Методы выделения и идентификация

Для выделения флавоноидов проводят экстракцию раститель­ного материала, как правило, одним из низших спиртов. Спиртовое извлечение упаривают, к остатку добавляют горячую воду и после охлаждения удаляют^ нёполярные соединения (хлорофилл, жирные масла, эфирные масла и др.) из водной фазы хлороформом или четыреххлористым углеродом. Флавоноиды из водной фазы извле­кают последовательно этиловым эфиром (агликоны), этилацетатом (в основном монозиды) и бутанолом (биозиды, триозиды и т. д.).

Для разделения компонентов каждой фракции используют ко­лоночную хроматографию на силикагеле, полиамидном -сорбенте или целлюлозе. Элюирование веществ проводят смесью хлороформа с метиловым спиртом с возрастающей концентрацией метилового спирта, спирто-водными смесями с возрастающей концентрацией спирта, если сорбентом служит полиамид, или 5—30 %-ной уксус­ной кислотой в случае целлюлозы.

Для выделения отдельных флавоноидов существуют специфиче­ские методы. Так, для выделения рутина из бутонов софоры япон­ской экстракцию проводят горячей водой. При охлаждении водных извлечений рутин выпадает в осадок, его отфильтровывают и очи­щают перекристаллизацией из, спирта.

Для идентификации флавоноидов используют их физико-хими­ческие свойства: 1) определение температуры- плавления; 2) опре­деление удельного вращения (ta]_D гликозидов); 3)-сравнение УФ, ИК, масс-, ПМР спектров со спектрами известных образцов.

УФ спектр флавоноидов характеризуется наличием, как пра­вило, двух максимумов поглощения. Положение максимумов и их интенсивность характерны для различных групп флавоноидов. Флавоноловые гликозиды производные кверцетина (например, ру­
гин) имеют 2 максимума поглощения при 258 и 361 нм и «плечо» 266 нм. Для целей идентификации вещества используются положе- яия максимумов и «плеча», величина £}%. Эта величина для рутина равна 325,5, в случае моногликозида кверцитрина она лежит в пре­делах 350, в то время как у агликона (кверцетина) составляет 718. УФ спектроскопия успешно используется для установления сво­бодных ОН-групп в молекуле флавоноида путем добавления различ­ных реактивов (ацетата натрия, метилата натрия, борной кислоты : ацетатом натрия, хлористого алюминия и т. д.). При добавлении этих реактивов происходит смещение максимумов поглощения, ха­рактерное для гидроксильных групп в различных положениях.

В ИК спектре флавоноидов имеются полосы поглощения, ха­рактерные для различных группировок. Так, рутин имеет широкую полосу 3200—3500 см^-1, обусловленную фенольными и спиртовыми гидроксильными группами: полоса 1660 см^-1 принадлежит карбо­нильной группе; ароматические С=С-связи дают ряд полос 1610, 1580, 1510, 1460 см^-1. Важной для идентификации флавоноидов является так называемая область «отпечатка пальцев» 80Ю— 1200 см"¹. Совпадение полос указанных группировок и области «отпечатка пальцев» служит надежным признаком- идентичности веществ.