Оплодотворение вне организма

С разработкой техники нехирургического извлечения эмбрионов у коров появилась возможность многократно получать зародыши без операционного вмешательства или убоя животного. Однако эффективность данного метода извлечения эмбрионов сравнительно низка (3-4 эмбриона за одно извлечение). К этому следует добавить, что данный прием позволяет получать эмбрионы, поступившие в матку на стадии морулы и бластоцисты. Для генетической и клеточной инженерии необходимы зародыши на стадии зиготы (одноклеточных эмбрионов), которые можно извлечь из яйцеводов только операционным путем. Существующие способы гормонального контроля времени овуляции у домашних животных не обладают точностью, следовательно, имеются большие трудности в получении зигот, необходимых для микрохирургии, путем естественного оплодотворения. В этой связи разработка техники оплодотворения вне организма имеет огромное значение в решении научных задач и практических вопросов, направленных на повышение эффективности разведения животных. С освоением техники оплодотворения in vitro появилась возможность развивать исследования по клеточной и генетической инженерии на млекопитающих и особенно на домашних животных. Какие практические задачи могут быть решены с помощью техники оплодотворения вне организма животного? Во-первых, проблема получения необходимого количества эмбрионов для трансплантации остается еще нерешенной, хотя трансплантация эмбрионов в настоящее время проводится достаточно успешно. Самки-доноры непредсказуемы в системе трансплантации эмбрионов, что объясняется высокой вариабельностью количества овулирующих животных и числа овуляций. Во-вторых, данный метод позволил бы получить значительно больше эмбрионов для трансплантации от животных с высоким генетическим потенциалом. Можно было бы создавать банки генетического материала путем сбора яичников у высокоценных самок во время убоя, что способствовало бы значительному ускорению селекции животных. В-третьих, метод оплодотворения in vitro намного быстрее и требует для работы значительно меньше спермы, а также может быть использован для объективной оценки оплодотворяющей способности сперматозоидов и яйцеклеток. В-четвертых, метод помогает селекционерам в преодолении бесплодия вследствие нарушения функций яйцеводов и матки. Вызывание суперовуляции, по мнению ряда исследователей, служит причиной повышенной эмбриональной смертности из-за изменения концентрации и соотношения половых гормонов. И, наконец, рассматриваемая техника позволяет получить сколь угодно много однояйцевых двоен, повысить эффективность использования семени от высокоценных быков.

Созревание яйцеклеток вне организма. Экстракорпоральному оплодотворению предшествует культивирование ооцитов in vitro, во время которого происходит их созревание до метафазы 2. Спонтанное возобновление мейоза ооцитов, выделенных из фолликулов кролика и культивируемых в питательной среде, было открыто в 1935 г. Пинкусом и Энзманом. Причем ооциты проходили последовательно все стадии созревания до метафазы 2, то есть до стадии оплодотворения без каких-либо гормональных воздействий. Позже это явление было установлено у яйцеклеток других видов животных. К моменту рождения телки ее яйцеклетки достигают уже диплотенной стадии профазы мейоза (специфического вида клеточного деления), типичной лишь для половых клеток. При этом образованные половые клетки содержат одинарный (гаплоидный) набор хромосом. В диплотенной стадии гомологичные хромосомы расходятся, между ними образуется продольная щель. На этой стадии мейоза дальнейшее созревание ооцитов приостанавливается до физиологической зрелости особи. Важную роль в подавлении мейоза играют клетки гранулезы и некоторые компоненты фолликулярной жидкости. После подъема уровня лютенизирующего гормона in vivo или извлечения ооцитов из фолликулов ингибирующее действие прекращается и мейоз возобновляется. При этом, как было отмечено выше, продолжается процесс созревания яйцеклетки до метафазы 2, т.е. ооциты дозревают до стадии, пригодной для оплодотворения. Однако следует отметить, что этот процесс не равнозначен созреванию, которое проходит ооцит in vivo до его овуляции. В условиях культивирования ооцитов «в пробирке» происходит лишь созревание ядра без участия цитоплазмы. Вследствие этого in vitro созревшие ооциты не способны к дальнейшему развитию после оплодотворения, так как в этом процессе большую роль играют цитоплазматические факторы, ответственные за формирование структуры белков. Motlik, Fulka (1976) показали, что в процессе нормального развития ооцита после оплодотворения играют важную роль вещества, выделяемые из зародышевого пузырька в цитоплазму. Thibault et al. (1976) установлено, что для обеспечения полного физиологического созревания ооцита необходимы стероидные гормоны. Moor, Trounson (1977) отмечают, что культивирование яйцеклеток овец в среде 199 с добавлением фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и лютеинизирующего гормона (ЛГ) по сравнению со средой без гормонов обеспечивает достижение метафазы большим числом ооцитов. Аналогичные результаты были получены и на коровах Fukui et al. (1982) при использовании эстрадиола, прогестерона, лютеинизирующего и хорионического гормонов. Отмечено заметное влияние половых стероидных гормонов (эстрадиола, прогестерона, тестостерона) на эффектиность созревания яйцеклеток, тогда как влияние гонадотропинов (ФСГ, ЛГ) было незначительным.

