Клонирование гибридомных клеток 2 страница

Тканевые препараты, повышая неспецифическую резистентность организма, в отличие от других препаратов подобного действия, не обладают кумулятивными и анафилактическими свойствами, не вызывают привыкания и усиливают антитоксическую функцию печени. Практическая безвредность тканевых препаратов подтверждается также отсутствием тератогенных, эмбриотоксических и канцерогенных проявлений. Ассортимент препаратов биогенных стимуляторов разнообразен, их получают из тканей как растительного, так и животного происхождения.

Препараты биогенных стимуляторов растительного происхождения.

Экстракт алоэ жидкий (Extractum Aloe fluidum) – получают из биостимулированных листьев алоэ древовидного (Aloe arborescens). Представляет собой прозрачную жидкость светло-желтого цвета. Применяется внутрь при язвенных болезнях желудка и двенадцатиперстной кишки, бронхитах и других заболеваниях.

Линимент алоэ (Linimentum Aloes). Состав: сока алоэ древовидного (консервированного из биостимулированных листьев) — 78 частей; масла касторового — 10,1 части; эмульгатора — 10,1 части; масла эвкалиптового — 0,1 часть; кислоты сорбиновой — 0,2 части; натрий-карбоксиметилцеллюлозы — 1,5 части. Однородная густая масса белого или светло-кремового цвета с характерным запахом.

Применяют наружно при ожогах, для лечения пораженной кожи при лучевой терапии.

Выпускают по 30—50 г во флаконах оранжевого стекла. Хранят в защищенном от света месте при температуре до +10 °С.

Сок алоэ (Succus Aloes). Готовят из свежесобранных листьев (или деток). Состав: сока алоэ — 80 мл; спирта этилового 95% — 20 мл; хлоробутанолгидрата — 0,5%.

Слегка мутная жидкость светло-оранжевого цвета, горькая на вкус. Под влиянием света и воздуха темнеет.

Применяют наружно в виде примочек или орошений при лечении гнойных ран, ожогов, воспалительных заболеваний кожи. Внутрь назначают при гастритах, энтероколитах, запорах.

Выпускают во флаконах по 100 мл. Хранят в прохладном, защищенном от света месте.

Биосед(Biosedum). Водный экстракт из биостимулированной (по В. П. Филатову) свежей травы очитка большого (Sedum maximum (L) Sutes). Определенное количество лекарственного сырья измельчают на пастообразователе «Волтарь-5». Сок отжимают с помощью серийного пресса ВПРД-5. Отжатое от сока сырье (жом) экстрагируют водой (1:10) при температуре 95—98 °С в течение 15 мин, повторяя операцию 4 раза. Сок и извлечения объединяют, отстаивают, фильтруют. Полученный препарат — прозрачная жидкость, светло-желтого цвета со слабым своеобразным запахом, рН 5,0—6,5. Разливают ампулы по 1 мл, стерилизуют при температуре 110°С 30 мин. Получают препарат и в виде сухого сока, тогда для сушки применяют распылительную сушилку РСЛ-10.

Химический состав: около 17 веществ флавоноидной природы, фенолкарбоновые кислоты, кумарины.

Применяют как вспомогательное средство для стимуляции обменных и регенеративных процессов в офтальмологической, стоматологической, хирургической и терапевтической практике (при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки). B стоматологической практике (при пародонтозе) применяют в виде аппликаций, электрофореза, инъекций в ткани десен.

Выпускают в ампулах по 1 мл, в упаковке по 10 шт. Хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре.

Препараты биогенных стимуляторов животного происхождения.

Стекловидное тело (Corpus vitreum). Получают из биостимулированных (по В. П. Филатову) глаз крупного рогатого скота и свиней. Глазное яблоко отделяют от лишних тканей, промывают водопроводной водой, дезинфицируют путем 2 — 3-кратного погружения в 5% раствор карболовой кислоты на 5 мин и доставляют в бокс, где тщательно обливают стерильным физиологическим раствором. Затем скальпелем делают широкий надрез границы наружной оболочки так, чтобы хрусталик остался в верхней части и выдавливают его, стекловидное тело извлекают с помощью вакуум-пистолета и сразу же замораживают.

