МОЛЕКУЛ. МЕТОДЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ

Цель занятия: 1.Изучить структурную организацию белковой

молекулы как основу функционирования всех белков.

2.Ознакомиться с особенностями структуры фибриллярных

белков.

3.Освоить методы очистки белков от примесей на примере

диализа.

Исходный уровень знаний:

- аминокислоты: строение, классификация;

- ковалентные и нековалентные связи: характеристика, при-

меры;

- физико-химические свойства белков.

Содержание занятия.

I.2. Строение глобулярных белков (первичная, вторичная, третичная, четвертичная структуры).

Особенности строения молекулы фибриллярных белков.

Взаимосвязь структуры и функции белков.

Видовая специфичность первичной структуры и антигенные свойства белков.

Методы очистки белков (хроматография, электрофорез, диализ и др.).

Гидролиз белка (виды, условия, продукты полного и неполного гидролиза).

II.1. Работа: ДИАЛИЗ БЕЛКА

Принцип метода.

Диализ основан на способности полупроницаемых мембран пропускать сквозь поры низкомолекулярные вещества и задерживать высокомолекулярные коллоидные частицы. Ди-ализ является удобным методом очистки белков. При диализе коллоидный раствор помещают в коллодиевый или целлофановый мешочек и погружают в дистиллированную или водопроводную воду. Молекулы солей, сахаров и других низкомолекулярных веществ легко диффундируют через мембраны, а вещества коллоидной природы остаются в мешочке.

Рис. 1. Варианты устройства системы для диализа белка. А) диализатор из стеклянного цилиндра с дном из полупроницаемой мембраны. Б) диализатор из коллодиевого мешочка. 1-держатель, 2-диализуемый раствор, 3-диализат.

Порядок выполнения работы.

В коллодиевый мешочек (диализатор) налить 5 мл солевого раствора белка. Погрузить в стакан с дистиллированной водой на 1 час. Через час с небольшими порциями диализата (наружная жидкость) проделать реакции на хлориды и белок и убедиться в том, что минеральные соли продиффундировали во внешний сосуд, а белок остался в содержимом мешочка.

Проба на белок (биуретовая реакция).

ВЫВОД:

III.2. Контрольные вопросы.

Что такое диализ?

Что такое диализат и диализуемая жидкость?

Какие реакции используются для контроля диализа?

Как используется диализ в медицине?

Материал для самоподготовки. I а)1. с.26-32, 49-71; II; III.