Исследования Dielman et al. (1983) показали, что в процессе созревания ооцитов содержание половых стероидных гормонов в фолликулярной жидкости коров подвергается значительным изменениям. Так, в первые 6 часов после выброса ЛГ в фолликулярной жидкости отмечается высокая концентрация эстрадиола (гормона, вырабатываемого яичником, надпочечником, а также плацентой и семенниками), затем она резко снижается и к 20 часам уменьшается более чем в 10 раз по сравнению с исходной. Аналогичные изменения претерпевает и содержание тестостерона в фолликулярной жидкости. Более стабильный уровень в течение упомянутого периода отмечен у прогестерона. Содержание последнего резко повышалось непосредственно перед овуляцией. Эти данные доказывают необходимость создания нестатической концентрации половых гормонов в культуральной среде в процессе созревания яйцеклеток.

Moor, Trounson (1977) для повышения полноценности развития ооцитов использовали метод культивирования их внутри интактных фолликулов. В их экспериментах после трансплантации осемененной овце культивируемых in vitro ооцитов в изолированных фолликулах развитие до бластоцисты происходило у 26-50% яйцеклеток. Пересадка бластоцист в 63% случаев завершалась рождением ягнят. Позже было установлено, что многие явления внутри фолликулярных клеток, включая биосинтез стероидов и синтез белков, регулируют гонадотропные гормоны. Поэтому последние должны быть обязательным компонентом среды при культивировании ооцитов с фолликулярными клетками.

Staigmiller, Moor (1984) с целью выяснения роли фолликулярных клеток в созревании ооцит культивировали их вместе без кумулюса (клетки на поверхности блестящей оболочки яйцеклетки), ооциты с кумулюсом или ооциты с кумулюсом и фолликулярными клетками. Культивирование осуществляли в среде ТС 199 с 10% фетальной сывороткой плода и гонадотропинами (ЛГ, ФСГ и пролактин) и эстрадиолом. Ооциты культивировали при 37 С в течение 24 часов в СО2 - инкубаторе при медленном покачивании, а затем пересаживали в яйцевод овцы в охоте. Сперму вводили перед пересадкой яйцеклеток в оба рога маток. Через 10-12 дней эмбрионы извлекались из матки и классифицировались по категориям. Результаты показали, что культивируемые in vitro ооциты без кумулюса в дальнейшем не развивались. Добавление фолликулярных клеток в культуральную среду без кумулюса не улучшило способность яйцеклеток к развитию, так как 83% ооцитов остались на одноклеточной стадии. Ооциты с кумулюсом, но без фолликулярных клеток, в 87% случаев остались одноклеточными. Развитие до вылупившейся бластоцисты у 37% ооцитов отмечалось при добавлении фолликулярных клеток с кумулюсом. В другом опыте культивирование оплодотворенных ооцитов с кумулюсом и слоем подлежащих грануляционных клеток (клетки молодой незрелой соединительной ткани обеспечивают энергетический субстрат ооциту) обеспечило развитие 43% клеток до бластоцисты, а после пересадки их реципиентам эмбриональная выживаемость достигала 63%. Добавление фолликулярных клеток к данному комплексу не оказало существенного влияния на развитие клеток. Результаты исследований свидетельствуют о том, что для развития оплодотворенных ооцитов требуется определенное критическое количество фолликулярных клеток, в то время как их присутствие для проявления мейоза не обязательно. Соматические клетки, служат не только энергетическим субстратом для ооцитов, но и участвуют в переносе некоторых предшественников аминокислот, нуклеотидов и фосфолипидов в ооцит. Фолликулярные клетки генерируют инструктивные сигналы, которые влияют на ядро и прямой синтез определенных структурных белков. Эти сигналы очень важны для созревания ооцитов в первые 6-8 часов после инициации мейоза. Изменение сигналов ведет к нарушениям в онтогенезе эмбриона. Неслучайно метод культивирования изолированных фолликулов признан многими исследователями как наиболее современный способ, применяемый для подготовки ооцитов к оплодотворению в условиях in vitro. Этот метод дает возможность сохранить естественные связи между ооцитом и соматическими элементами фолликула. В данном случае фолликул выступает в роли биофабрики стероидных гормонов. Сущность метода заключается в следующем. Фолликулы выделяют из яичников во время убоя скота и доставляют их в лабораторию в среде ТС-199. Яичники промывают стерильным физиологическим раствором, содержащим антибиотики, а затем разрезают скальпелем в месте вхождения в него сосудов. Фолликулы хорошо заметны на поверхности разреза. С помощью пинцета фолликулы отделяют от соединительной ткани и культивируют в СО2 – инкубаторе в упомянутой среде с добавлением 20% фетальной сыворотки плода и гормонов СЖК, ФСГ, ЛГ, эстрадиола и инсулина в течение 48 часов. В таких условиях примерно до 70% ооцитов созревают до стадии метафазы 2.