Замороженное в холодильнике стекловидное тело взвешивают в количестве 125 частей на одну загрузку. Дефростацию (обезжиривание) сырья проводят сначала подачей горячей воды в рубашку реактора при перемешивании, а затем — подачей пара. По окончании дефростации стекловидное тело при помощи вакуума помещают в реактор для термообработки. С целью предотвращения пожелтения стекловидного тела в процессе термической обработки в реактор добавляют через люк взвешенные 520 частей угля активированного. Закрывают люк реактора и начинают процесс термообработки — включают мешалку и при перемешивании нагревают стекловидное тело путем подачи пара в рубашку реактора до температуры +115±5 °С, поддерживающейся в течение от 1 до 1,5 ч. Температуру поддерживают автоматически при помощи программного датчика и регулятора. После окончания процесса термообработки в рубашку реактора подается холодная вода для охлаждения содержимого реактора до температуры 85±5 °С. Затем извлечение осветляют в отстойнике и стерилизуют стекловидное тело с помощью слоистого фильтра типа «Орион». Перед началом стерильной фильтрации стерильный фильтр «Орион», состоящий из семи пластин марки EKS, восьми марки КО-5 и дополнительного мембранного фильтра, промывают водой для инъекций в количестве 70 л. Затем систему продувают стерильным чистым воздухом до удаления влаги.

Выход стекловидного тела после стерильной фильтрации составляет 80,75% от извлеченного. Готовый продукт — это стерильная, бесцветная, прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость, которую разливают в ампулы по 2 мл и стерилизуют при температуре 120 °С в течение 30 мин в паровом автоклаве. Затем выдерживают в термостате 8 дней при температуре 37 °С.

Применяют для размягчения и рассасывания рубцовой ткани как обезболивающее средство при невралгиях.

Хранят при комнатной температуре.

Взвесь плаценты для инъекций (Suspensio Placentae pro injectionibus). Взвесь получают из женской плаценты, ее отбирают в родильных домах от заведомо здоровых рожениц. После сбора плаценту сразу же помещают в стерильную посуду с крышкой и отправляют на завод, где замораживают в холодильных камерах и выдерживают при 2—4 °С в течение 5—7 сут для обогащения тканей плаценты биологически активными веществами. Консервированное сырье переносят в бокс, отделяют околоплодные пузыри, пупочные канатики, ополаскивают водой очищенной, очищают от серозной оболочки и измельчают. Взвешенную массу заливают двумя объемами 0,9% изотонического раствора натрия хлорида в стеклянных банках, которые закрывают ватными тампонами и пергаментной бумагой и завязывают. Баллоны стерилизуют в автоклаве при 119—121 °С в течение часа и оставляют в холодильнике на сутки.

Содержимое баллонов пропускают через коллоидную мельницу до получения частиц размером не более 0,3 мм в боксе, предварительно облученном ультрафиолетовыми лучами. Раствор охлаждают в течение 2—-3 ч и передают на ампулирование.

Готовый продукт — это гомогенная взвесь красновато-коричневого цвета с характерным запахом, рН 5,8—6,9.

Применяют как биогенный стимулятор при различных заболеваниях глаз.

Апилак(Apilacum). Сухое вещество нативного пчелиного маточного молочка (секрета аллотрофических желез рабочих пчел). Апилак — это лиофилизированная порошкообразная масса или пористые плитки кремовато-желтого цвета; применяется для приготовления следующих лекарственных форм:

- порошок апилака (Pulvis Apilaci) состоит из 7 частей апилака лиофилизированного и 93 частей лактозы;

- сублимированные таблетки апилака (Tabullettae Apilaci) содержат по 0,01 г (10 мг) апилака;

- свечи апилака (Suppositoria «Apilacum»), содержащие 0,005 или 0,01 г апилака лиофилизированного; в упаковке по 5 свечей;

- 3% мазь апилака (Unguentum Apilaci) в тубах по 50 г;

- кремы с 0,6% апилака, применяемые при себорее кожи лица, кожном зуде.

Применяют при гипотонии нарушения питания у реконвалесцентов, при невротических расстройствах, нарушении лактации в послеродовом периоде, при себорее кожи лица и других поражениях кожи.

Препараты из иловой лечебной грязи (минерального происхождения).

Пелоидин (Peloidinum). Водный экстракт лечебной грязи из Куяльницкого лимана Одесской области.

