АЛКАЛОИДЫ, ПРОИЗВОДНЫЕ ИЗОХИНОЛИНА 6 страница

1. Отмечают цвет, запах.

2. Устанавливают величину рН по универсальному индикатору (кислота, щелочь).

3. Проверяют смешиваемость с водой.

4. Измеряют показатель преломления жидкости на рефрактометре.

5. Проводят предварительные пробы.

ТСХ-скрининг веществ кислотного и основного характера

Хроматографический скрининг преследует цель отобрать, отсеять часть веществ, чтобы сузить круг исследования и сократить время анализа.

ТСХ-скрининг в анализе веществ кислотного и слабоосновного характера, экстрагируемых хлороформом из к ислого раствора (рН 2-2,5)

Из лекарственных веществ, имеющих определенное токсикологическое значение, в извлечениях из кислого раствора могут быть: производные барбитуровой кислоты, пиразолона, 1,4-бензодиазепина, кофеин. Пластинку помещают в общую систему растворителей: хлороформ – диоксан – ацетон – 25%-ный раствор аммиака (45:47,5:5:2,5). Когда растворитель поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают, высушивают и обрабатывают реагентами в следующей последовательности:

•5%-ный раствор ртути(II) сульфата в конц. серной кислоте и 0,1 %-ный раствор дифенилкарбазона (ДФК) в хлороформе. При этом на пластинке обнаруживаются производные барбитуровой кислоты в виде фиолетовых пятен.

•10%-ный раствор железа (III) хлорида. Обнаруживаются производные пиразолона.

• модифицированный реактив Драгендорфа. Обнаруживаются соединения, содержащие в структуре вторичный и третичный атом азота (производные 1,4-бензодиазепина, пиразолона, кофеин).

• 10%-ный раствор серной кислоты. Для повышения чувствительности реактива Драгендорфа.

Если ни в одной из зон не проявилось ни одного пятна, то делают заключение о ненахождении веществ в извлечении из кислого раствора.

ТСХ-скрининг в анализе веществ основного характера, экстрагируемых хлороформом из щелочного раствора (рН 8-10)

Из лекарственных веществ, имеющих определенное токсикологическое значение, в извлечениях из щелочного раствора могут быть алкалоиды и синтетические вещества основного характера. Пластинку помещают в систему растворителей: хлороформ – диоксан – ацетон – 25%-ный раствор аммиака (45:47,5:5:2,5). Когда растворитель поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают, высушивают и обрабатывают реагентами в следующей последовательности:

• 10%-ный раствор железа (III) хлорида. При этом обнаруживаются производные пиразолона и фенотиазина.

• 16%-ный раствор кислоты серной в этаноле. Обнаруживаются производные фенотиазина.

• 10%-ная кислота серная и УФ-свет. Обнаруживается хинин.

• модифицированный реактив Драгендорфа. Обнаруживаются соединения, содержащие в структуре третичный азот.

• 10%-ная кислота серная. Для повышения чувствительности и усиления окраски пятен с реактивом Драгендорфа.

Если ни в одной из зон не проявилось ни одного пятна, то делают заключение о ненахождении веществ в извлечении из щелочного раствора.

5.8. ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОТДЕЛЬНЫХ ГРУПП НАРКОТИЧЕСКИХ И ОДУРМАНИВАЮЩИХ ВЕЩЕСТВ (НАПРАВЛЕННЫЙ АНАЛИЗ)

5.8.1. Производные барбитуровой кислоты

Изолирование. 10 мл мочи в делительной воронке подкисляют 2 М раствором кислоты соляной до рН 2, трижды экстрагируют хлороформом по 10 мл. Хлороформные фазы отделяют и объединяют, фильтруя через безводный натрия сульфат. Органический растворитель удаляют в токе теплого воздуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Остаток растворяют в небольшом объеме (0,1-0,2 мл) хлороформа и количественно с помощью капилляра переносят на стартовую линию хроматографической пластинки “Cилуфол”. На расстоянии 2 см от анализируемой пробы в одну точку (диаметр не более 0,5 мл) последовательно вносят по 0,02 мл спиртовых растворов (1 мг/мл) барбитала, фенобарбитала и этаминала-натрия.

