Закон Бугера-Ламберта-Бера

Объектами исследования при проведении бактериологического контроля лечебно-профилактических учреждений являются:

воздушная среда;

* различные объекты внешней среды;

* хирургический инструментарий;

* шовный материал;

* руки хирургов и кожа операционного поля. Бактериологическое исследование микробной обсемененности предметов внешней среды предусматривает выявление стафилококка, синегнойной палочки, бактерий группы кишечных палочек и патогенных грибов.

Отбор проб

Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки, или марлевыми салфетками размером 5x5 см. Для увлажнения тампонов в пробирки с тампонами наливают по 2,0 мл стерильного физиологического раствора.

Для выделения стафилококков посев делают непосредственно на чашку Петри с желточно-солевым агаром, для выделения бактерий группы кишечных палочек — посев на среду Эндо (дальнейшие исследования по соответствующим схемам).

Для обнаружения патогенных грибов производят посев на среду Сабуро, наблюдают 5 суток при 21°С. Кроме того, производят посевы в среды накопления — для стафилококков в 6,5% хлористого натрия, для бактерий группы кишечных палочек — в 10—20% желчный бульон. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо и жел-точно-солевой агар. При обнаружении подозрительных колоний производят их микроскопию и далее исследуют по соответствующим схемам.

Для выявления синегнойной палочки специальные посевы можно не производить, так как она дает ползущий рост с характерным запахом земляничного мыла на среде Эндо.

Правила отбора проб для контроля стерильности в лечебно-профилактических учреждениях

Забор проб производят в стерильные емкости с соблюдением строжайших правил асептики.

Посев в обязательном порядке производят в три питательные среды:

* сахарный бульон Хоттингера (0,5 и 1% глюкоза);

* тиогликолевую среду;

* бульон Сабуро.

При посеве изделия или его части непосредственно в питательную среду следует соблюдать следующее условие — среды должно быть достаточно для полного погружения изделия.

Перед посевом емкость с отобранными образцами протирают стерильной марлевой салфеткой, обильно смоченной 6% раствором перекиси водорода, и оставляют на 30 минут. Затем вносят в бокс. За 1,5—2 часа до начала работы в боксе и предбокснике на 1—1,5 часа включают бактерицидные лампы.

Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирают стерильным полотенцем, надевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные халаты, 4-слойные маски, шапочки, стерильные перчатки.

Посевы в бульон Хоттингера и тиогликолевую среду выдерживают в термостате при температуре 37°С, среду Сабуро — при температуре 20—22°С.

Посевы инкубируют в термостате в течение 14 суток.

Материал стерилен при отсутствии роста во всех посевах. Материал не стерилен при росте микрофлоры.

Бактериологический контроль эффективности обработки кожи операционного поля и рук хирургов

Смывы с кожи операционного поля и рук хирургов производят стерильными марлевыми салфетками размером 5x5 см2, смоченными в физиологическом растворе. Марлевой салфеткой тщательно протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После забора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или колбы с раствором нейтрализатора (воды или физиологического раствора) и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 минут, производят отмыв марлевой салфетки. От-мывную жидкость засевают глубинным способом по 0,5 мл на 2 чашки Петри с мясопептонным агаром, а марлевую салфетку— 0,5% сахарный бульон. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 часов.

Кожа и руки стерильны при отсутствии роста микроорганизмов как на твердой, так и на жидкой питательной среде.

Закон Бугера-Ламберта-Бера

Залежність інтенсивності монохроматичного світла, що пройшло через шар забарвленого розчину (І), від інтенсивності падаючого світла (І_о), концентрації забарвленої речовини (С) і товщини шару розчину (l) визначається об’єднаним законом Бугера-Ламберта-Бера, який є основним законом світлопоглинання і лежить в основі більшості фотометричних методів аналізу:

І = І_о×10^–КСl (2)

де К — коефіцієнт світлопоглинання, який залежить від природи речовини, температури, природи розчинника і довжини хвилі падаючого світла.

Якщо концентрація виражена в молях на літр, а l в сантиметрах, то К називають молярним коефіцієнтом світлопоглинання і позначають ε_λ. Коефіцієнт ε_λ є сталим для даної речовини і не залежить від концентрації розчину, товщини поглинаючого шару, інтенсивності падаючого світла, але залежить від довжини хвилі падаючого світла.

Рівняння (2) в цьому випадку буде мати вигляд:

І = І_о×10 (3)

Після логарифмування виразу (3) одержимо:

lg = ε_λ×C×l (4)

Величина lg називається оптичною густиною (світлопоглинанням, абсорбцією) і позначається літерою А. Рівняння (4) в цьому випадку приймає вигляд:

А = ε_λ×C×l (5)

і читається: оптична густина прямо пропорційна молярному коефіцієнту світлопоглинання, концентрації поглинаючої речовини і товщині шару розчину.

Відношення І/І_о називають пропусканням і позначають літерою Т (приймає значення від 0 до 1, або від 0 до 100%):

Т = = 10 (6)

Якщо величина Т віднесена до товщини шару 1 см, то вона називається коефіцієнтом пропускання. Залежність оптичної густини від концентрації графічно зображається прямлю лінією, яка проходить через початок координат. Закон Бугера-Ламберта-бера зберігається при таких умовах, коли: пучок падаючого світла є монохроматичним і паралельним; показник заломлення середовища і температура змінюються мало; світло поглинають частинки одного виду. Якщо ці умови не зберігаються і в розчині протікає дисоціація частинок, гідроліз, полімеризація, змінюється температура, показник заломлення, то спостерігається відхилення від лінійної залежності.