Технология приготовления. 280 кг лечебной грязи загружают в керамический бак, туда же помещают 720 л воды. На 1000 л смеси прибавляют 6,68 кг натрия хлорида, чтобы получить раствор изотоническим. Смесь настаивают при постоянном перемешивании (с помощью мешалки) от 3 до 6 сут при комнатной температуре, пока отстоявшаяся над грязью жидкость будет иметь плотность 1,008—1,010, содержание хлоридов 11,5—14,5 г/л, сухой остаток до 16 г/л, значение рН 8,2 — 9,5. Затем жидкость сифонируют и дважды фильтруют с целью удаления механических включений (применяя глубинные фильтры) и микроорганизмов (через стерильные пластины или мембранные фильтры с диаметром пор не более 0,3 мкм). Фильтрат нагревают в течение 1,5 ч при температуре 60—70 °С и после охлаждения в асептических условиях разливают во флаконы по 0,5 л. Хранят в прохладном, защищенном от света месте.

Применяют наружно при лечении гнойных ран, промывании и смачивании повязок, а также для лечения методом электрофореза хронических воспалительных заболеваний женских половых органов.

Гумизоль(Humisolum). 0,01% раствор фракций гуминовых кислот хаапсалуской морской лечебной грязи в изотоническом растворе натрия хлорида. В препарате находятся биологически активные вещества олигодинамического характера и до 40% гуминовых кислот. Это прозрачная или слегка опалесцирующая со слегка заметной взвесью жидкость с желтоватым оттенком, без запаха, солоноватого вкуса, нейтральной реакции. Терапевтический эффект близок к лечению лечебной грязью.

Применяется при хронических и подострых радикулитах, плекситах, невралгиях, ревматоидном артрите, артрозах, хронических заболеваниях среднего уха и придаточных пазухах носа, фарингитах, ринитах. Вводят внутримышечно или же путем электрофореза.

Выпускают в ампулах по 2 и 10 мл.

ФиБС Для получения препарата используют иловую грязь Куяльницкого лимана и перегоняют с водяным паром. Полученный отгон содержит много серы и водорода сульфида. К полученному отгону, содержащему серу и сероводород, добавляют натрия хлорид (7,3 г на 1 л), отстаивают и фильтруют через тканевой фильтр. Затем проводят сепарацию на жидкостном сепараторе тарелочного типа, при этом образуется прозрачный раствор при производительности 55 л/ч. Сероводород удаляют при нагревании, а натрия хлорид - применением повторной перегонки. К полученному раствору (пелоид) добавляют коричную кислоту (0,3—0,4 г на 1 л) и кумарин (0,1 г на 1 л) и фильтруют.

ФиБС — это бесцветная жидкость с запахом кумарина, рН 4,6—5,4. Стерилизуют при температуре 120 °С в течение 1 ч.

Применяют для лечения кератита, блефарита, помутнения стекловидного тела, а также артритов, радикулитов и других заболеваний.

Выпускают в ампулах по 1 мл. Хранят в защищенном от света месте.

Торфот(Torfotum). Отгон торфа из определенных месторождений с определенными показателями. Это прозрачная, бесцветная, стерильная жидкость с характерным запахом торфа. Значение рН 6,0—8,8. Применяют по тем же показаниям, что и ФиБС.

Выпускают в ампулах по 1 мл.

Вулнузан (Vulnusan). Мазь, содержащая экстракт из маточников поморийских соляных озер Болгарии - 12 г; касторового масла — 35 г; ланолина — 15 г; воды — до 100 мл. Способствует очищению и ускорению заживления поверхностных гнойных ран, трещин (заднего прохода) и др.

52. Препараты из животного сырья. Характеристика. Классификация. Технологические схемы производства.

Препараты, получаемые из животного сырья (органов, тканей, крови, мочи и т.д.). известны под названием органотерапевтические или органопрепараты (Medicamenta organotherapeutiea).

В зависимости от природы фармакологически активных веществ их можно подразделить на препараты:

- гормонов,

- ферментов,

- препараты неспецифического действия.

В зависимости от органа, из которого они получены, различают препараты из:

- гипофиза,

- поджелудочной,

- щитовидной желез,

- печени

- семенников

- надпочечников и т.д.

По способу получения и степени очистки их разделяют на:

- экстракционные - высушенные, обезжиренные и измельченные железы и ткани для внутреннего употребления

- инъекционные.