Оплодотворение in vitro.Оплодотворение ооцитов «в пробирке» в настоящее время достигнуто у более 20 видов животных. В 1968 г. появилось первое сообщение о нормальном потомстве, полученном от мышей, в 1974 г. – от крыс, а в 1981-1984 гг – от крупного рогатого скота, свиней и овец.

Оплодотворение ооцитов in vitro означает, что сложные физиологические процессы, протекающие в организме беременной самки, должны проходить в относительно простых и статических условиях. Важным этапом в разработке метода оплодотворения in vitro было открытие явления капацитации сперматозоидов Chang, Austin (1951). Ими установлено, что оплодотворение наступает только в том случае, если сперматозоиды предварительно в течение нескольких часов до овуляции находятся в яйцеводе самки. В это время они претерпевают определенные физиологические изменения и становятся способными к оплодотворению. Считают, что капацитация сперматозоидов представляет собой прежде всего изменения или удаление протеина и других макромолекулярных субстанций в плазматической мембране спермия. Через плазматическую мембрану вымываются протеолитические ферменты, необходимые для пенетрации зоны пеллюцида. Продолжительность капацитации сперматозоидов мыши и хомяка в матке и in vitro составляет 1-2 ч, крыс - 5-6 ч, тогда как кроликов в матке - около 6 ч, а in vitro - около 10 ч. Chang (1959) впервые получил потомство после пересадки яйцеклеток, оплодотворенных in vitro сперматозоидами, капацитированными в матке кролика. После отработки условий капацитации сперматозоидов в половом тракте самки проводились опыты по капацитации in vitro. Для этой цели вначале в среду добавляли яйцеводную и фолликулярную жидкости или сыворотку крови. Позже была достигнута капацитация и оплодотворение in vitro у мышей в среде, содержащей бычий сывороточный альбумин и приуват натрия без добавок биологических жидкостей. Основной средой для капацитации сперматозоидов и оплодотворения in vitro у мышей крыс и хомяков был раствор Кребса-Рингера, содержащий глюкозу, сывороточный альбумин, лактат и пируват натрия.

Oliphant, Brackett (1973) с помощью иммунологических методов показали, что процесс капацитации включает удаление или перестройку компонентов семенной плазмы, которые покрывают поверхность сперматозоидов. Эти же исследователи предложили метод капацитации сперматозоидов in vitro, который заключался в следующем. Сперматозоиды отмывали от семенной плазмы суспензированием в дефинитивной изотонической или гипертонической среде и центрифугировали. Надосадочную жидкость сливали, а осадок снова суспензировали в свежей среде. Затем их инкубировали в среде в течение 20 мин, после чего подвергали центрифугированию при комнатной температуре. В последующем сперматозоиды инкубировали в водяной бане при 38°С. Оплодотворение in vitro проводилось следующим образом. Ооциты с кумулюсными клетками собирали с поверхности яичника и помещали в маленькие чашки Петри, содержащие дефинитивную среду. Оплодотворение проводили путем добавления примерно 1 млн. сперматозоидов в чашку, содержащую свежеовулировавшие яйцеклетки, после чего гаметы инкубировались во влажной камере с 5% СО2 в воздухе при 38°С. Исследователями были пересажены 176 двух- и четырех-клеточных эмбрионов. Из них 24 эмбриона, или 13,1%, имплантировались, но большинство из них рассосалось.

