Цитомегаловирусная инфекция. Вирус может быть выделен из амниотической жидкости, гло­точного мазка или мочи инфицированного младенца

Вирус может быть выделен из амниотической жидкости, гло­точного мазка или мочи инфицированного младенца. Наиболее достоверно выделение в материале самого вируса или его ДНК. «Золотым стандартом» до сих пор остается вирусологический метод. Для выявления антигена используют реакцию иммунофлю-оресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), ДНК-гибридизацию, полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Специфи­ческие антитела IgM и IgG класса определяют иммуноферментным методом. Обнаружение ЦМВ-специфических IgM-антител в еди­ничной пробе крови указывает на недавнюю первичную или теку­щую (рецидивирующую) инфекцию. Определение IgG CMV должно

_--------------------------------- — Глава 3 --------------------------------------------

осуществляться одновременно с определением IgM, особенно для диагностики первичной инфекции. Однократно определенный по­вышенный титр специфических антител класса IgG CMV не явля­ется диагностическим критерием острой фазы инфекции. Опреде­ление IgG-антител необходимо проводить в парных сыворотках с интервалом не менее 10 дней. Сероконверсия в период между дву­мя пробами крови может свидетельствовать о текущей инфекции.

Первичную инфекцию при беременности можно выявргть с по­мощью лабораторного исследования крови. После первичного ин­фицирования IgM-антитела персистируют до 16 недель, поэтому специфические IgM-антитела могут обнаруживаться в ранние сро­ки беременности, если инфицирование произошло еще до зачатия.

Врожденная инфекция может быть подтверждена либо путем выделения вируса из глоточного мазка или пробы мочи, взятых в течение первых трех недель жизни новорожденного, либо путем вы­явления ЦМВ-специфических IgM-антител в крови младенца или в пуповинной крови. В более поздние периоды жизни поставить диа­гноз врожденной ЦМВ-инфекции не представляется возможным. Определение IgM-антител после трех недель жизни может указы­вать на недавно развившуюся неонатальную или постнеонаталь-ную инфекцию, а выделение вируса в среду происходит постоянно у детей как с приобретенной, так и с врожденной инфекцией.

Энтеровирусы

Энтеровирусные инфекции обычно диагностируют путем выде­ления в клеточной культуре вируса из испражнений, глоточных мазков, спинномозговой жидкости, крови, мазков кожных пора­жений или секционного материала. Выделение вируса возможно только в тех лабораториях, где имеются условия для обнаружения возбудителя в культуре ткани. Таким способом могут быть выяв­лены вирусы Коксаки группы В и ECHO, некоторые штаммы Коксаки группы А. Серологический анализ, выявляющий IgM-антитела против энтеровирусов, может иметь определенное ретро­спективное значение, особенно при вспышках, но он мало приго­ден на острой стадии инфекций у новорожденных. Следует иметь в виду возможность перекрестных реакций между различными се-ротипами вирусов, поэтому зачастую трудно или невозможно се­рологическим путем установить, каким именно типом вируса вызвано заболевание.

--------------------------------------- Глава 3 -------------------------------------------

Escherichia coli

Материалом для исследования у беременной женщины может быть среднесуточная порция мочи, кровь, амниотическая жид­кость, полученная путем амниоцентеза, выделения из влагалища (заднего свода). У младенцев (при подозрении на инфицирование) материалом для исследования может быть кровь, желудочный ас­пират, мазок из уха, моча, пробы с других участков.

Е. coli легко выделяется в бактериальной культуре наряду с дру­гими потенциально патогенными бактериями, включая разновид­ности энтеробактерий и анаэробы.

При культивировании микроорганизмов экспресс-методы идентификации энтеробактерий могут обеспечить результат в тот же день. Более важным преимуществом данного метода является то, что в тот же день, когда выделена гемокультура или другая культу­ра E.coli, могут быть получены результаты определения антибио-тикочувствительности, поскольку чувствительность к антибиоти­кам иногда может быть определена после 8-часовой инкубации.

При септицемии или менингите, вызванных грамотрицатель-ными бактериями, в крови или спинномозговой жидкости может быть обнаружен эндотоксин. Высокочувствительным методом об­наружения эндотоксина является тест с лизатом Limulus.

Многие различные типы E.coli можно идентифицировать путем анализа антигенов, которые находятся в клеточной стенке (О-серо-типы) и капсуле (К-антигены). Эти типы имеют большое значение, так как могут коррелировать со специфическими инфекциями. Методами обнаружения является латексная агглютинация.

Среди других лабораторных тестов используют количественное определение С-реактивного белка (СРБ) как ориентировочный по­казатель бактериальной инфекции у младенцев, которые находят­ся в тяжелом состоянии, но без признаков явного сепсиса. Высокие (> 80 мг/л) или возрастающие уровни СРБ могут служить основа­нием для срочного назначения антибиотикотерапии, а серийные пробы позволяют осуществлять мониторинг противомикробной терапии.