Инъекционные, в свою очередь, подразделяют на:

- максимально очищенные экстракты;

- препараты индивидуальных веществ.

53.Краткая история развития биотехнологии и периоды развития биотехнологии. Характеристика. Биотехнология лекарственных средств.

Человек, рождающийся для познания мира (в том числе — и самого себя), давным-давно освоил на практике различные процес-сы биотехнологии, не зная по существу, что они относились к такому разряду. В самом деле, с библейских времен известно виноделие, тысячелетия насчитывает хлебопечение и т. д.

Познавательная деятельностьлюдей непосредственно сказыва-лась на уровне социального развнтия общества. Недаром вторую половину XX столетия мы называем периодом научно-технической революции. Наука сегодня имеет огромное значение в жизни людей, и научный подход к решению любой задачи — веление и требование времени.

Наука формировалась и эволюционировала по мере формиро-вания и развития человеческого общества. Это, в частности, не-посредственно относится и к биотехнологии. Ее возникновение, становление и развитие условно можно подразделить на 4 периода: эмпирический, этиологический, биотехнический и генотехниче-ский. Эмпирический(от греч. empeirikos — опытный) или доисто-рический период— самый длительный, охватывающий примерно 8000 лет, из которых более 6000 лет — до нашей эры и около 2000 лет — нашей эры. Древние народы того времени интуитивно использовали приемы и способы изготовления хлеба, пива и некоторых других продуктов, которые теперь мы относим к раз-ряду биотехнологических. Кризис охотничьего промысла (хозяй-ства) стал побудительным мотивом революции в изготовлении продуктов питания. Эта революция началась около 8000 лет назад и привела к изобретению техники земледелия — началу произво-дительного ведения хозяйства (неолит и бронзовый века.) Стали формироваться так называемые приречные цивилизации Месопо-тамии, Египта, Индии и Китая. Шумеры — первые жители Месо-потамии (на территории современного Ирака) создали цветущую в те времена цивилизацию. Они выпекали хлеб из кислого теста, владели искусством готовить пиво. В этом следовали им ассирийцы и вавилоняне, жившие также в Месопотамии, египтяне и древние индусы. В течение нескольких тысячелетий известен уксус, издревле приготавливавшийся в домашних условиях, хотя о микробах — индукторах этого процесса мир узнал в 1868 г. благодаря работам Пастера, и это несмотря на существование с XIV в. так называемого "Орлеанского способа" приготовления уксуса; первая дистилляция вина осуществлена в XII в.; водку из хлебных злаков получили в XVI в.; шампанское известно с ХVШ в., но получение почти абсолютного этанола впервые удалось в ХIV в. испанцу Раймунду Луллию (ок. 1235 — 1315) благодаря перегонке вина с негашеной известью.

В те древние времена продукты питания растительного и животного происхождения использовались не только в пищу, но и для лечебных целей. Например, в ассирийской столице Ниневии (8 — 7 века до н. э.) была царская библиотека, насчитывавшая более 30 000 клинописньгх табличек, из которых в 33 имелись сведения о лекарственных средствах и их рецептуре, и в самом городе размещался сад лекарственных растений. Ктому же эмпирическому периоду относятся: получение кис-ломолочных продуктов, квашеной капусты, медовых алкогольных напитков, силосование кормов, мочка лубоволокнистых растений.

Длительное накопление фактов происходило и в области ми-кологии (от греч. myKes — гриб). Сведения о грибах можно найти в источниках древности, а Луции Лициний Лукулл (106 — 56 гг. до н. э.), славившийся богатством, роскошью и пирами ("лукуллов пир"), прсдпочитал всем сьедобным грибам кесарев гриб (Amanita cesarea, L.). Древние евреи хорошо знали ржавчину хлебных злаков и головню. В (V — I веках до н. э. были собраны интересные материалы о грибах, нашедшие отражение в работах Аристотеля, Диоскорида, Плииия Младшего, Теофраста. В последующие века нашей эры микология стала самостоятельной наукой — велика роль в этом Д. Персоона и Э. М. Фриза, по праву считающихся отцами систематической микологии.

Таким образом, народы исстари пользовались на практике микробиологическими процессами, ничего не зная о микробах. Эмпиризм также был характерен ив практике использования полезных растений и животных.

