Определение общего (прямого) и непрямого билирубина в сыворотке крови
Принцип метода основан на взаимодействии билирубина с диазореактивом с образованием продукта малиново-красного цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию билирубина.
Прямой билирубин реагирует непосредственно с диазореактивом, а непрямой билирубин только после диссоциации его при добавлении к сыворотке кофеинового реактива.
Исследуемый материал: сыворотка.
Реактивы: физ. раствор, кофеиновый реактив, диазосмесь.
Оборудование: дозаторы, штатив с пробирками, фотометр с кюветами толщиной 0,5 см, штативы с пробирками.
Ход работы:
1. Подготовить для исследования три пробы: для общего билирубина, прямого билирубина и контроля согласно схеме:
| № | Реактивы | Общий билирубин | Прямой билирубин | Контроль |
| Сыворотка, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Кофеиновый реактив, мл | 1,75 | - | 1,75 | |
| Физ. раствор | - | 1,75 | 0,25 | |
| Диазосмесь, мл | 0,25 | 0,25 | - |
Содержимое пробирок перемешать.
2. Измерить оптическую плотность трех проб на ФЭКе при длине волны 540нм (зеленый светофильтр) в кювете толщиной 0,5 см против воды. Измерение оптической плотности пробы для определения прямого билирубина проводят через 5-10 минут после добавления диазосмеси, а пробы для общего билирубина — через 20 минут.
3. Вычесть из показателей оптической плотности общего и прямого билирубина оптическую плотность контроля.
4. Определить содержание общего и прямого билирубина по калибровочному графику исходя из их рассчитанной оптической плотности.
5. Рассчитать содержание непрямого билирубина.
Дата добавления: 2015-03-23; просмотров: 2620;