболеваниях (ожоговая болели», миеломная бо­лезнь), а также в нуповппнои крови новорожденных возможна аутоа! глю-тннация. В свяш с этим при получении агглютинации с обоими цоликло-

Реакция агглютинации с цоликлонами

анти-А(И) | анти-В (1И|

Группакрови

0(1)

А(II)

В(III)