Пятна подсушивают, хроматографирование проводят в системе хлороформ – н - бутанол – 25%-ный раствор аммиака (70 : 40 : 5). Камера предварительно насыщается системой растворителей в течение 20 минут. Длина пробега растворителей 10 см. После подсушивания при комнатной температуре или в токе теплого воздуха до полного удаления растворителей, пластинки опрыскивают соответствующими реагентами.

Реагенты, используемые для проявления пластинки:

1. Раствор сульфата ртути(II), НgSO4, 5%-ный раствор.

2. Раствор дифенилкарбазона (ДФК), 0,02%-ный раствор (следует избегать избытка дифенилкарбазона).

Барбитураты обнаруживают в виде сине-фиолетовых или красных пятен на исчезающем сиреневом фоне.

Предел обнаружения: 1 мкг анализируемого соединения.

Значения Rf:

Барбитал 0,70-0,75.

Фенобарбитал 0,49-0,55.

Этаминал-натрия 0,94-0,96.

Барбамил 0,85-0,92.

Бутобарбитал 0,78-0,85.

Величины Rf по отношению к метчикам дают возможность сделать предположение о присутствии барбитуратов в исследуемой пробе.

При положительном результате хроматографического исследования проводится дополнительное обнаружение с помощью цветных тестов или микрокристаллоскопических реакций. Данные реакции проводятся с остатками после удаления органического экстрагента и проведения изолирования из новой аликвоты мочи (10 мл) по методике, описанной выше.

Цветной тест: на фильтровальную бумагу в одну точку наносят 2-3 капли раствора барбитурата в органическом растворителе или кислого извлечения из мочи, подсушивают, затем наслаивают 1-3 капли 1 %-ного спиртового раствора нитрата кобальта Со(NO3)2, подсушивают и вносят бумагу в пары 25 %-ного раствора аммиака – пятно приобретает красно-фиолетовое окрашивание.

Микрокристаллоскопическая реакция: к сухому остатку на предметном стекле добавляют одну каплю 10 %-ного раствора аммиака, а после растворения остатка одну каплю 10 %-ного раствора серной кислоты. Через 10-15 минут наблюдают характерные сростки кристаллов.

5.8.2.Алкалоиды группы опия

Изолирование. 20 мл мочи подкисляют 6 М НСl до рН 2 и гидролизуют на водяной бане в течение 20 минут. Гидролизат охлаждают, добавляют 10 %-ный раствор аммиака до рН 9,0-9,5. Экстрагируют 2 раза в течение 5 минут двойным количеством смеси хлороформ – н-бутанол (9:1). Отделяют органический слой, объединяют оба извлечения для дальнейшего исследования.

Фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия и выпаривают в фарфоровой чашке.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Система для хроматографирования: этилацетат – этанол (метанол) – аммиак (17: 2: 1).

В качестве метчиков наносят раствор морфина, кодеина, наркотина, папаверина. Длина пробега – 10 см.

Реагенты, используемые для проявления пластинки.

1. Реактив Марки.

2. Реактив Фреде.

Реактивы наносят капельно от старта до финиша сначала в зону метчиков, а затем в исследуемые зоны.

Таблица 12. Окраска алкалоидов группы опия

Микрокристаллоскопические реакции.

Сухой остаток на предметном стекле растворяют в капле 0,1 М раствора кислоты соляной и добавляют каплю реагента.

Морфин:

1. Реакция с калия иодидом, KI, 15%-ный раствор.

Наблюдается образование белого осадка, состоящего из бесцветных игл, собранных в пучки. Предел обнаружения: 2,5 мкг морфина.

2. Реакция с ртути хлоридом, HgCl2, 5%-ный раствор. Наблюдаются характерные пучки из игл.

3. Реакция с солью Рейнеке.

Образуется сиреневый осадок, содержащий кристаллы в виде сростков из пучков тонких игл. Предел обнаружения: 2 мкг морфина.

