Биохимический метод

Биохимический метод используется для диагностики болезней обмена веществ, причиной которых является изменение активности определенных ферментов (генные или точковые мутации). С помощью этого метода открыто более 500 молекулярных болезней. Биохимические методы разнообразны: жидкостная хроматография, масс-спектрометрия, магнитная резонансная спектрометрия, бомбардировка быстрыми нейронами и др. Объектами биохимических методов служат любые биологические жидкости и клетки: моча, пот, плазма и сыворотка крови, форменные элементы крови, культуры клеток.

Выделяют два уровня биохимической диагностики: первичный (массовый) скрининг и уточняющий (селективный) скрининг. Массовый скрининг позволяет среди большого количества обследуемых выделить предположительно больных, имеющих какое-то наследственное отклонение от нормы (ФКУ, аномалии развития нервной трубки, врожденный гипотиреоз, адреногенитальный синдром, муковисцидоз). Селективный скрининг подразумевает уточнение диагноза у пациентов с подозрением на генные наследственные болезни.

Неонатальный скрининг - этим термином обозначают массовое обследование новорожденных для выявления ряда наследственных заболеваний. В целях своевременного выявления и их полноценной коррекции (терапии) в настоящее время в РФ осуществляется неонатальный скрининг пяти патологических состояний: фенилкетонурия (ФКУ), врожденный гипотиреоз (ГПТ), галактоземия, адреногенитальный синдром и муковисцидоз. Отметим, что ранее в РФ проводился неонатальный скрининг лишь двух заболеваний — ФКУ и врожденного ГПТ. Расширение программы неонатального скрининга с ранней диагностикой галактоземии, адреногенитального синдрома и муковисцидоза начато в 2006 году (в рамках реализации приоритетного национального проекта «Здоровье». В родильных домах России у новорожденных осуществляют забор образца крови (из пятки), которую наносят на специальную тест-полоску (тест-бланк), с последующим централизованным направлением в медико-генетическую консультацию, где проводится соответствующее исследование. При наличии подозрений на одно из перечисленных выше пяти заболеваний родители ребенка получают экстренное извещение с просьбой обратиться в медико-генетическую консультацию для повторного исследования.

Наиболее распространенными скрининг – тестами являются:

1. Проба Фелинга на ФКУ. К 2 мл мочи приливают 6 капель 10% раствора хлористого железа. Наличие сине-зелёной окраски говорит о положительном результате пробы - уровень фенилаланина больше 15 мл.

2. Проба Селиванова на фруктозурию. Несколько кристаллов резорцина растворяют в 3 мл концентрированной соляной кислоты (реактив Селиванова). К 1 объёму реактива прибавляют 2 объёма мочи, смесь подогревают на водяной бане. При наличии фруктозы смесь быстро приобретает интенсивное окрашивание, которое оценивается как положительный результат, однако, при более длительном нагревании положительную реакцию может дать и глюкоза.

3. Проба на галактозу и лактозу.К 1 мл мочи добавляют 0,5 мл концентрированного раствора аммиака и 3 капли 10% раствора едкого натрия, нагревают до кипения. Проба считается положительной при проявлении ярко-желтой окраски.

4. Проба Сулковича на кальций. К 1мл мочи добавляют 0,5 мл реактива (10,5 мл уксусной кислоты, 8,3 г щавелевой кислоты, 8,3 г сернокислого аммония на 500 мл воды). О количестве кальция судят по помутнению мочи через 1-2 минуты.

5. Проба на мукополисахариды. 1-5 капель мочи наносят на фильтрованную бумагу, высушивают. Полоска бумаги опускается в раствор толуидинового синего, с последующим отмыванием 10% раствором уксусной кислоты. Пурпурная окраска означает положительную реакцию.