В дальнейших опытах была определена оптимальная концентрация сперматозоидов для оплодотворения in vitro ооцитов лабораторных животных. Установлено, что при оплодотворении in vitro головки сперматозоидов проникают через зону пеллюцида у хомяков за 3-7 мин. У мышей и крыс продолжительность проникновения капацитированных сперматозоидов через зону пеллюцида и превращения головки сперматозоида в мужской пронуклеус составляет примерно 2 ч, а дробление оплодотворенной яйцеклетки наступает через 30 ч.

Л.К.Эрнст и соавт. (1983) осуществили экстракорпоральное оплодотворение без предварительной обработки сперматозоидов. В этих опытах сперму быков дважды промывали в средах Бринстера или ТС 199. Авторы заключают, что главным в оплодотворении является полноценное созревание яйцеклеток. Процент дробящихся ооцитов был одинаковым, когда созревшие яйцеклетки осеменяли капацитированными и некапацитированными сперматозоидами. По мнению исследователей, капацитация сперматозоидов – естественный процесс, завершающийся при прохождении через клетки кумулюса у зоны пеллюцида яйцеклетки. Если яйцеклетка полноценна и окружена клетками кумулюса, то и капацитация сперматозоидов протекает нормально к моменту их контакта с зоной пеллюцида.

Достигнутые результаты на лабораторных животных позволили ученым в начале 70-х годов приступить к разработке метода оплодотворения in vitro у домашних животных. Необходимо отметить, что если большинство экспериментальных исследований выполнялось на ооцитах после созревания in vivo, то аналогичные опыты с с.-х. животными проводились в основном на яйцеклетках, предварительно культивируемых in vitro с целью их дозревания.

Sreenan (1970) и Trounson et al. (1977) не наблюдали проникновения сперматозоидов в яйцеклетки коров, пересаженные в яйцеводы кролика, куда введены сперматозоиды быка. Результат был положительным в случае использования в качестве инкубационной системы для ооцитов яйцеводов овцы. Iritani, Niwa (1977) оплодотворили ооциты коров in vitro сперматозоидами, выдержанными в течение 12-14 ч в яйцеводе эстрального кролика. Эти же исследователи проводили опыты по капацитации сперматозоидов быка в изолированном половом тракте эстральной коровы. Сперму помещали в изолированный половой тракт коровы (рог матки и яйцевод), предварительно отмыв ее раствором Кребса-Рингера. После введения сперматозоидов яичниковый конец яйцевода, маточно-трубное соединение и шеечный канал матки лигатировали и помещали половой тракт в физраствор на 3-4 ч при 37°С. Затем промывали яйцеводы и рога матки с целью извлечения сперматозоидов, и последние вносили в среду с культивируемыми яйцеклетками на 18-21 ч. При этом оплодотворение яйцеклеток с образованием двух пронуклеусов было достигнуто в случае использования сперматозоидов, капацитированных как в яйцеводе (7%), так и в роге матки (6%). Дальнейшее совершенствование описанной техники позволило Iritani в 1980 году достичь оплодотворения 22-26% ооцитов. Эти яйцеклетки дробились до 2-4-клеточной стадии в условиях in vitro и in vivo. В этих опытах было установлено, что для капацитации сперматозоидов быка в половом тракте коров или самок другого вида требуется от 4 до 6 ч.

Оплодотворение яйцеклеток коров спрематозоидами, капацитированными in vitro, было достигнуто в конце 70-х годов. Для этой цели Bracett et al. (1978) использовали физиологическую среду с высокой ионной силой. В этих опытах, в отличие от предыдущих экспериментов, в которых применялись ооциты после дозревания in vitro, яйцеклетки извлекались из предовуляторных фолликулов или из яйцеводов вскоре после овуляции. По данным исследователей, 14 из 25 яйцеклеток оплодотворились, а 10 из них достигли 2-клеточной стадии за 24 ч и 4 из 7 ооцитов - 4-клеточной стадии за 48 ч. Позже Iritani et al. (1984) доказали, что сперматозоиды могут быть капацитированы не только в среде с высокой ионной силой, но и в изотонической среде. Причем, авторы пришли к заключению, что капацитация возможна в период хранения сперматозоида при температуре 20°С.

