И других ветеринарных препаратов
Развитие сельскохозяйственного производства предусматривает использование в ветеринарии некоторых антимикробных препаратов для профилактики и лечения скота и птицы. Однако в силу их недостаточной эффективности в ряде случаев производители несанкционированно применяют антибиотические вещества, используемые для лечения человека (производные пенициллина, тетрациклина и левомицетина).
Применение таких препаратов может привести к последующему развитию устойчивой к данным веществам микрофлоры у человека, употребляющего в пищу продукты, содержащие антибиотики. У человека развивается дисбактериоз, и при назначении ему лечения антибиотиками велика опасность неэффективного лечения.
Возможность поступления таких мясных продуктов при импортировании, а также развитие собственного интенсивного животноводства и птицеводства делают проблему контроля весьма актуальной.
Во многих странах, в том числе в странах Евросоюза и России, применение многих гормональных препаратов запрещено. Экономическая привлекательность применения химических стимуляторов требует жесткого контроля пищевой продукции на содержание остаточных гормонов. На основании действующих директив Европейского сообщества установлен и осуществляется систематический контроль за остаточным содержанием гормональных препаратов в мясе и мясных продуктах (мясо скота и птицы) по ряду веществ (табл. 10).
Табл. 10. Допустимое содержание гормональных препаратов
Наименование | Объект контроля | Допустимый уровень содержания, мг/кг | Метод контроля |
Тестостерон | Сыворотка крови | 0,5 | ГХ-МС, РИА, ВЭЖХ, ИФА |
Эстрадиол 17р | Сыворотка крови | 0,04 | ГХ-МС, РИА, ВЭЖХ, ИФА |
Метилтестостерон | Сыворотка крови, мясо | 2,0 0 | РИА, ИФА |
Этинил эстрадиол | Мясо | ГХ-МС, ВЭЖХ, ИФА | |
Тренболон | Мясо | ГХ-МС, РИА, ВЭЖХ, ИФА | |
Диэтилстилъбэстрол | Мясо, печень | ГХ-МС, РИА, ВЭЖХ, ИФА | |
Зеранол | Мясо | ГХ-МС, ВЭЖХ, ИФА | |
Кленбутерол | Сыворотка крови, мясо, печень | ГХ-МС, ВЭЖХ, ИФА | |
Дексаметазон | Мясо, печень, сыворотка крови | 0,5 2,0 | ГХ-МС, ВЭЖХ, ИФА |
19-Нортестостерон | Мясо | 1,0 | РИА, ИФА |
Гестагены | Жир | РИА, ВЭЖХ, ИФА | |
Тирео статики | Сыворотка крови | Не более 100 | ГХ-МС, тех, ВЭЖХ,-1 |
14.7.1. Контроль за остаточным содержанием
антибиотиков и других ветеринарных препаратов
В странах Европейского сообщества потребители избегают покупать мясо и мясные продукты, полученные с использованием «гормональных» технологий и содержащие остатки гормональных препаратов даже в безопасных для здоровья концентрациях. Борьба за европейский рынок вынуждает многие животноводческие предприятия отказываться от использования гормонов при выращивании скота.
К сожалению, в настоящее время в России предусмотрен только рекомендательный, а не обязательный порядок контроля гормональных препаратов. В частности, согласно СанПиН 2.3.2.1078-01 в продуктах животного происхождения контролируются остаточные количества стимуляторов роста животных, в том числе гормональных препаратов. Однако этот контроль основывается на информации, предоставляемой изготовителем (поставщиком) продукции, об использованных при ее изготовлении и хранении стимуляторах роста животных и лекарственных препаратов. Таким образом, если недобросовестный поставщик скроет информацию о фактическом выращивании мяса по «гормональным» технологиям, возникнет опасность проникновения на российский рынок продукции, содержащей гормональные препараты, так как в этом случае определение остаточных количеств гормональных препаратов необязательно.
Развитие сельскохозяйственного производства предусматривает использование в ветеринарии некоторых антимикробных препаратов для профилактики и лечения скота и птицы. Однако в силу их недостаточной эффективности в ряде случаев производители несанкционированно применяют антибиотические вещества, используемые для лечения человека (производные пенициллина, тетрациклина и левомицетина).
Применение таких препаратов может привести к последующему развитию устойчивой к данным веществам микрофлоры у человека, употребляющего в пищу продукты, содержащие антибиотики. У человека развивается дисбактериоз, и при назначении ему лечения антибиотиками велика опасность неэффективного лечения.