Второй, этиологический(от греч. aitia— причина) периодв развитии биотехнологии охватывает вторую половину XIX века и первую треть XX века (1856 — 1933 гт.). Он связан с выдающимися исследованиями великого французского ученого Луи Пастера (1822 — 1895) — основоположника научной микробиологии и ряда микробиологических дисциплин (промышленной, медицинской, химической, санитарной). С аналитической микробиологией непосредственно связано открытие Пастером молекулярной ассиметрии (стереоизомерии). Это, по существу, бриллиантовыи век микробиологии. Пастер вскрыл микробную ирироду брожений, доказал возможность жизни в бескислородных условиях, экспериментально опроверг ходячее тогда представление о самопроизвольном зарождении живых существ, создал научные основы вакцинопрофилактики и вакцинотерапии; предложил метод стерилизации, называемый по его имени пастеризацией и т. д.

Немеркнущая слава Пастера не затмила имен его выдающихся учеников и сотрудников: Э. Дюкло, Э. Ру, Ш. Э. Шамберлана, Ж. А. Вильемена, И. И. Мечникова. В этот же период творили Р. Кох, Д. Листер, Ш. Китазато, Г. Т. Риккетс, Д. И. Ивановский, А. Лаверан и другие.

Параллелъно с Пастером трудился в Германии, а позднее — во Франции, выдающийся миколог А де Бари (1831 — 1888) — основоположник физиологической микологии. Изучив стадии раз-множения и историю индивидуального развития грибов (онтоге-нетический метод), сучетом их взаимоотношений с другими видами, а также цитологических и биологических особенностей, де Бари создал классификацию, которая и сегодня лежит в основе современных классификационных схем микро и макромицетов.

Де Бари — основоположник микофитопатологии — науки о грибных болезнях растений (от греч. filon — растение, palhos — болезнь), под его руководством сформировалась плеяда выдающихся ученых (в том числе — из России): Ф. М Бальфур, И. В. Баранецкий, М. Бейеринк, О. Брефельд, М. С. Воронин, А Кох, А. С. Фаминицин и др.

В биотехнологии важными являются питательные среды ддя культивирования ряда биообъектов. Уже А Пастер приготовил первую жидкую питательную среду в 1859 году, метод выращива-ниягрибов нажелатине предложил О. Брефельдв 1864 г._г Ж. Ролен сообщил о жидких средах для выращивания нитчатых грибов в 1870 г Р. Коху в 1876 г. удалось вырастать бациллы сибирской язвы в капле водянистой влаги, извлеченной из глаза погибшей коровы. В 80-е годы XIX столетия Р. Кох преддожил метод культи-вирования бактерий на стерильных ломтиках картофеля и затем — на агаризованных питательных средах.

В настоящее время, предлагая самые сложные и необычные в каком-либо отношении среды для выращивания биообъектов, мы опираемся на основополагающие результаты этих выдающихся ученых. Аналогичным образом можно сказать и о вариантах способов стерилизации питательных сред, имея в виду тиндализа-цию, кипячение, дробную стерилизацию и др. Все они основыва-лись на необходимости уничтожения посторонней микрофлоры, которая попадала в среды в процессе их изготовления.

В ряду открытий всемирного значения стоит обнаружение в 1892 г. вируса мозаичной болезни табака Д. И. Ивановским (1864 — 1920). Последовавшие за этим обнаружения других вирусов обеспечили становление новой научной дисциплины — вирусологии.

Этиологический период знаменателен тем, что удалось доказать индивидуальность микробов и получить их в чистых культурах. Более того, каждый вид мог быть размножен на питательных средах и использован в целях воспроизведения соответсгвующих процес-сов (бродильных, окислительных и др.). Например, маслянокислые бактерии и вызываемое ими маслянокислое брожение, лактобак-терии и молочнокислое брожение, дрожжи — сахаромицеты и спиртовое брожение, уксуснокислые бактерии и окисление этано-ла до уксусной кислоты и т. д, В этот период было начато изготовление прессованных пищевых дрожжей, а также некото-рых продуктов обмена (метаболизма) — ацетона, бутанола, лимои-ной и молочной кислот,- во Франции приступили к созданию биоустановок для микробиологической очистки сточных вод.

Знание причин биологических процессов еще не исключало нестерилъные операции, хотя и стремились к использованию чистых кудьтур микроорганизмов.

