Методы определения Д-димера

Образование тромба начинается с момента, когда под действием тромбина фибриноген превращается в фибрин, который образует основной каркас сгустка крови и тромба. Димерная молекула фибриногена модифицируется до мономерных молекул фибрина, способных к полимеризации и образованию в конечном итоге нерастворимого фибрин-полимера. Модификация фибриногена до фибрин-мономерных молекул сопровождается отщеплением от фибриногена фибринопептидов А и В. Фибрин, который является конечным продуктом процесса свертывания крови, одновременно служит субстратом для плазмина — основного фермента фибринолиза. Фибринолитическая система в основном адаптирована к лизису фибрина, но при чрезмерной активации фибринолиза возможен и лизис фибриногена. Плазмин вызывает последовательное ассиметричное расщепление фибриногена и фибрина.

Образующиеся вледствие этого молекулы, имеющие разную молекулярную массу, обозначаются как продукты деградации фибрина/фибриногена (ПДФ). Продуктами деградации фибрина (полимерной молекулы) являются более крупные фрагменты — Д-димеры и тримеры, имеющие в своем составе ковалентную связь между Д-доменами фрагментов молекулы фибрина. В результате лизиса фибриногена образуются меньшие отдельные олигопептидные фрагменты. Д-димеры из молекулы фибриногена не образуются.

При ряде патологических состояний, характеризующихся активацией свертывания крови, происходит постоянный процесс трансформации фибриногена в фибрин с появление в кровотоке избытка фибринопептидов А и В, накоплением мономеров фибрина.

Параллельно с этим активация фибринолиза сопровождается повышенны образованием ПДФ, которые начинают взаимодействуют с мономерными молекулами фибрина, еще не подвергнувшимися полимеризации. Так образуются растворимые фибрин-мономерные комплексы (РФМК) — пул молекул, содержащий в своем составе фибрин-мономеры, фибринопептиды А и В и их комплексы с ПДФ.

Все перечисленные белковые молекулы — ПДФ, Д-димеры и РФМК — образуются в результате формирования фибринового сгустка, а затем его расщепления. Их концентрация отражает два процесса, непрерывно происходящих в организме человека — тромбообразование и тромболизис и, следовательно, может быть использована в клинико-лабораторной практике для оценки этих процессов.

Как упоминалось ранее, определение концентрации Д-димера проводится с использованием моноклональных антител. Применение иммуноферментного анализа (ИФА) для измерения концентрации Д-димера показало высокую стоимость единичных исследований, учитывая существенные затраты на специальное оборудование. Кроме того, ИФА достаточно длителен по времени и обычно проводится не индивидуально, а на серии образцов.

Методы, основанные на иммунодиффузии на порозных мембранах, покрытых антителами, которые захватывают Д-димер, позволяют работать с единичными образцами и получать результат в течение 15 минут. Однако такие тесты достаточно дороги и требуют решения вопросов о калибровке (как тест-полосок, так и приборов) и проведении внутрилабораторного контроля качества исследований.

Стоит отметить, что появились многочисленные публикации, в которых утверждается невозможность использования полуколичественного метода определения концентрации Д-димера в цельной крови для исключения тромбоза глубоких вен и тромбоэмболии легочной артерии.

Среди различных методов определения концентрации Д-димера самое широкое распространение получила технология микролатексной агглютинации с фотометрической регистрацией реакции (иммунотурбидиметрия). Суть метода заключается в том, что при добавлении плазмы пациента, содержащей Д-димер, к реагенту происходит увеличение оптической плотности реагента, представляющего собой взвесь микролатексных частиц, покрытых антителами против Д-димера. При этом измеряемое увеличение оптической плотности пропорционально концентрации Д-димера в исследуемом образце.

Иммунотурбидиметрический метод легко автоматизируется, данная технология реализована у части автоматических биохимических анализаторов. Определение концентрации Д-димера обычно проводится в комплексе с другими показателями системы гемостаза и, несомненно, его удобнее выполянть на коагулометрах. Для этих целей требуются коагулометры с оптическим способом регистрации.

В реальной клинической практике следует использовать только количественные тесты, причем их отрицательная диагностическая значимость для исключения тромбоза глубоких вен и тромбоэмболии легочной артерии должна быть не менее 98%, поскольку снижение чувствительности теста даже на 2% может оказаться причиной повышения смертности.