Возможность поступления таких мясных продуктов при импортировании, а также развитие собственного интенсивного животноводства и птицеводства делают проблему контроля весьма актуальной.
Хлорамфеникол (левомнцетнн) — синтетический антибиотик широкого спектра действия, применение которого запрещено к использованию в животноводстве. Относительная дешевизна препарата и высокая антибактериальная эффективность приводят к его несанкционированному использованию в достаточно широких масштабах, поэтому в мясе, печени, почках, молоке, твороге.
сметане, сыре, яйце и других продуктах довольно часто обнаруживаются остаточные количества левомицетина в концентрациях от 0,02-0,50 ед./г образца (1 ед. активности соответствует 1 мкг чистого вещества).
Тетрациклин является высокоэффективным антибиотиком широкою спектра действия и используется в медицине для лечения различных заболеваний, а также в ветеринарии из-за высокой прогиволгакробной эффективности (хлортетрацик-лин, окситетрациклин), что является небезопасным с точки зрения развития устойчивости микрофлоры к данному антибиотику у человека, потребляющего в пищу продукцию, загрязненную тетрациклиналга. ПДК остаточного содержания антибиотиков тетрациклиновой группы в мясных, молочных и других пищевых продуктах составляет 0,01 ед./г (у высокочистого тетрациклина 1 ед. соответствует 1 мкг).
В действующих на территории Российской Федерации требованиях к безопасности мясных продуктов остаточное содержание антибиотиков не допускается и нормируется на уровне долей единицы антибиотической активности (мкг) в одном грамме образца (табл. 11).
Группа продуктов | Тетрацик-линовая грунна | Грозив | Баци грации | Стрептомицин | Пенициллин | Низин |
Мясо, шпик свежие и ох- | ||||||
лажденные. Субпродукты | 0,01 | 0,05 | 0,02 | — | — | — |
и продукты их переработки | ||||||
Яйца и яйцепродукты | 0,01 | 0,5 | ||||
Молоко и кисломолочные | 0,01 | — | — | 0,5 | 0,01 | — |
изделия, в том числе сухие | ||||||
молочные изделия; сыры | ||||||
и творожные изделия; масло | ||||||
из коровьего молока; казеин | ||||||
Молоко сгущенное | 0,01 | — | — | 0,5 | 0,01 |
Таблица11. Содержание антибиотиков в 1 г образца
В настоящее время для аналитического определения остатков антибиотических препаратов используются микробиологические методы, основанные на регистрации роста тест-культур микроорганизмов в присутствии стандартных количеств антибиотиков и анализируемых экстрактов; высокоэффективная жидкостная хроматография; жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектированием (ЖХМС); тонкослойная хроматография (ТСХ), позволяющая регистрировать появление индивидуального пятна анализируемого вещества; флуоресцентный анализ, основанный на образовании флуоресцирующего комплекса антибиотика со специальным органическим хромофором. Метод газовой хроматографии не используют из-за сложности перевода антибиотиков в летучее состояние.
Следует отметить, что традиционное применение хроматографических и спектральных методов для анализа остаточных количеств ветеринарных препаратов позволяет решать задачу аналитического контроля качества, однако имеется ряд проблем. Во-первых, хроматографическая идентификация предусматривает анализ содержания конкретного вещества по времени удержания хроматографического пика. Известно значительное количество причин, по которым времена удержания могут варьироваться и даже совпадать для некоторых веществ. В случае очень низких концентраций вешесгв зга особенность часто является неразрешимой проблемой даже при использовании внутренних стандартов определяемых веществ. Ведущие производители хроматографического оборудования предлагают для надежной двойной идентификации вещества в установленном пике использовать, например, запись УФ-спектра или масс-спектра вещества с последующим сравнением со стандартной базой компьютерных данных. Такой подход к определению остаточного содержания опасных примесей в продовольственном сырье является достаточно надежным, но требует очень дорогостоящего аналитического оборудования и не может быть рекомендован для серийного анализа.
С учетом требований, предъявляемых к экспресс-методам мониторинга продовольствия (чувствительность, селективность метода, скорость получения результатов, стоимость выполнения анализов), наиболее предпочтительным является метод иммуноферментного анализа, в частности его разновидность - метод ELISA, удовлетворяюпщй всем требованиям, предьявляемым к методам рутинного контроля.
