Определение количества клеток микроорганизмов с помощью стандартов мутности

В ряде случаев количество клеток в суспензии достаточно определить визуально путем сравнения со стандартом мутности. Стандарты мутности представляют собой взвесь частиц стекла "Пирекс" диаметром 0.5-3.5 мкм в дистиллированной воде. Их выпускает ГИСК им.Л.А.Тарасевича. Взвесь частиц стекла "Пирекс" устойчива в химическом отношении, не коагулирует при седиментации частиц, при взбалтывании осадка образует взвесь исходной дисперсности и мутности.

За единицу мутности стандарта мутности общего назначения условно принята мутность суспензии живых клеток бактерий-возбудителей тифа в физиологических растворах, содержащих в 1 мл 100 млн клеток. Стандарт мутности включает несколько эталонов на 5, 10, 20 международных единиц мутности. Мутность стандарта на 10 единиц соответствует следующей концентрации микроорганизмов: 850 млн/мл микробов кишечной группы, 10 млрд/мл микробов коклюшной группы, 1.5 млрд/мл бруцеллезных микробов, 2 млрд/мл холерных вибрионов, 4.5 млрд/мл туляремийных микробов.

К комплекту бактериальных эталонов прилагаются шрифтовая таблица, содержащая набор различных шрифтов, и две пустые пробирки, диаметр, толщина стенок и цвет стекла которых точно соответствуют пробиркам-эталонам, т.к. при сравнении микробной взвеси одной концентрации, содержащейся в пробирках разных диаметров, мутность жидкости будет неодинаковой.

Для приготовления микробной взвеси с помощью стандарта мутности обычно пользуются 18-48-часовыми микробными культурами, выращенными на скошенном мясо-пептонном агаре или другой плотной среде. Старые культуры микроорганизмов непригодны, т.к. они содержат большое количество мертвых клеток. Культуру из пробирки или чашки Петри берут петлей с микробного газона или смывают его полностью изотоническим раствором хлорида натрия с помощью бактериологической пипетки или шпателя. Для смыва культуры с матраца используют заранее заготовленные бусы или мелкий гравий, который высыпают в матрац на поверхность газона, а затем пипеткой наливают 10-20 мл омывающей жидкости и плавными движениями рук встряхивают матрац в горизонтальной плоскости.

Небольшое количество (0.1-0.4 мл) полученного смыва набирают в стерильную градуированную пипетку объемом 1-2 мл и переносят в стандартную пробирку или близкую к ней по диаметру и толщине стенок лабораторную пробирку. Далее к содержимому этой пробирки небольшими, но точно учитываемыми порциями приливают изотонический раствор хлорида натрия, сравнивая при этом мутность опытной пробирки с выбранным эталоном (стандартом мутности на 10 единиц).

Сравнение мутности в опытной и эталонной пробирках производят невооруженным глазом при хорошем дневном освещении в лучах падающего света, подложив под обе пробирки шрифтовую таблицу.

После уравнения мутности в опытной пробирке с эталоном мутности на 10 единиц можно, с целью контроля, провести сравнение опытной пробирки с эталонами на 5 и 20 единиц. Приготовленная взвесь должна быть более мутной, чем содержимое первого, и более прозрачной, чем содержимое второго эталонов. Зная количество изотонического раствора хлорида натрия, прибавленное к определенному объему исходной микробной взвеси, можно определить число микробных тел, содержащихся в 1 мл исходной бактериальной взвеси, и приготовить микробную взвесь любой необходимой концентрации.