К числу других неспецифических показателей наличия сепсиса, вызванного E.coli, относятся следующие: нейтропения, нейтропе-ния с наличием незрелых форм лейкоцитов и тромбоцитопения; увеличение продуктов деградации фибрина; удлинение протромби-нового времени. О наличии тяжело протекающего сепсиса могут свидетельствовать также повышение билирубина и трансаминаз.

—----------------------------------- Глава 3 -------------------------------------------

Вирусный гепатит В (HBV)

Диагностика вируса гепатита В основывается на серологичес­ком исследовании крови. Маркерами вирусного гепатита В явля­ются следующие:

— поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) и антитела к не­му (анти-HBs);

— антитела к ядерному антигену гепатита В (анти-НВс, анти-НВс IgM);

— е-антиген гепатита В (HBeAg) и специфические антитела к нему (анти-НВе).

Пациенты, у которых обнаруживается HBsAg (HBsAg — поло­жительны), трактуются как инфицированные вирусом гепатита В; его обнаружение в крови на протяжении 6 месяцев и более свиде­тельствует о хроническом течении процесса. Этот маркер не несет информации об активности гепатита. Поэтому его выявление в крови служит только основанием для исследования других марке­ров гепатита В. Те, у кого обнаруживаются HBeAg, расцениваются как высоко инфекционные и опасны для окружающих. HBeAg — маркер фазы размножения (репликации вируса), который может выявляться как при остром, так и при хроническом гепатите В. На­личие этого показателя учитывается при решении вопроса о прове­дении противовирусного лечения. Как только пациент начинает выздоравливать, происходит потеря е-антигена, и начинают обра­зовываться антитела НВе и антитела HBs.

Анти-HBs — это антитела, которые обнаруживаются у лиц, вы­здоровевших или вакцинированных от гепатита. Это показатель иммунной защиты организма от вируса гепатита В. О степени на­дежности этой защиты свидетельствует количественный уровень анти-HBsAg в крови пациента.

Анти-НВе — антитела появляются в крови после исчезновения HBeAg и, как правило, свидетельствуют о прекращении размноже­ния вируса. Однако существует измененная (мутантная) разновид­ность вируса гепатита В, при инфицировании которой активное размножение вируса сохраняется при наличии анти-НВе. Беремен­ная женщина с положительным HBsAg должна параллельно обследоваться на анти-HBs, которые указывают на наличие пере­несенной инфекции. Если HBsAg сохраняются в течение более 6 месяцев, это свидетельствует о хроническом течении болезни. Да­же после выздоравливания пациенты могут быть носителем анти­гена в течение года и более. Исследование уровня трансаминаз

--------------------------------------- Глава 3 -------------------------------------------

печени необходимо для дифференцирования между симптоматиче­ским хроническим течением, хроническим персистирующим гепа­титом и хроническим активным гепатитом. Результаты скрининга на гепатит В у беременной могут указывать на то, что новорожден­ному необходимо как можно скорее после рождения ввести имму­ноглобулин и вакцину против гепатита В.

Существуют разнообразные тесты, применяемые при HBV-ин-фекции. В настоящее время в основном применяют серологические исследования крови (РИА или ИФА).

Вирусный гепатит С (HCV)

Диагностика вируса гепатита С также основывается на сероло­гическом исследовании крови. Маркерами вирусного гепатита С являются: антитела HCV и прямое обнаружение вируса гепатита С в сыворотке крови.

Для обнаружения антител HCV используют иммуноферментные технологии (ELISA). Недостатком данного метода является тот факт, что пациенты с HCV-инфекцией могут вырабатывать антите­ла до года. Кроме того, количество вырабатываемых организмом антител может быть незначительным и не обнаруживаться данным методом даже при наличии активной, инфекционной болезни. Результаты HCV, следовательно, должны интерпретироваться с учетом анамнеза и объективного статуса, а также результатов вспо­могательных лабораторных исследований.

Для подтверждения тест-положительных результатов иммуно-ферментного анализа используется рекомбинантный иммуноблот-метод (Western blot).

Наиболее специфическим диагностическим методом на сегод­няшний день является ПЦР, которая заключается в полимеразном цепном увеличении вирусного антигена в клинических экземпля­рах для его прямого обнаружения.

Вирусный гепатит Д (HDV)

Лабораторная диагностика HDV-инфекции обычно основывает­ся на определении антител в сыворотке пациента (анти-HDV). В острой фазе болезни специфический анти-HDV IgM может опреде­ляться, хотя IgM может оставаться в низких титрах в случаях пер-систирующей HDV-инфекции. Анти-HDV IgG появляются позже. Для определения антител в сыворотке применяется Western blot, методика которого более чувствительна, чем иммуноферментные

--------------------------------------- Глава 3 --------------------------------------------

методы. В научно-исследовательских лабораториях используется метод молекулярной гибридизации, что позволяет обнаружить РНК HDV в клинических экземплярах. Следует отметить, что об­следованию на HDV подлежат пациенты с гепатитом В, поскольку HDV — маленькая круглая полоска РНК, которая связана со спе­цифическим антигеном (HDVAg), покрытым HbsAg.

Вирусный гепатит Е (HEV)

Диагноз HEV-инфекции ставится на основании исключения другого инфекционного гепатита.