Примеры зависимости между поглощением А, пропусканием Т и оптической плотностью Е

Закон Ламберта-Бера справедлив для всех видов светопоглощения, то есть как для электронного, так и для колебательного и вращательного способов возбуждения.

На практике в большинстве случаев можно получить хорошую линейную зависимость между оптической плотностью и концентрацией до величины оптической плотности порядка 1,000: выше этого значения отмечается всё возрастающее отклонение от линейного закона. При необходимости результатов очень высокой точности анализы лучше всего проводить с оптическими плотностями < 0,5. Применение закона Ламберта-Бера осуществляется согласно следующим двум уравнениям:

и . (2)

Такое уравнение позволяет вычислить концентрацию с вещества на основе измеренной оптической плотности E, если известен молярный коэффициент поглощения этого вещества.

Однако на практике чаще всего поступают таким образом, что определяют оптическую плотность Е на растворах разных известных концентраций с и графически наносят на диаграмму величины Е относительно величин с. При действии закона Ламберта-Бера, если принять толщину слоя d за постоянную величину, получают прямую линию (так как e есть константа), и в идеальном варианте эта прямая проходит через нулевую точку, как видно на рис. 7.

Поскольку в абсорбционной спектроскопии определяют только ослабление света I относительно исходной интенсивности I₀, то всегда приходится проводить два отдельных измерения для обеих интенсивностей света. То есть определяют сначала I₀, измеряя интенсивность эмиссионного излучения, поступающего на детектор от источника без пробы в поглощающей ячейке. Соответствующий сигнал устанавливается на индикации прибора на 100 % пропускание или, соответственно, на оптическую плотность 0,000. Все современные устройства располагают для этой цели кнопкой «автоматического нуля» (Autozero). Затем соответствующее измерение проводится с пробой в поглощающей ячейке и определяется ослабленная поглощением интенсивность I. Принцип количественного анализа наглядно представлен в схеме на рис. 8.