Эффективность оплодотворения in vitro в значительной степени зависит от факторов, связанных с яйцеклетками (Brackett et al., 1982). Так, проникновение сперматозоидов, капацитированных в среде с высокой ионной силой, в ооциты регистрировалось у 40% яйцеклеток, созревших в предовуляторных фолликулах или яйцеводах (так называемые тубальные ооциты), тогда как среди ооцитов, дозревших in vitro, только у 10% отмечено оплодотворение. Позже эффективность этого опыта подтвердилась авторами при получении двойни. 2 из 5 хирургических пересадок завершились двойневыми стельностями. Однако эффективность оплодотворения была невысокой -11-14%. Эмбрионы в условиях культивирования in vitro развивались до 4-8-клеточной стадии, что не позволяло экспериментаторам осуществить нехирургическую трансплантацию (для нехирургической трансплантации и замораживания требуется эмбрионы довести до стадии компактизации). Однако даже если и будет разработана совершенная методика экстракорпорального оплодотворения тубальных ооцитов, огромный генетический материал ооцитов, содержащихся в фолликулах, останется не реализованным в воспроизводстве и селекции. Только разработка метода получения телят от экстракорпорального оплодотворения фолликулярных ооцитов (яйцеклеток, созревших in vitro) создаст реальную возможность существенного повышения эффективности трансплантации и создания крупных банков эмбрионов от генетически ценных коров. Такая методика обеспечит и более дешевое получение в достаточном количестве зигот и ранних эмбрионов, необходимых для переноса ядер и рекомбинантных ДНК, а также для получения трансгенных животных.

Первый теленок из дозревшего «в пробирке» фолликулярного ооцита после его экстракорпорального оплодотворения родился в 1983 году (Л.К. Эрнст и соавт.). Исследователи для этой цели использовали ооциты, созревшие in vitro, и некапацитированные свежие или замороженно-оттаянные сперматозоиды. Каждому реципиенту – телке хирургическим методом трансплантировали в яйцепровод по 1-7 эмбрионов, находящихся на 2-4-клеточной стадии дробления. Одному реципиенту пересадили 3 четырех клеточных эмбриона, полученных от экстракорпорального оплодотворения in vitro созревших фолликулярных ооцитов, взятых из яичников двух- и одномесячных телочек и одной половозрелой коровы. В результате такой трансплантации и родился живой теленок. Однако хирургическая трансплантация находящихся на первых стадиях развития эмбрионов в яйцепровод реципиента существенно усложняет биотехнологию трансплантации. Поэтому очень важно получение эмбрионов на стадиях морулы или бластоцисты, пригодных для трансплантации нехирургическим способом.

Л.К.Эрнст и соавт. (1987) использовали яйцевод кролика для обеспечения ранних стадий развития эмбрионов коров как после оплодотворения in vitro, так и после оплодотворения в яйцеводе кролика (1987). Они извлекали ооциты из фолликулов и культивировали в среде 199 с 20% фетальной сывороткой плода при добавлении эстрадиола, прогестерона, тестостерона и лютеинизирующего гормона в течение суток при 38°С во влажной камере, содержащей 5% СО2, 5% О2 и 90% N2. Капацитацию сперматозоидов проводили в среде с высокой ионной силой и в яйцеводе эстрального кролика за 4-5 ч до пересадки ооцитов. Через 19-20 ч после соединения яйцеклеток со сперматозоидами в яйцеводе кролика или in vitro ооциты пересаживали в лигатированный яйцевод ложнобеременного кролика для дальнейшего их развития на 4-5 суток. Оплодотворяемость при этом была 22-25%. Через 3 суток процент эмбрионов, достигших стадии морулы после оплодотворения в яйцеводе кролика, примерно в 4 раза превышает аналогичный показатель после оплодотворения в условиях in vitro. На 4 и 5 сутки эта разница несколько уменьшается, но по-прежнему остается значительной в пользу ооцитов, оплодотворенных в яйцеводе кролика. Это свидетельствует о том, что в яйцеводе кролика создаются более благоприятные условия для капацитации сперматозоидов быка и оплодотворения ооцитов, чем в известных пока культуральных средах. В результате хирургической и нехирургической трансплантации эмбрионов коров на стадии морулы было получено 6 стельностей, в том числе одна двойневая (5 из 6 стельностей дали ооциты, взятые из яичников коров, убитых на мясокомбинате). Родились по 2 живых теленка из ооцитов, оплодотворенных в яйцеводе кролика и “в пробирке”. Один теленок родился в результате нехирургической пересадки эмбриона, полученного после оплодотворения in vitro. Приживляемость эмбрионов, полученных в результате оплодотворения ооцитов в яйцеводе кролика, была почти в 6 раз выше, чем в случаях оплодотворения “в пробирке”.

