Применение микробиологических методов и генной инженерии для получения лекарственных веществ.

Путем микробиологического синтеза сейчас получают многие антибиотики, стероидные соединения, инсулин, интерферон, антитела, пептидные гормоны, энзимы (ферменты), витамины и др. Современные процессы базируются на использовании высокоактивных мутантных штаммов микроорганизмов, в соответствующих условиях специфически продуцирующих необходимое вещество. Например витамин В12 из Propionibactericum shermanii. Соответствующие штаммы используют для получения пенициллинов, цефалоспоринов, тетрациклинов, эритромицинов, аминогликозидов, макролидов ит.д. Ферментация осуществляется в ферментерах. Процесс ферментации продолжается до 200 часов, затем проводят фильтрование, и необходимый продукт из фильтрата выделяют путем адсорбции или экстракции. Довольно часто отфильтрованная масса используется как кормовая добавка скоту, поскольку содержит большое количество протеина.

Современными рекомбинантными методами можно создавать пептиды, которые нельзя получить с помощью природных микроорганизмов. Например, модифицированные методами генной инженерии бактерии кишечной палочки E. coli производят А- и В-цепи инсулина человека или аналогов проинсулина. Дисульфидные мостики селективно образуются после выделения, конечная очистка достигается хроматографическими методами. Получают гормон роста человека, нейроактивные пептиды, соматостатин, интерфероны, активатор тканевого плазминогена, лимфокинины, регуляторы ионов кальция, белковые вакцины, моноклональные антитела (используемые как диагностические средства). Микробиологические методы энзимов часто применяют для региостереоспецифического синтеза, например для превращения прогестерона в 11-a-гидроксипрогестерон – ключевой продукт в синтезе кортизона. Изолированные энзимы служат также для изомеризации глюкозы в фруктозу, в ферментном анализе. Многие энзимы используют самостоятельно: для нормализации пищеварения – химотрипсин, пепсин, трипсин, липазы, амилазы; в качестве цитостатических средств при лечении лейкемии – урокиназа, аспарагиназа.

Появление генной инженерии способствовало созданию высокопродуктивных штаммов микроорганизмов-производителей, а также новых поколений антибиотиков, аминокислот и витаминов. Необходимо отметить, что внедрение генно-инженерных технологий потребует трансформации общественного сознания и выработки новых этических норм.

Более отдаленная перспектива – генная терапия, которая предусматривает использование ЛП, действующих на уровне генетических изменений в клетках. Суть ее заключается в использовании для лечебных целей и для управления действием ЛС «клонированных» генов и других генетических приемов. Однако проблемы, связанные с высоким уровнем риска при разработке генно-инженерных продуктов, не позволяют уверенно прогнозировать использование этой концепции как базовой.

9. Современные требования к ЛС: безопасность, эффективность и качество. Система обеспечения качества лекарственных средств на всех этапах их создания и использования.

Понятие "качество" для лекарственного средства является комплексным понятием, включающим в себя такие две обязательные составляющие, как безопасность, специфичность и эффективность. Безопасность лекарственных средств - характеристика лекарственных средств, основанная на сравнительном анализе их эффективности и оценки риска причинения вреда здоровью. Основной критерий доброкачественности ЛВ определяется отсутствием в нем токсичных примесей и/или наличием физиологически неактивных примесей в допустимых стандартами пределах. Последние устанавливаются на основании результатов биологических испытаний. Присутствие примесей в допустимых пределах не должно влиять на качество ЛС и его терапевтический эффект; этот факт можно рассматривать как своеобразное указание на степень очистки ЛВ. Однако в слишком большом количестве они снижают концентрацию активной субстанции в ЛС и уменьшают его активность. Условность критерия доброкачественности связана с чувствительностью выбранного метода анализа. Среди источников и причин недоброкачественности наиболее важными (а часто и объективно неизбежными) являются следующие: ●плохая очистка исходного сырья; ●побочные продукты синтеза; ●механические загрязнения (остатки фильтрующих материалов, растворителей и т. п.); ●примеси материалов аппаратуры (металлы, стекло); ●перекрестное загрязнение (при получении в производственном помещении нескольких ЛВ, которые могут содержаться в виде

аэрозолей в воздухе); ●нарушение условий хранения сырья и готовой продукции (ЛС).

