Влияние температуры.

В связи с тем, что число соударений между молекулами пробы (люминофорами) и молекулами растворителей зависит от температуры, этим параметром определяется и само флуоресцентное излучение. В растворах свободно движущиеся люминофоры могут соединяться с молекулами растворителей, что приводит к подавлению флуоресценции вплоть до полного её исчезновения.

Итак, с повышением температуры флуоресцентная эмиссия уменьшается. Необходимо поэтому проводить измерение проб по возможности при постоянной температуре. Для достижения точных измерений температура проб остаётся на постоянном уровне благодаря термостабилизированному держателю кюветы. Недостаточная воспроизводимость измеренных параметров часто объясняется именно непостоянством температуры.

Флуоресценция, индуцированная лазерным излучением.

Лазерное излучение отличается высокой интенсивностью и точностью частоты заметно превосходящими эти характеристики у всех иных источников излучения. Разработка перенастраиваемых лазеров высокой интенсивности открыла этим источникам излучения путь в спектроскопию. Высокая спектральная эффективность лазерного излучения обеспечивает максимальную чувствительность, а благодаря острой направленности светового пучка достигается высокое пространственное разрешение вплоть до микрометрового диапазона.

При инициировании лазерным излучением флуоресценции луч лазера используется для возбуждения электронного перехода в молекуле. В качестве источника возбуждающего излучения подходят азотные лазеры с длиной волны 337 нм и перестраиваемые лазеры для интервала длин волн от 350 до 1100 нм. Благодаря чрезвычайно высокой интенсивности лазерного излучения можно возбуждать соединение до уровня «предельной флуоресценции», то есть до достижения равнозаселённости основного и возбуждённого состояний. При этом отдельные молекулы могут возбуждаться многократно.

ИК-спектроскопия

Диапазон инфракрасного излучения охватывает область от границы видимой части спектра вплоть до микроволновой. Это самый большой участок шкалы электромагнитного излучения с длинами волн от 1 мкм до 1 мм, который, в свою очередь разделяется на более узкие фрагменты.

Участок спектра примерно от 2, 5 до 50 мкм относят к средней ИК-области, где происходит поглощение электромагнитного излучения, связанное с колебательными и вращательными переходами в молекулах, поэтому в данном случае можно говорить о колебательной спектроскопии. С одной стороны к ней примыкает длинноволновая (дальняя) ИК-область с длиной волны более 50 мкм, где наблюдаются чисто вращательные спектры более лёгких молекул. С коротковолновой стороной соседствует ближняя ИК-область с интервалом длин волн от 800 до 2500 нм. Здесь наблюдается поглощение излучения, связанное с мультиплексными колебательными переходами.

Инфракрасное излучение было открыто В. Гершелем в 1800 г. В 1887 г. Альберт Майкельсон из Чикаго изобрёл интерферометр, названный впоследствии его именем. Интерферометр Майкельсона является сегодня базовым конструкционным узлом всех современных ИК Фурье-спектрометров. В 1907 г. Майкельсон получил Нобелевскую премию в области физики. Первые систематические регистрации ИК-спектров выполнялись У. Кобленцем в 1905 г., но только к середине 40-х годов метод был поставлен на коммерческую основу.

Своё начало Фурье-спектроскопия ведёт от 1957 г., когда под руководством Пьера Жакино, пионера в области использования преобразования Фурье, состоялся международный коллоквиум на тему «Пути развития интерференционной спектроскопии». Тогда ещё никто ясно не представлял, как именно действует новый метод и какое значение будет иметь его дальнейшее развитие. Некоторые даже говорили, что такая техника никогда не будет работать и что достаточно рискованно осуществлять регистрацию спектров столь сложным и непрямым способом. Между тем уже в 1968 г. был создан первый коммерческий ИК Фурье-спектрометр.