Диагностика ВИЧ-инфекции. Диагностика ВИЧ-инфекции основана на сопоставлении эпиде­миологических, клинических и лабораторных данных

Диагностика ВИЧ-инфекции основана на сопоставлении эпиде­миологических, клинических и лабораторных данных. Диагностика ВИЧ-инфекции включает два этапа:

1. Установление собственно факта заражения ВИЧ.

2. Определение стадии заболевания.

Лабораторная диагностика

Может осуществляться следующими путями:

1. Выявление антител к вирусу или его отдельным антигенам.

2. Выявление антигенов ВИЧ или его ДНК.

3. Выделение культуры ВИЧ.

I. Иммунологические методы диагностики ВИЧ:

а) иммуноферментный анализ (ИФА);

б) иммунный блот (иммуноблот).
Иммуноферментный анализ (ИФА) является первым, скри-

нинговым этапом диагностики ВИЧ-инфекции. Он позволяет оп­ределить наличие суммарных антител к ВИЧ в сыворотке крови с помощью твердофазного иммуноферментного анализа.

Наличие ложноположительных результатов может быть связа­но с тем, что ряд сывороточных белков обладают способностью вступать в реакцию со специфическими антителами к ВИЧ.

У 90-95% инфицированных антитела к ВИЧ появляются в те­чение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% — через б месяцев, у 0,5-1% — в более поздние сроки.

--------------------------------------- Глава 5 -------------------------------------------

Если ИФА проводится в ранние сроки заболевания, т. е. до 3-х месяцев после момента инфицирования, то результат будет от­рицательным, хотя в организме будет находиться ВИЧ в большом количестве. Этот период называется «периодом серонегативного окна».

Если получен положительный результат методом ИФА, то про­водят два повторных исследования тем же методом в динамике — дважды через 30 дней. При двух отрицательных результатах по­вторных исследований кровь считается неинфицированной. Если одно или оба повторных исследования дают положительный ре­зультат, то его перепроверяют на втором этапе — подтверждающей диагностике.

К методам подтверждающей диагностики относится иммунный блот (иммуноблот), который позволяет установить наличие анти­тел к отдельным протеинам ВИЧ. Сущность метода заключается в том, что разделенные с помощью электрофореза протеины ВИЧ на­носятся на полоски нитроцеллюлозы. Выявление в сыворотке ан­тител к поверхностным протеинам ВИЧ (gpl60, gpl20, gp41) в сочетании с антителами к ядерному белку р24 свидетельствует о наличии ВИЧ-инфекции. Положительными считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к 2-3 протеинам ВИЧ, отрица­тельными — если не обнаружены антитела ни к одному из протеи­нов ВИЧ.

П. Выявление антигенов ВИЧ:

а) выявление антигена р24;

б) полимеразная цепная реакция (PCR).

Выявление антигена р24возможно только в начальной стадии заболевания или в стадии СПИДа, когда концентрация свободного вируса в крови максимальна. Идентификация данного антигена осуществляется в культурах лимфоцитов с помощью методов моле­кулярной гибридизации (выявление нуклеиновых кислот ВИЧ), обнаружения активности обратной транскриптазы как маркерного фермента ретровирусов, что делает этот метод очень дорогостоя­щим и поэтому практически неприменимым в наших условиях.

Полимеразная цепная реакция (PCR)позволяет выявить гене­тический материал вируса даже в раннем периоде заболевания. Это особенно важно в случае вертикальной трансмиссии, когда антите­ла в крови как инфицированного, так и неинфицированного ребен­ка до 18 месяцев будут определяться обязательно.

Метод PCR является самым высокочувствительным и специ­фичным, однако проведение таких исследований требует наличия дорогостоящего оборудования и специально обученного персонала

—---------------------------- Глава 5 ------------------------------

очень высокой квалификации, поэтому в настоящее время боль­шинству лечебных учреждений, в том числе центрам СПИДа, он недоступен.

III. Выделение культуры вирусаявляется очень важным диаг­ностическим тестом, однако этот метод практически не применяется из-за высокой дороговизны и большой трудоемкости исследова­ния, необходимости в специально оборудованной вирусологичес­кой лаборатории и длительности получения результата (3-4 неде­ли).

IV. Методы определения стадии ВИЧ-болезни:

а) определение степени иммуносупрессии по уровню CD4+ лим­
фоцитов;

б) определение «вирусной нагрузки».

Определение уровня CD4+ лимфоцитовпозволяет судить о глу­бине иммуносупрессии и прогнозировать развитие тех или иных вторичных заболеваний, а также планировать беременность.

У здоровых взрослых людей количество CD4+ лимфоцитов со­ставляет 1400 и более в 1 мкл крови.

При ВИЧ-инфекции количество этих клеток снижается до 500 в 1 мкл, а на стадии СПИДа их менее 200 в 1 мкл. Соотношение CD4+/CD8+ при ВИЧ-инфекции составляет менее 1,0 (норма 1,5-2,0).

Уровень CD4+ лимфоцитов помогает определить потребность в антиретровирусной терапии и судить о ее эффективности. Так, по­вышение уровня CD4+ лимфоцитов через 1 месяц от начала анти­ретровирусной терапии считается позитивным критерием ееэффективности и дает положительный прогноз как для течения ВИЧ-болезни, так и для профилактики вертикальной трансмиссии ВИЧ.

Определение «вирусной нагрузки».Под «вирусной нагрузкой» понимают количество РНК-копий вируса в 1 мкл крови, опреде­ленных методом ПЦР. Этот метод считается одним из основных ла­бораторных маркеров прогрессирования ВИЧ-инфекции.

«Вирусная нагрузка» 500-5000 и даже 10 000 копий в 1 мкл со­ответствует начальной стадии ВИЧ-инфекции, 10 000-30 000 ко­пий — персистирующей генерализованной лимфаденопатии (ПГЛ), 30 000-100 000копий — СПИД-АК, более 100 000 копий — СПИДу.

Показатель «вирусной нагрузки» используется для быстрой оценки эффективности антиретровирусной терапии. При эффек­тивной антивирусной терапии «вирусная нагрузка» уже через 4-8 недель от начала лечения снижается в 3-5 раз. К 3-4 месяцам

--------------------------------------- Глава 5 ------------------------------------------

от начала лечения у большинства пациентов уровень «вирусной на­грузки» становится неопределяемым.