Кодеин:

1. Реакция с раствором кислоты пикриновой.

При соединении капель исследуемого раствора и насыщенного раствора пикриновой кислоты образуется желтый аморфный осадок, который при стоянии становится кристаллическим. Наблюдаются кристаллы двух видов: желтые сфероиды и пучки из бледно-желтых пластинок. Предел обнаружения: 1 мкг кодеина.

2. Реакция с хлоридом ртути, HgCl2, 5%-ный раствор.

При потирании предметного стекла в области капель стеклянной палочкой выделяется кристаллический осадок из иглообразных и пластинчатых кристаллов. Предел обнаружения: 13 мкг кодеина.

5.8.3. Производные 1,4-бензодиазепина

I. Изолирование. 20 мл мочи подщелачивают NaOH до рН 10. Экстрагируют дважды хлороформом двойным объемом. Органический растворитель упаривают в токе теплого воздуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Система для хроматографирования - хлороформ – диоксан – ацетон – 25%-ный раствор аммиака (45:47,5:5:2,5).

Реагенты, используемые для проявления пластинки.

Проявляют пластинку реактивом Драгендорфа. Производные 1,4-бензодиазепина обнаруживаются в виде оранжево-коричневых пятен.

Вследствие особенностей распределения и метаболизма производных 1,4-бензодиазепина, их определение целесообразно проводить по продуктам их гидролиза – аминобензофенонам. Это позволяет определять общее количество препаратов (как сумму нативного соединения и его метаболитов) в биологической жидкости.

II. Изолирование. К 10 мл анализируемой мочи или 2 мл крови добавляют соответственно 10 мл и 2 мл концентрированной НСl и нагревают в колбе с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 часа (кислотный гидролиз).

По окончании реакции гидролиза т нейтрализуют насыщенным раствором NaOH, доводят рН до 8-10 и экстрагируют дважды хлороформом (10 мл х 2 для мочи и 5 мл х 2 для крови). Слой органического растворителя отделяют на делительной воронке, а затем в объединенных экстрактах упаривают органический растворитель под струей теплого воздуха до объема в несколько капель для ТСХ-анализа и досуха для количественного определения.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Остаток экстракта переносят на стартовую линию пластинки “Силуфол”. На ту же стартовую линию наносят пятно метчиков, состоящее из смеси бензофенонов, производных 1,4-бензодиазепина (10-15 мкг каждого). Пробег фронта растворителя 10 см. Подвижная фаза – бензол. По окончании хроматографирования бензол удаляют с пластинки током теплого воздуха.

При концентрации бензофенонов более 5 мкг/мл, их можно обнаружить по собственной желтой окраске или флюоресценции в УФ-свете, при меньших концентрациях – по флюоресценции в УФ-свете и реакции окрашивания Браттона-Маршалла.

Реагенты, используемые для проявления пластинки.

1. Натрия нитрит, NaNO2, свежеприготовленный 0,1 %-ный раствор.

2. Кислота соляная, НСl, 2 М раствор.

3. Мочевина, (NH2)2CO, насыщенный раствор (для удаления избытка натрия нитрита). Пластинку опрыскивают через 2 минуты.

4. N-2-нафтилэтилендиамин дихлорид (или щелочной раствор β-нафтола) В месте локализации аминобензофенонов появляется оранжево-красное окрашивание.

5.8.4. Производные фенотиазина

едварительная проба.

К 2 мл мочи прибавляют 1 мл реактива FРN. При наличии в исследуемой пробе производных фенотиазина мгновенно развивается окрашивание от розового до синего в зависимости от структуры и количества соединения в исследуемой пробе. Проба с реактивом FРN неспецифична и имеет только отрицательное значение. При отрицательном результате пробы дальнейшее исследование мочи на наличие производных фенотиазина не проводится.

