Определение С-реактивного белка в сыворотке

Принцип метода: постановка реакции преципитации в капилляре. В присутствии СРБ сыворотка образует преципитат (хлопья, осадок).

Исследуемый материал: сыворотка

Приготовление исследуемого материала: 0,5 мл крови берут из локтевой вены, пальца или уха, сыворотку отделяют от сгустка, она должна быть прозрачной.

Реактивы: диагностическая сыворотка к СРБ, полученная из крови животных после их гипериммунизации СРБ.

Ход постановки реакции:

1. Набрать в стеклянный капилляр диагностическую сыворотку на 1/3 длины.

2. Капилляр протереть ватой и опустить тем же концом в исследуемую сыворотку.

3. Набрать на 1/3 длины исследуемую сыворотку.

4. Перемешать содержимое капилляра покачиванием.

5. Погрузить конец капилляра в пластилин таким образом, чтобы уровень жидкости в нем был выше поверхности пластилина на 10-15 мм. Реакция происходит при температуре 12 плюс-минус 6 градусов.

6. Предварительно оценить результат через 4 часа. Окончательно — через 20 плюс-минус 4 часа по высоте выпадения преципитата в виде осадка, хлопьев. Выпадение преципитата в капилляре указывает на наличие СРБ в исследуемой сыворотке. Количество преципитата учитывают по всему капилляру. Результат записывают в виде:

«+» - слабо положительная (преципитат высотой 1 мм)

«++» - положительная (преципитат высотой 2 мм)

«+++» - положительная (преципитат высотой 3 мм)

«++++» - резко положительная (преципитат 4 мм и более).

Определение активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ)

Принцип метода: определяют время свертывания бедной тромбоцитами цитратной плазмы при добавлении оптимального количества кальция в условиях стандартизации каолином и активации кефалином контактной фазы процесса свертывания.

Реактивы: кальций хлористый 0,025 моль/л, каолин-кефалиновая смесь.

Оборудование: водяной термостат на 37 градусов Цельсия, секундомер, микропипетки на 0,1 мл, пробирки силиконизированные.

Ход определения: в пробирку с 0,1 мл исследуемой плазмы добавляют 0,1 мл каолин-кефалиновой смеси, энергично встряхивают смесь и инкубируют в течение 5 минут при 37 градусах Цельсия в водяном термостате. Через 5 минут добавляют 0,1 мл предварительно подогретого до 37 градусов Цельсия раствора хлорида кальция и одновременно включают секундомер. Отмечают время образования сгустка, вынимая пробирку из воды каждые 3-5 секунд и слегка наклоняя ее. Определение проводят 2-3 раза и берут средний результат.

Нормальные величины: 38-55 секунд.

Клинико-диагностическое значение: АЧТВ является тестом для поиска дефицита факторов, так как характеризует процесс образования тромбиназы по внутреннему пути. Удлинение АЧТВ наблюдается при наличии ингибиторов (гепарин), недостатке факторов свертывания крови. Укорочение АЧТВ указывает на гиперкоагуляцию (фактор риска тромбозов).