Для каждого ЛВ в статьях ГФ X и ГФ XI приводится перечень показателей, по которым устанавливается его доброкачественность: ●внешний вид; ●растворимость; ●температуры плавления и кипения; ●рН водного раствора; ●окраска; ●прозрачность (или степень мутности); ●зольный остаток; ●содержание летучих веществ и воды; ●кислотное число; ●иодное число; ●эфирное число; ●допустимые и недопустимые примеси; ●адсорбционная способность; ●дисперсность; ●наличие веществ-красителей и др. Для некоторых проверяют ● стерильность, ●пирогенность. Определяют ● количество активного в-ва в ЛС.

Эффективность лекарственных средств - характеристика степени положительного влияния лекарственных средств на течение болезни.

Качество применяемых ЛС во многом определяется уровнем требований, включенных в государственный стандарт качества на этапе разработки и разрешения ЛС к медицинскому применению, а для зарубежных ЛС – на этапе регистрации в стране. В настоящее время уровень

требований, предъявляемых Фармакопейным государственным комитетом к нормативной документации при ее экспертизе, соответствует международному. Наряду с усилением контроля качества ЛС, поступающих в аптечную сеть, важное значение приобретает работа по обеспечению качества ЛС на промышленных предприятиях в процессе их производства. Предполагается, что фармацевтические предприятия будут постепенно вводить предлагаемые ВОЗ «Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств» (Good Manufacturing Practice – GMP), которые действуют в странах Европейского союза и США. Их соблюдение дает право стране присоединиться к Конвенции о взаимном признании инспекций в области производства ЛС.

Контроль создания и использования ЛС осуществляет государство. При Минздраве Республики Беларусь для этого созданы два специальных комитета. Фармакологический комитет рассматривает и утверждает материалы о целесообразности применения новых и исключения из медицинской практики устаревших и малоэффективных ЛС. Фармакопейный комитет решает вопросы, связанные со стандартизацией ЛС: ●l составление статей Государственной Фармакопеи (ГФ) и дополнений к ней; ● утверждение нормативно-технической документации (НТД) на ЛС, не вошедшие в фармакопею, но применяемые в медицинской и ветеринарной практике; ●l утверждение методов приготовления и контроля качества ЛС; ●l рассмотрение стандартов на растительное сырье, химические реактивы; ● установление сроков годности, условий хранения, вида упаковки и др. Эти мероприятия осуществляют специализированные комиссии, которые работают в составе Фармакопейного комитета (химическая, фармацевтическая, фармакогностическая, по антибиотикам, эндокринным препаратам и др.). Государственная Фармакопея – это сборник стандартов и положений о качестве лекарственных средств, препаратов и лекарственного сырья, применяемого для изготовления лекарственных форм. Изложенные в ней стандарты и требования к качеству отдельных видов фармацевтической продукции обязательны в равной степени и для отдельных лиц (провизора, врача), и для всех организаций, которые изготовляют, хранят, контролируют и применяют ЛС. По ГФ осуществляют анализ ЛС в целях проверки их качества.

10. Стандарты надлежащих практик: GRP, GLP, GCP, GMP, GPP, GSP и т.д.

Многолетний отечественный и зарубежный опыт показал, что гарантировать качество ЛС можно лишь с помощью более строгого регламентирования всех этапов так называемого «жизненного цикла» ЛС: доклинических исследований, клинических испытаний, производства и реализации (оптовой и розничной). Современная международная концепция обеспечения качества ЛС заключается в разработке, утверждении и последующем регулярном контроле соблюдения правил, регламентирующих все этапы продвижения ЛС: ● доклинические исследования – правила надлежащей лабораторной практики (Good Laboratory Practice – GLP); ●клинические испытания – правила надлежащей клинической практики (Good Clinical Practice – GCP); ● производство – правила надлежащей производственной практики (Good Manufacturing Practice – GMP); ● оптовая реализация – правила надлежащей дистрибьюторской практики (Good Distribution Practice – GDP); ● реализация в аптеках – правила надлежащей аптечной практики (Good Pharmacy Practice – GPP).

На этапе доклинических испытаний, когда проводится изучение фармакологической активности, токсичности и других характеристик потенциальных ЛС на животных (биологических тест-системах), одной из основных задач является обеспечение объективности получаемых данных. Правила GLP определяют методологию, уровень организации и проведения доклинических исследований ЛС. Стандартизация организационных процессов и условий проведения лабораторных исследований позволяет компетентным государственным органам признавать результаты, полученные в раз личных странах. Использование стандартов GLP при доклинических испытаниях гарантирует безопасность последующих клинических испытаний, что в итоге способствует обеспечению качества ЛС в целом.