Изолирование. 5-10 мл мочи или 2 мл крови подщелачивают 50 %-ным раствором едкого натра до рН 13 и смесь кипятят в течение 10 минут на водяной бане. Полученный гидролизат охлаждают до комнатной температуры и дважды (по 20 мл) экстрагируют н-гептаном, содержащим 3 %-ный изоамиловый спирт. Гептановые извлечения из мочи объединяют, промывают водой, насыщенной гептаном, и делят на две равные части. В одной части проводится обнаружение производных фенотиазина методом тонкослойной хроматографии, а в другой – количественное определение. Экстракт из крови полностью расходуется на количественное определение, так как содержит меньшее количество соэкстрагируемых веществ.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Из аликвоты органического экстракта удаляют в токе теплого воздуха органический растворитель. Сухой остаток растворяют в 0,2-0,5 мл хлороформа и полученный раствор поровну наносят на две пластинки “Cилуфол”. В качестве метчиков наносят аминазин (обязательно) и те производные фенотиазина, которые были обнаружены в процессе предварительного исследования (ТСХ -скрининг). Хроматографирование проводят в системе 1 и 2. Длина пробега – 10 см.

Система –1: бензол – диоксан – 25 %-ный раствор аммиака (60 : 35 : 5).

Система –2: этилацетат –- ацетон – 25 %-ный раствор аммиака в этаноле (1:1) (50 : 45 : 4).

Реагенты, используемые для проявления пластинки:

Одну пластинку опрыскивают раствором концентрированной серной кислоты в этаноле (1:9) и при положительном результате на второй пластинке обнаружение проводят с помощью реактива Марки.

Таблица 13.Величины и окраски пятен некоторых производных фенотиазина

5.8.5. Каннабиноиды

Основными компонентами, определяемыми в биожидкостях, являются: Δ9-тетрагидроканнабинол, Δ8-тетрагидроканнабинол, каннабинол, каннабидиол.

Отбор пробы осуществляется протиранием рук подозреваемого в курении гашиша ватным или марлевым тампоном, смоченным этиловым спиртом. Спирт из образцов испаряют при комнатной температуре, а тампоны упаковывают в полиэтиленовые пакеты и направляю т на исследование в лабораторию.

Изолирование. Каннабиноиды экстрагируют из материала тампона два раза диэтиловым эфиром порциями по 10 мл в течение 1 мин. Экстракт упаривают до конечного объема 0,1-0,3 мл и используют как для предварительного определения каннабиноидов характерными цветными реакциями, так и для качественного определения их методом тонкослойной хроматографии.

Для предварительного исследования отбирают 5 мкл от аликвоты упаренного до малого объема экстракта, наносят пробу на фильтровальную бумагу, высушивают и затем опрыскивают 0,5 %-ным раствором прочного синего Б в 10 %-ном водном растворе натрия карбоната. Отсутствие оранжевого окрашивания пятна служит основанием для заключения, что в пробе не обнаружены каннабиноиды. При появлении оранжевого окрашивания вторую аликвоту экстракта наносят на пластинку “Силуфол”.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Хроматографирование осуществляется в системе петролейный эфир:диэтиловый эфир (4:1) двукратно. Выявление пятен осуществляется опрыскиванием хроматограммы 0,5 %-ным раствором прочного синего Б в 10 %-ном растворе натрия карбоната. При этом в основном выявляется каннабинол (Rf = 0,76) и тетрагидроканнабинол (Rf = 0,84).

Следует иметь в виду, что обнаружение тетрагидроканнабинола только в смывах с кожи рук не является основанием для заключения, что данное лицо курило гашиш, поскольку возможно случайное соприкосновение с гашишем, о котором освидетельствуемый и не подозревал.

Выявление каннабиноидов в слюне курильщика гашиша.

Отбор проб. У лиц, подозреваемых в курении гашиша, в склянку с притертой пробкой вместимостью 100 мл отбирают примерно 10 мл слюны, после чего промывают полость рта 50 мл 70 %-ного этилового спирта, который насыщен натрием хлористым (последний вводят для предупреждения глотания спирта). Слюну и смыв объединяют, склянку закрывают, опечатывают и направляют на исследование в лабораторию.

