В (III)

АВ(IV)

Рис. 3. Определение группы крови по системе АВО (по стандартным эритроцитам)

тн-С и анти-Е. При любом способе определения следует строго придержи­ваться пнетукцпи, прилагаемых к реагентам.

Способы определения резус-принадлежности крови в лаборатории:

• методом агглютинации с мопоклональными антителами;

• методом конглютинации с применением желагина;

• с помощью реагента антирезус в пробирках с 33% раствором поли-глкжина;

• методом агглютинации в солевой среде с помощью сывороток, содер-

жащих полные резус-антитела;

• с помощью непрямого антиглобулинового тес га

Наиболее оптимальным в настоящее время представляется способ оп­ределения резус-принадлежности крови с использованием моноклональ-ных антител. С этой целью применяют цоликлон анти-D-cynep. Одну боль­шую каплю (0,1 мл) цоликлона наносят на планшет. Затем добавляют ма­лую каплю крови (0,01 мл) и перемешивают. Результат оценивают через 3 мин. Наличие агглютинации позволяет сделать заключение, что исследу­емая кровь является резус-положптельнон. При отсутствии агглютинации

ГЛАВА IX. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ

кровь квалифицируется как резус-отрицательная. Возможность использо­вания планшетного метода и небольшая продолжительность постановки реакции позволяют применять данный способ и у постели больного

Моноклональные антитела могут быть использованы для выявления D-антигена в любых модификациях прямой реакции агглютинации на пло­скости, в пробирках, в мпкроплате.

Цоликлон анти-D-cynep представляет собой прозрачную жидкость бледно-желтого цвета. Выпускается во флаконах (ампулах) объемом 1, 2, 5 или 10 мл (соответственно 10,20, 50 или 100 доз). В качестве консерванта применяется 0,1% раствор натрия азида (NaN₃). Срок хранения при темпе­ратуре 2-8 °С-2 года. Вскрытую ампулу можно хранить в закрытом виде в течение месяца. Титр цоликлона достигает 1:1024.

Цоликлон содержит полные анги-D моноклональные антитела, принад­лежащие к иммуноглобулинам класса М и не содержит антител иной специ­фичности. Поэтому реагент может быть использован для выявления D-анти­гена в эритроцитах любой группы крови. Определение D-антигена может производиться как в крови, стабилизированной с помощью консервантов, так и в крови без консерванта. Для получения более четкой реакции агглю­тинации целесообразно использование высокой концентрации эритроцитов.

Недостатком данного метода является то, что IgM антитела не вызыва­ют агглютинации некоторых образцов эритроцитов со слабо выраженным D-ангигеном или с частичным D. Поэтому кровь, которая при исследова­нии моноклоиальным анти-D реагентом была определена как D-отрица-тельная, нуждается в дополнительном тестировании методом конглютпна-ции с желатином или применением непрямого аптиглобулинового теста.

Метод конглютинации с применением желатина основан на реакции, происходящей между эритроцитами, которые содержат резус-антигены, и антителами к резус-фактору сыворотки.

Для проведения метода необходимы:

• стандартные сыворотки, содержащие антитела к заведомо известно­
му типу резус-фактора [aHTii-Rh₀D, при необходимости anni-rlV(C),

анти-гЬ"(Е) и др.], двух серий;

• стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроци­ты;

• физиологический раствор натрия хлорида;

• Ю% раствор желатина.

Определение проводят с двумя различными сериями сывороток анти-Рсзус, поэтому в штатив устанавливают 2 ряда пробирок. Стандартные сы­воротки должны быть одиогруппнымн с исследуемой кровью.

ГЛАВА 1\. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ

В качестве контроля используют резус-положительные и резус-отрица-тельные эритроциты 0(1) группы или одной группы с исследуемой кровью, а также проведение реакции на возможную аутоагглютинацию без добав­ления стандартной сыворотки.

На дно каждой пробирки вводят по 1 капле исследуемых эритроцитов, по 1 капле раствора желатина и по 1 капле сыворотки антирезус. Пробир­ки встряхивают и помещают в водяную баню при 46-48 °С на 10 мин. По­сле извлечения пробирок из водяной бани в них доливают 5—10 мл физио­логического раствора (до розового цвета). Пробирки переворачивают 2-3 раза в целях смешивания содержимого и оценивают результат.

При отсутствии агглютинации в пробирке видна равномерно окрашен­ная гомогенная жидкость, при наличии - «хлопья». Сначала проверяют контрольные образцы, подтверждающие специфичность и активность сы­воротки антирезус и желатина, т.е. наличие агглютинации в пробирке с ре­зус-положительными эритроцитами и отсутствие ее с резус-отрицательны­ми. Затем аналогично оценивают исследуемые образцы. Если в пробирках имеется агглютинация, следовательно, эритроциты содержат соответству­ющие резус-антигены

В настоящее время принято считать, что только наличие резус-фактора D обусловливает принадлежность крови к резус-положительной группе. Итак, при наличии агглютинации со стандартной сывороткой анти-D кровь признается резус-положительной. При наличии агглютинации со стандарт­ными сыворотками анти-С, анти-Е и т.д., а также при отсутствии агглюти­нации кровь относится к резус-отрицательной группе.