Основные принципы иммуноферментного анализа (ИФЛ) были предсказаны немецким ученым Полем Эрлихом на рубеже ХГХ-ХХ вв. Размышляя о механизме ф>чпсционирования защитных систем живото организма, он сформулировал идею «антител», вырабатываемых организмом при проникновении в его ткани чужеродных объектов, названных «антигенами». Конкретный тип чужого обьекта и способ защитной реакции на вторжение могут быть установлены организмом в результате сверхспецифичного взаимодействия антител и антигенов, точно подходящих друг к другу, как ключ к замку. Впоследствии фундаментальные идеи, выдвинутые Эрлихом, были положены в основу радиоиммунного метода анализа, за разработку которого профессор физики и ядерной медицины Розалин Ялоу в 1977 г. получила Нобелевскую премию. К настоящему времени радиоиммунный метод анализа, предусматривающий использование радиоактивных изотопов и применение достаточно сложного оборудования, практичес Рассмотрим кратко упрощенную схему выполнения ИФА. Для анализа химических соединений в пищевых и биологических объектах в основном используется вариант «конкурирующего» иммуноферментного анализа, поэтому далее речь идет только об этом варианте ИФА, который называют также методом ELISA. Готовые наборы для ИФА в комплектной поставке производителя обычно включают все необходимые для выполнения анализа материалы, буферные и стандартные растворы. Антитела к тому или иному химическому соединению (антигену), полученные из сыворотки крови живых организмов, адсорбированы на твердую поверхность планшета, обычно на 96 лунок.
При контакте активированной поверхности носителя с раствором, содержащим антигены (например, левомпцетин), часть антител специфично взаимодействует с молекулами контролируемого соединения, т. е. дезактивируется. В конкурирующем варианте ИФА контролируемый раствор смешивают непосредственно в лунке планшета с раствором так называемою конъюгата, представляющего собой молекулы антигена, химически связанные (меченые) с молекулами фермента. В течение некоторого периода инкубации планшета (от 30 мин до 2 ч) при определенной температуре антитела на поверхности носителя дезактивируются в результате итгуносорбции как меченых, так и немеченых антигенов.
После процедуры отмывки планшета, следующей за инкубацией, на поверхности носителя распределяются только сорбированные антигены, причем соотношение меченых и немеченых антигенов зависит от исходной концентрации антигенов в контролируемом растворе.
На стадии проявки в лунки планшета добавляют раствор так называемого субстрата. Фрагмент молекулы фермента, адсорбированной из раствора конъюгата вместе с меченым антигеном на поверхности лунки, катализирует химическую реакцию превращения субстрата в окрашенное соединение. По окончании определенного времени развития данной цветной реакции в лунки планшета добавляют фиксирующий реагент и измеряют оптическую плотность содержимого каждой лунки. Поскольку одновременно с анализируемым раствором в некоторые лунки одного и того же планшета дозируются стандартные растворы, после измерения оптической плотности в лунках легко построить калибровочную кривую, по которой вручную или автоматически можно вычислить концентрацию контролируемого соединения в анализируемой пробе.
Применяемые аналитические метода определения содержания антибиотиков различаются по минимально определяемому уровню вещества в зависимости от свойств самого антибиотика (табл. 12).
Таблица 12. Минимальное детектируемое количество антибиотиков
Метод | Определяемое вещество | Предел обнаружения | пдк, не более | Время анализа, ч |
TCX | Тетрациклин | 0,1 мкг/г | 0,01 ед./г | |
Флуориметрия | -» - | 1 мкг/г | 0,01 ед./г | |
ELISA | -» - | 6 пг/г | 0,01 ед./г | |
ELISA | Левомицетин | 1 нг/г (мкг/кг) | 0,01 мг/кг |
Для аналитического определения сложных химических токсикантов пищевых продуктов используют методы, различающиеся по сложности и чувствительности. Наиболее удачное сочетание чувствительности, скорости и стоимости отличает иммуноферментный анализ, позволяющий достаточно быстро проводить скрининг пищевой продукдии по максимальному числу показателей. Стандартный хроматографический анализ методом тонкослойной, газожидкостной и жидкостной хроматографии уступает методу ELISA по простоте и минимально определяемому уровню анализируемого вещества. Метод ИФА позволяет определять содержание вредных примесей на уровне до 0,1 нг/мл.
Наиболее оправдано применение метода ИФА для определения сложных органических токсикантов, в частности гормонов и антибиотиков.
Дата добавления: 2015-12-08; просмотров: 2101;