Изолирование. Полученную пробу смешивают с 50 мл насыщенного водного раствора натрия хлорида. Экстрагируют каннабиноиды 10 мл этилацетата. Время экстракции – 5 мин. Число экстракций – 3. Экстракт высушивают путем добавления 1-1,5 г безводного натрия сульфата. Затем фильтруют экстракт через бумажный фильтр и упаривают до нескольких капель.

Хроматографическая очистка и обнаружение Весь полученный раствор наносят на пластинку “Силуфол”. Хроматографирование осуществляется в условиях, описанных выше. При этом следует учитывать, что отрицательный результат еще не является основанием для вывода, что данное лицо не употребляло гашиш, так как следы гашиша после его курения сохраняются в полости рта до 1 часа, а на коже – до 24 часов (если поверхность кожи не подвергалась протиранию растворителями типа одеколона, этилового спирта).

Выявление каннабиноидов в плазме крови.

5 мл плазмы крови экстрагируют четырехкратно по 5 мл смеси петролейного эфира, содержащего 1,5 % пентанола по объему. Объединенный органический экстракт упаривают до объема нескольких капель и переносят на пластинку “Силуфол”. Хроматографируют в тех же условиях, что и экстракт из слюны.

5.8.6. Кокаин

Изолирование. 5 мл крови экстрагируют 15 мл н-бутилхлорида. Органическую фазу отделяют, добавляют к ней 10 мл 0,1 М НCl, встряхивают в течение 5 мин. Отделяют водную фазу (органическую отбрасывают) и приливают к ней 10 %-ный раствор аммиака до рН 10. В делительную воронку помещают подщелоченную водную фазу и дважды экстрагируют по 5 мл хлороформом. Объединенный хлороформный экстракт упаривают до объёма 0.5 мл в токе теплого воздуха.

50 мл мочи подкисляют HCl до рН 2 и экстрагируют 50 мл эфира для удаления кислых и нейтральных соединений. Кокаин и его метаболиты остаются в основном в водной фазе. Водную фазу подщелачивают 25 %-ным раствором аммиака до рН 10. Экстракцию производят равным объемом смеси хлороформ: изопропанол (3:1) дважды. Объединенный экстракт упаривают досуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл хлороформа и половину объема наносят на стартовую линию пластинки ВЭТСХ. В качестве метчиков используют смесь кокаина и бензоилэкгонина. Хроматографируют в системе хлороформ – метанол (50:50). Длина пробега – 10 см.

Реагенты, используемые для проявления пластинки:

Сначала пластинку опрыскивают реактивом Драгендорфа, затем иодплатинатом . Идентификацию проводят по совпадению величин Rf исследуемых соединений и метчиков. При положительной пробе оставшуюся аликвоту раствора хроматографируют в системе этилацетат – метанол (80:20)и проводят микрокристаллоскопические реакции.

Микрокристаллоскопические реакции.

1. Реакция с раствором платинохлористоводородной кислоты.

Соединяют на предметном стекле капли исследуемого раствора и 10 %-ный раствора платинохлористоводородно кислоты. Из концентрированных растворов соли кокаина сразу же выпадают перистые дендриты, а из разбавленных – кристаллы в виде штыков. Предел обнаружения – 3 мкг кокаина.

2. Реакция с раствором калия перманганата.

К крупинке хлористоводородной соли кокаина прибавляют на предметном стекле каплю 1 %-ного раствора калия перманганата. При потирании стеклянной палочкой в области исследуемой капли и добавлении реактива выделяются красно-фиолетовые прямоугольные и квадратные пластинки. Предел обнаружения - 4 мкг.

5.8.7. Амитриптилин

Изолирование. 5 мл крови или 50 мл мочи подщелачивают 50 %-ным раствором едкого натра до р Н9-10 и производят экстракцию диэтиловым эфиром дважды по 20 мл. Эфирные извлечения объединяют, объем доводят в мерной колбе емкостью 50 мл до метки, делят на аликвоты соответственно 10,0,10 и 20 мл, помещают в стеклянные стаканчики, упаривают досуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение ам итриптилина. Остатки в стеклянных стаканчиках количественно с помощью хлороформа переносят на стартовую линию пластинки “Cилуфол”, нанося полосами (длина 1-2 см).

