I. Методы механического разобщения бактерий.

1. Посев материала на чашки Петри бактериальной петлёй, шпателем, пипеткой, последовательно на несколько сред, не прокаливая инструмент (по Дригальскому). При таком посеве материал, находящийся на петле, расходуется постепенно, и по линиям сетки, нанесённым в конце посева, вырастают изолированные колонии бактерий.

2. Посев пластинчатыми разводками (метод рассева в глубине среды по Коху) применяют, если в исследуемом материале содержится много бактерий. Готовят десятикратные разведения материала в пробирках, затем выливают содержимое пробирок в стерильные чашки Петри, заливают 20 мл расплавленного и остуженного до 45⁰С МПА, перемешивают, дают агару застыть и инкубируют чашки в термостате.

3. Разобщение на основе подвижности бактерий. Материал засевают в каплю конденсационной жидкости скошенного МПА. При этом подвижные бактрии как бы «мигрируют» вверх по агаровому скосу и вырастают в виде колоний, расположенных в верхней части скошенного агара. При 2–3-кратном пассировании этих колоний в конденсационную жидкость скошенного агара удается получить чистую культуру подвижной бактерии (например, протея).

4. Разобщение на основе размеров микроорганизмов используют для получения чистых культур вирусов и микоплазм. Для этого смесь микроорганизмов фильтруют через микро- и миллипористые фильтры. Чистые культуры микроорганизмов получают в фильтрах.

II. Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический)основан на избирательной чувствительности животных к микроорганизмам различных видов. Это выражается в быстрой скорости размножения определенного вида микроорганизмов при попадании в кровь и внутренние органы животного, откуда их затем выделяют. При этом другие виды микробов погибают под действием защитных факторов организма животного. Так выделяют, например, чистую культуру пневмококков из организма белой мыши, чистую культуру палочки туляремии из организма морской свинки.

III. Методы, основанные на избирательной чувствительности микроорганизмов к воздействию внешних факторов (предварительно или во время культивирования):

а) физических факторов:

- высокой температуры: спорообразующие бактерии родов Clostridium и Bacillus выживают при нагревании смеси микробов, а неспорообразующие - гибнут;

- низкой температуры: при пониженных температурах культивируют Y. enterocolitica, Y. pestis, L. monocytogenes;

б) химических факторов:

- кислот: при обработке кислотой смесей кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий, последние гибнут, а кислотоустойчивые (возбудители туберкулёза) остаются в чистой культуре; использование среды Сабуро (рН 5-6) для выделения грибов;

- щелочей: использование щелочной пептонной воды для выделения V. cholerae; использование метода гомогенизации мокроты с 10% NaOH при выделении M. tuberculosis;

- солей: на элективных средах растут определённые виды бактерий (например, стафилококк растёт на ЖСА, содержащем 10–15% NaCl);

- антибиотиков: основан на избирательной чувствительности определённых видов бактерий к отдельным антибиотикам. При посеве смеси бактерий на среду с добавлением антибиотика, вырастают нечувствительные к нему бактерии: выделение микоплазм на средах с пенициллином, выделение анаэробов на средах с аминогликозидами.

- красителей: красители добавляют к питательным средам для подавления роста сопутствующей флоры: при выделении энтеробактерий в среду Левина добавляют метиленовый синий и эозин для подавления грамположительных бактерий, при выделении микобактерий в среду Левенштейна-Йенсена добавляют малахитовый зелёный.

- специфических ингибиторов: среда с теллуритом калия используется для выделения C. diphtheriae, среда с селенитом натрия используется для выделения Salmonella, среды с желчьюиспользуются для выделения энтеробактерий и бактероидов.