Для всестороннего изучения морфолого-физиологических свойств и продуктов обмена, прежде всего, микробов все ранее предложенные способы ихвыращивания оказались малопригод-ными. Более того, накопление однородной по возрасту большой массы клеток оставалось исключительно трудоемким процессом. Вот почему требовался принципиально иной подход для решения многих задач в области биотехнологии. В 1933 году А Клюйвер и Л. X. Ц. Перкин опубликовали работу "Методы изучения обмена веществ у плесневых грибов", в которой изложили основные технические приемы, а также подходы к оценке и интерпретации получаемых результатов при глубинном культивировании грибов. С этого времени начинается третий периодв развитии биологи-ческой технологии — биотехнический. Началось внедрение в биотехнологию крупномасштабного герметизированного оборудо-вания, обеспечившего проведение процёссов в стерильных усло-виях. Особенно мощный толчок в развитии промышленного био-технологического оборудования был отмечен в период становления и развития производства антибиотиков (время второй мировой войны 1939 — 1945 rr._f когда возникла острая необходимость в противомикробных препаратах для лечения больных с инфициро-ванными ранами). Все прогрессивное в области биологических и технических дисциплин, достигнутое к тому времени, нашло свое отражение в биотехнологии. Сдедует отметить, что уже в 1869 г.. Ф. Мишер получил "нуклеин" (ДНК) из гнойных телец (лейкоци-тов); В. Оствальд в 1893 г. установил каталитическую функцию ферментов; Т. Леб в 1897 г. установил способность к выживанию вие организма (в пробирках с плазмой или сывороткой крови) клеток крови и соединительной ткани; Г. Хаберланд в 1902 г. показал возможность кулътивирования клеток различных тканей растений в простых питательных растворах; Ц. Нейберг В 1912 г. раскрыл механизм процессов брожения; Л Михаэлис и М. Л. Ментен в 1913 г. разработали кинетику ферментативных рсакций, а А. Каррел усовершенствовал способ выращивания клеток тканей животных и человека и впервые применил экстракт эмбрионов для ускорения их роста; Г. А. Надсон и Г. С. Филлипов в 1925 г. доказали мутагенное действие рентгеновских лучей на дрожжи, а в 1937г. Г. Кребс открыл цикл трикарбоновых кислот (ЦТК); в 1960 г. Ж. Барски и др. впервые обнаружили соматические габриды опухолевых клеток мыши. Следовательно, накопленные научные факты стали побудительным мотивом для разработки способов крупномасштабного культивирования клеток различного проис-хождения. Это, яеобходимобылодляпблученияразличных клеточ-ных продуктов и самих клеток для нужд человека, и, прежде всего, в качестве или в составе лечебных и профилактических средств: пенициллина, стрептомицина, тетрациклинов, декстрана, ряда ами-нокислот и многих других веществ. К 1950 г. Ж. Моно (Франция) разработал теоретические основы непрерывного управляемого культивирования микробов; в 50-е годы вопросам практической реализации непрерывного культивирования микроорганизмов по-святили свои исследования М. Стефенсон, И. Малек, Н. Д. Иерусалимский и др.

Примерно за 40 дет третьего периода были решены основные задачи по конструированию, созданию и внедрению в практику необходимого оборудованйя, втом числе главного из них — биореакторов. Это оборудование используют и в настоящее время.

Четвертый период в биотехнологии — генотехнический (от греч. genesis — происхождение, возникновение, рождение) начал-ся с 1972 г. В этом году П. Берг со своими сотрудниками в США создали первую рекомбинантную молекулу ДНК. Однако следует отметить, что в 1969 г. Дж. Бекуит с колдегами выделил в химически чистом виде лактозный ген из кишечной палочки, показав тем самым возможиость направленных манипуляций с генетическим материалом бактерий.

Естественно, что без фундаментальной работы Ф. Крика и Дж. Уотсона (1953) по установлению структуры ДНК было невозмож-ным достигнуть современных результатов в области биотехноло-гии. Выяснение механизмов функционирования и регуляции ДНКГ выделение и изучение специфичных ферментов привело к фор-мированию строго научного подхода к разработке биотехнологи-ческих процессов на основе генно-инженерных работ. В этом суть генотехнического периода.