В качестве метчика на пластинку наносят 5-10 капель стандартных хлороформных растворов амитриптилина - основания и нортриптилина-основания (0,5 мг/мл) и пластинку хроматографируют в системе бензол-ацетон (80:20) до продвижения фронта растворителей на 10 см. После высушивания пластинку хроматографируют в системе бензол-диоксан-аммиак (60:35:5) до продвижения фронта растворителей на 10 см. Хроматограмму высушивают на воздухе и в зонах метчиков и первой полосы (аликвота соотв.10 мл), детектируют (капельно) концентрированной кислотой серной. При наличии амитриптилина наблюдается пятно ярко-оранжевого цвета на уровне метчика с Rf =0,74-0,78, в случае нортриптилина проявляется пятно оранжевого или желтого (в зависимости от концентрации) цвета с Rf=0,38-0,46. Открываемый минимум – 0,2 мкг амитриптилина -основания и нортриптилина -основания в пробе.

При отсутствии на хроматограмме пятна с Rf=0,74-0,78 дают заключение о необнаружении амитриптилина.

При наличии на хроматограмме пятен с Rf=0,74-0,78 и Rf=0,38-0,46, параллельных метчикам амитриптилина и норамитриптилина, производят дальнейшее исследование извлечения.

Непроявленные участки силикагеля, параллельно проявленным пятнам амитриптилина и нортриптилина, переносятс помощью скальпеля в 3 пробирки с притертыми пробками и добавляют по 10 мл хлороформа. Смесь встряхивают, отстаивают и жидкость декантацией сливают через стеклянный фильтр в стеклянный стаканчик для исследования. В пробирку вновь дважды наливают по 10 мл хлороформа и смесь также встряхивают и отфильтровывают. Полученные хлороформные растворы далее исследуют с помощью цветных и микрокристаллоскопических реакций.

Реакции окрашивания. Остаток, полученный после удаления хлороформа, соответствующий 20 мл эфирного извлечения, растворяют в 2 мл хлороформа и по несколько капель помещают в 3 фарфоровые чашки и на одно предметное стекло. К сухим остаткам в фарфоровых чашках добавляют по 2 капли концентрированной серной кислоты, реактива Фреде, реактива Марки (в одну чашку – один реагент). При наличии амитриптилина и нортриптилина наблюдается желто-оранжевое окрашивание. Чувствительность реакций- от 0.1 до 1,0 мкг в пробе.

Микрокристаллоскопическая реакция. К сухому остатку на предметном стекле добавляют 1 каплю 0,1 %-ного раствора и 1 каплю 0,1 %-ного раствора соли Рейнеке. При наличии амитритилина наблюдается образование сложных кристаллов в виде сросшихся у основания игл. Чувствительность реакции -0,02 мкг в пробе. При наличии в пятне нортриптилина наблюдается образование кристаллов в виде веточек. Чувствительность реакции – 0,01 мкг в пробе.

5.8.8. Димедрол (дифенгидрамин)

Изолирование. К 10 мл мочи или 2 мл крови добавляют водный раствор аммиака до рН 10 и экстрагируют димедрол двукратным объемом хлороформа. Хлороформную фазу отделяют и упаривают хлороформ (экстракт не должен вскипать!) до объема нескольких капель (для ТСХ) и досуха при количественном определении.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Упаренный экстракт наносят на стартовую линию пластинки “Силуфол”. Рядом помещают пятно метчика и хроматографируют в системе хлороформ - ацетон -аммиак (12:24:1). Длина пробега – 10 см.

Обнаружение проводят концентрированной кислотой серной. Отмечают появление окрашенных пятен желтого цвета. Rf составляет 0,67-0,68, реактивом Эрдмана – пятна вишневого цвета.

