Определение уробилина в моче

Определение уробилина в моче также основано на образовании окрашенных в розовый или красный цвет соединений при взаимодействии уробилина с HCl, сульфатом меди или реактивом Эрлиха (парадиметил-аминобензальдегидом).

Проба Нейбауэра. К 3-4 мл свежевыпущенной мочи добавляют 3-4 капли реактива Эрлиха (пара-диметилбензальдегида). Окрашивание мочи в красный цвет свидетельствует о диагностически значимом повышении концентрации уробилина в моче.

У здорового человека с мочой выделяется не более 5-6 мг уробилина в сутки, который не выявляется качественными реакциями.

Положительная качественная реакция на уробилин свидетельствует:

· о выходе в общий кровоток уробилиногена, что обычно наблюдается у пациентов с поражениями паренхимы печени

· об увеличенном образовании стеркобилиногена (при усиленном гемолизе) в кишечнике, в избыточном количестве через vena hemorroidalis поступающего в кровоток и попадающего в мочу в большей, чем в норме, концентрации.

Проба Гмелина. Проба основана на способности желчных пигментов окисляться концентрированной азотной кислотой с образованием окрашенных в различные цвета продуктов окисления: биливердина (зеленого цвета), билицианина (синего цвета), холелетина (желтого цвета) и др.

Проба Гмелина может проводиться в пробирке или на фильтровальной бумаге. Она дает возможность открыть билирубин в разведении мочи

1:80 000.

В пробирку наливается 1-2 мл концентрированной азотной кислоты, содержащей следы азотистой. Осторожно по стенке наслаивается равный объем исследуемой мочи. При наличии в моче желчных пигментов на границе раздела жидкостей появляются цветные кольца. Характерно наличие зеленого, синего, фиолетового, красного и желтого колец в указанной последовательности соответственно разным степеням окисления пигмента.

Проба Розенбаха (проба на фильтровальной бумаге). 2 мл исследуемой мочи несколько раз фильтруется через небольшой бумажный фильтр. При наличии в ней желчных пигментов они частично задерживаются на фильтре. В центр фильтра, развернутого на предметном стекле и слегка подсушенного, стеклянной палочкой наносится капля концентрированной азотной кислоты. Появляются характерные цветные кольца. При этом зеленое кольцо всегда располагается снаружи.

Определение порфобилиногена в моче.При взаимодействии с р-метиламинобензальдегидом порфобилиноген образует окрашенные в красный цвет соединения. Продукты, имеющие красную окраску, образование которых не связано с порфобилиногеном, удаляются из реакционной смеси путем экстракции хлороформом и бутанолом.

Ход работы:

В пробирку вносится 2,5 мл мочи, 2, 5 мл реактива Эрлиха и 5 мл насыщенного раствора уксуснокислого натрия. Проводится интенсивное встряхивание. При наличие в моче порфобилиногена развивается характерная красная окраска. Содержимое переносится в мерный цилиндр на 20 мл. Добавляется 10 мл смеси хлороформа с бутанолом (1:1). Проба интенсивно встряхивается, после чего оставляется до расслоения фаз. Верхний водный слой сохраняет при этом красную окраску.

В норме при помощи описанного метода порфобилиноген в моче не обнаруживается (0 – 2 мг/л).

Приготовление реактива Эрлиха: 1 г р-метиламинобензальдегида растворяется в 35 мл ледяной уксусной кислоты. Добавляется 8 мл концентрированной хлорной кислоты, после чего общий объем доводится до 50 мл.