54.Области применения моноклональных антител. Методы анализа, основанные на использовании моноклональных (поликлональных) антител.

Чем же замечательны продукты гибридных моноклонов — моноклональные антитела? Чем они отличаются от обычных сывороточных антител, получаемых со времен Пастера? Моноклональные антитела это продукты потомков одной-единственной, само по себе особенной В-клетки и поэтому препараты моноклональных антител характеризуются следующими особенными свойствами, вытекающими из небывалой степени биохимической гомогенности:

— моноклональные антитела высокоспецифичны. Они направлены только против одной малой части сложных молекул антигенов, все — против одной и только одной и той же антигенной детерминанты;

— моноклональные антитела стабильны как эталоны в отношении специфичности и аффинности (прочности связи с антигеном).

Существенно, что исследователь может целенаправленно подобрать моноклон, вырабатывающий антитела только нужного «сорта», т. е. класса, подкласса, специфичности, аффинитета. Известно, что в организме вырабатываются минимальные количество антител классов ІgЕ (участвующих в аллергических реакциях) и ІgD.Методом гибридизации моноклональные антитела этих классов можно получить в неограниченных количествах.

Традиционные сывороточные антитела при любых схемах иммунизации представляют из себя смесь молекул антител, весьма гетерогенных по специфичности, аффинности и классовой принадлежности, что имеет следствием практически неизбежную перекрестную реактивность иммунных сывороток с разными антигенами. Перекрестная реактивность делает трудным или невозможным идентификацию уникальных антигенов. Только с помощью моноклональных антител стала возможной, например, диагностика уникального антигена, одной из самых злокачественных опухолей человека — меланобластомы.

Чтобы наше изложение не превратилось в упрощенную апологию гибридом, заметим, что поликлональность, гетерогенность сывороточных антител, образующихся в организме животных и человека, отнюдь не недостаток с эволюционной точки зрения. Например, продукция разных антител против разных антигенных детерминант одной целой молекулы антигена увеличивает вероятность образования комплексов антиген — антитело, эффективно выводимых из организма. Это несомненный выигрыш в резистентности, например, к бактериальным и вирусным болезням.

Медицина, в отличие от эволюции, работает с каждым индивидуальным организмом как с самоценным. Моноклональные антитела, в отличие от поликлональных сывороточных, обещают стать средством тонкой диагностики и лечения с минимумом побочных эффектов (а в идеале без побочных эффектов) патологически измененной иммунной системы организма.

55.Моноклональные антитела в медицинской диагностике (тестирование гормонов, антибиотиков, аллергенов и т.д.). Моноклональные антитела в терапии и профилактике (перспективы высокоспецифичных вакцин, иммунотоксинов). Включение моноклональных антител в оболочку липосом.

Многие задумываются над вопросом, каковы пер-спективы практического применения гибридных кле-ток и моноклональных антител». В самых пессимистических оценках содержится мнение, что гибридомы и моноклональные антитела изменят лицо им-мунологии и многих разделов биологии, существеннейшим образом улучшат иммунодиагностику болезней человека и животных, но что с их помощью все же не удастся добиться радикального перелома в деле иммунотерапии опухолевых, вирусных и бактериальных заболеваний.

Наиболее трудными являются оценка результатов и прогнозирование перспектив в приложении к он-кологии. Определенный прогресс наметился в области обнаружения и диагностики опухолевых антигенов. Мы упоминали об обнаружении уникального антигена меланобластом человека и диагностики этой группы опухолей. По-видимому, в ближайшем будущем бу-дут предприняты попытки терапии меланобластом с помощью этих моноклональных антител. Получены моноклональные антитела к опухолевым антигенам мышиного лейкоза Ь-1210, карциномы молочной же-лезы крыс и человека. Доказана принципиальная возможность обнаружить очаги опухоли в организме с помощью радиомеченных моноклональных антител. Однако основным препятствием для широкого исполь-зования моноклональных антител в онкологии, по-видимому, окажутся не недостатки новой биотехноло-гии, а исключительное многообразие опухолевых ан-тигенов. Так, нотки сомнения прозвучали недавно в сообщении группы авторов: не придется ли получать моноклональные антитела против опухолевых анти-генов каждого отдельного больного. Эти авторы пред-лагают следующие ориентировочные расчеты: 1 мг моноклональных антител способен убить опухоль весом 3,2 г.