5.8.9. Промедол

Изолирование. 50 мл мочи доводят до рН 11-13 0,1 М раствором NaOH и трижды экстрагируют хлороформом по 45, 40 и 25 мл. Объединенные хлороформные извлечения фильтруют через фильтр, смоченный хлороформом и органический растворитель удаляют в испарительной чашке досуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Сухой остаток растворяют в хлороформе. Полученный раствор делят на две равные части. На стартовую линию хроматографической пластинки с закрепленным слоем силикагеля наносят в две полосы экстракты 1 и 2 и рядом раствор метчика (стандартный раствор промедола основания в хлороформе). В качестве подвижной фазы используют хлороформ, который помещают в камеру объемом 500 см3, на дно которой помещается бюкс или тигель, содержащий 5 мл 25 %-ного раствора аммиака. Насыщают в течение 30 минут. Длина пробега – 10 см.

Реагенты, используемые для проявления пластинки:

Одну из зон опрыскивают реактивом Драгендорфа. При наличии промедола наблюдается оранжевое пятно.

Во второй зоне и зоне метчика промедол обнаруживается капельно с помощью реактива Марки (пурпурно-красное окрашивание). Предел обнаружения – 0,25 мкг.

М икрокристаллическая реакция с ализариновым красным.

Оранжевое пятно, полученное после обработки реактивом Драгендорфа, снимают с помощью скальпеля в пробирку, содержащую 5 мл смеси этанола -25 %-ного раствора аммиака (9:1). После встряхивания смеси в течение 1 минуты полученный раствор отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр. Растворитель удаляют, а остаток переносят с помощью хлороформа на предметное стекло. К сухому остатку добавляют 1 каплю 0,1 М раствора HCl и вносят 1-2 кристалла красителя ализаринового красного. При наличии промедола (через 5-10 минут) образуются игольчатые кристаллы желтого цвета.

5.8.10. Эфедрин, эфедрон

Предварительное исследование. К 1 мл мочи добавляют кристаллический натрия сульфат до насыщения и затем по 0,5 мл сероуглерода в бензоле и аммиакат меди. Полученную смесь встряхивают в течение 30 мин. В этих условиях эфедрин и эфедрон образуют комплексное соединение с медью, содержащееся в верхнем органическом слое. Органическую фазу отбирают, а водную промывают 1 мл бензола. Объединенные органические экстракты упаривают в токе холодного воздуха до объема 50-100 мкл. Упаренный экстракт количественно наносят полосой 3 см на линию старта пластинки “Cилуфол-УФ-354”. В качестве метчиков используют комплексы эфедрона и эфедрина с медью в концентрации 1 мг/мл, приготовленные из чистых субстанций.

Хроматографирование проводят в системе хлороформ – ацетон (48:2) – для эфедрина и в системе циклогексан - ацетон - метанол (40:10:2) –для эфедрона.

Rf (эфедрина) = 0,26; Rf (эфедрона) = 0,27. Длина пробега растворителя 10 и 15 см соответственно.

Пластинку просушивают и просматривают в УФ-свете. Желто-коричневое окрашивание и совпадение величин Rf с метчиками служит положительной реакцией и основанием для проведения дополнительного исследования. При отрицательном результате на эфедрин и эфедрон дальнейшее исследование не проводится.

Изолирование. 10 мл биологической пробы (мочи) доводят до рН 10 раствором карбоната натрия и трижды экстрагируют хлороформом по 10 мл. Объединенные хлороформные извлечения фильтруют через фильтр, смоченный хлороформом, и органический растворитель удаляют в выпарительной чашке досуха.

Хроматографическая очистка и обнаружение. Остаток растворяют в 0,5 мл хлороформа и наносят на пластинку “Силуфол”, в качестве метчиков используют эфедрин, эфедрон и фенамин в виде оснований. Хроматографирование проводят в системе бензол – этанол – диэтиламин (9 :1: 1). Длина пробега 10 см. После хроматографирования пластинку сушат в потоке теплого воздуха и опрыскивают свежеприготовленным раствором нингидрина в ацетоне. Затем пластинку нагревают в сушильном шкафу при 80-1000С или в токе теплого воздуха. При наличии в пробе исследуемых веществ образуются темно-фиолетовые пятна с соответствующими значениями метчиков (эфедрин, эфедрон).