Основная цель клинических испытаний – установление эффективности и безопасности ЛС, выявление побочных эффектов, определение диапазона терапевтических доз и др. Стандарты планирования и проведения клинических испытаний нацелены на обеспечение точности и достоверности регистрируемых данных, а также на защиту прав субъекта испытания в соответствии с требованиями. Основополагающий принцип GCP – всестороннее и точное документирование всего процесса клинических испытаний, а также единообразие при выполнении определенных функций. Последнее достигается использованием стандартных письменных инструкций по проведению испытаний. Контроль соблюдения правил GCP является одним из необходимых направлений государственного регулирования эффективности и безопасности ЛС.

Правила GMP регламентируют следующие положения: ●организационную структуру предприятия; ● обязанности отдела контроля качества; ● квалификацию персонала; ●характеристики зданий и помещений, оборудования; ● особенности проведения контроля компонентов и укупорочных материалов ЛС; ● организацию технологического процесса; ●критерии оценки и использования маркировочных материалов; ● операции по упаковке и маркировке; ● сроки годности, хранения и отгрузки; ● регистрацию, лабораторный контроль (анализ физико-химических параметров, определение стабильности, хранение стандартных образцов, содержание лабораторных животных) и отчетность.

В развитие этих правил разрабатываются нормативные документы, регламентирующие требования к процессу производства конкретных видов фармацевтической продукции.

В правилах GMP особое значение придается валидации фармацевтического производства: это документированное подтверждение соответствия условий производства, оборудования, технологического процесса, качества промежуточных и готовых фармацевтических продуктов требованиям действующей нормативной документации. Внедрение правил GMP, носящих системный и профилактический характер, а также последующее инспектирование действующих предприятий государственными органами направлено на предотвращение дефектов, способных отрицательно повлиять на качество готовых ЛС в процессе их производства.

Правила GDP устанавливают специальные требования к персоналу, документации, помещениям и оборудованию, осуществлению поставок и порядку возвратов ЛС. В соответствии с правилами GDP дистрибьюторы имеют право закупать ЛС только у владельцев лицензий на оптовую реализацию, производство или импорт ЛС. Процесс хранения ЛС должен быть организован таким образом, чтобы их реализация осуществлялась в соответствии со сроками поступления, т. е. при наличии нескольких партий одного наименования первоначально должны реализовываться ЛС более раннего поступления.

Правила GPP рекомендованы для использования национальными и международными фармацевтическими организациями, государственными органами в качестве общепринятых стандартов надлежащей аптечной практики. Правила GPP базируются на концепции оказания фармацевтической помощи, предоставляемой фармацевтическими работниками.

К основным элементам GPP относятся следующие виды деятельности: ● пропаганда здорового образа жизни; ● лекарственное обеспечение и связанные с этим вопросы управления; ●содействие процессу проведения правильного и ответственного лекарственного самолечения; ●содействие процессу правильного прописывания и применения препаратов.

Для каждого из перечисленных элементов GPP должны быть разработаны и внедрены в практику национальные стандарты. Правилами GPP регламентируются условия хранения ЛС, включая требования к помещениям, организации рабочих мест, используемому оборудованию, а также процедура уничтожения ЛС с истекшим сроком годности. Особое внимание уделяется обеспечению качества ЛС, индивидуально изготовляемых в условиях аптек.

В настоящее время в мире происходят активные процессы гармонизации требований в области обеспечения качества ЛС как между странами, так и между целыми регионами. В рамках ВОЗ в настоящее время функционирует Система сертификации качества ЛС для международной торговли. В рамках этой Системы страной-экспортером выдается сертификат ЛС, который предоставляется уполномоченному регламентирующему органу страны-импортера. Сертификат содержит сведения о соответствии производства ЛС требованиям GMP, результатах проведения инспектирования предприятия-изготовителя и др.

Для участия в данной Системе необходимо, чтобы в стране действовали три основных условия: ●государственная регистрация ЛС; ●наличие законодательно утвержденных правил GMP; ●регулярное независимое инспектирование предприятий-производителей ЛС на соответствие требованиям GMP, проводимое под эгидой специального органа, уполномоченного национальным законодательством.

В настоящее время 141 страна признала разработанную ВОЗ Систему сертификации качества ЛС для международной торговли. Систематически проводятся международные конференции национальных уполномоченных органов в области регулирования ЛС.