Для развития эмбрионов крупного рогатого скота до стадии морулы и бластоцисты Crister et al. (1986) использовали лигатированные яйцеводы овцы. Весомых успехов в оплодотворении in vitro ооцитов коров достигли и ирландские ученые (Lu et al., 1987; 1988). В качестве временного реципиента для оплодотворенных клеток они использовали также яйцевод овцы. 80% ооцитов дробились до 2-клеточной стадии и выше, и почти половина из них достигла стадии морулы и бластоцисты.

Эксперименты по оплодотворению овец проводились по двум направлениям: “в пробирке” и введением фолликулярных ооцитов в яйцевод осемененной овцы. Как и у коров, эффективность оплодотворения ооцитов была выше, когда фолликулярные и овулировавшие клетки помещали в яйцевод со сперматозоидами, чем при использовании системы in vitro. Причем исследователи существенной разницы в развитии ооцитов до стадии бластоцист в случаях культивирования яйцеклеток in vitro и in vivo (в фолликулах) не наблюдали. В меньшей степени изучены вопросы оплодотворения “в пробирке” у свиней. Polge (1977) описал проникновение сперматозоидов в ооциты после созревания их in vitro и пересадки в яйцевод осемененной эстральной свиньи. Однако ни одна яйцеклетка не развилась до стадии бластоцисты, и у многих из них проявилась полиспермия.

Культивирование in vitro эмбрионов сельскохозяйственных животных.Видовая сыворотка крови была первой средой, которая испытывалась на пригодность для культивирования эмбрионов коров и овец. В этой среде развитие оплодотворенных клеток ограничивалось одним делением и прекращалось после 48 ч культивирования.

О возможности использования фолликулярной жидкости для культивирования эмбрионов сообщил Thibault в 1966 году. Он наблюдал в этой среде развитие зародыша коров с 1-4 клеточных бластомеров до морулы. Tervit et al. (1972) испытали синтетическую яйцеводную жидкость (СЯЖ). По данным авторов, 9% 8-клеточных бластомеров овец развивались до стадии ранней бластоцисты после 6-дневного культивирования в СЯЖ в атмосфере, состоящей из 5% СО2, 5% О2 и 90% N2. Более половины 8-клеточных эмбрионов, культивируемых в СЯЖ в течение 3 дней, после пересадки прошли путь онтогенеза до рождения потомства. Однако авторам не удалось получить стельности после культивирования одноклеточных эмбрионов. Bowan et al. (1975) отметили преимущественное развитие эмбрионов в средах СЯЖ и ХЭМ Ф-10 с осмотическим давлением 270 мосм по сравнению с 300 мосм. Последняя среда с добавлением фетальной сыворотки, по мнению ряда ученых, является наиболее благоприятной средой для культивирования эмбрионов “в пробирке”. Например, Wright et al. в 1976 году в среде ХЭМ Ф-10 наблюдали развитие эмбрионов коров с 1-2 клеточных бластомеров до вылупившейся бластоцисты. В следующем году Peters et al. аналогичных результатов достигли при использовании Среды Виттена с добавлением 0,5% бычьего сывороточного альбумина. Они также отметили, что “в пробирке” развитие 1-4-клеточных эмбрионов ограничено по сравнению с 8-клеточными. Эта среда, но с повышенным содержанием бычьего сывороточного альбумина (15%) оказалась оптимальной для культивирования эмбрионов свиньи (Linder, Wright, 1978).

В настоящее время научные поиски в области оплодотворения с.-х. животных “в пробирке” получают дальнейшие развития. Они направлены на исключение из этой технологии временного реципиента (яйцеводы кролика, овцы и др.) для развития ранних эмбрионов. Подходящей заменой временного реципиента может быть монослой яйцеводных и грануляционных клеток.

Контрольные вопросы: 1.В чем состоит практическая значимость техники оплодотворения вне организма?; 2. Расскажите о результатах исследований по совершенствованию процесса созревания яйцеклеток вне организма; 3. Принципы и подходы, используемые в оплодотворении вне организма.

Лекция №8