Методы выделения индивидуальных белков

При выделении индивидуальных белков обычно сталкиваются со следующими трудностями: 1) низкое содержание белка в исходном материале (часто < 0,1 % от сухой массы); 2) лабильность белков, что не позволяет применять традиционные методы органической химии (t°, перегонка, кристаллизация и др.); 3) связь белков со структурными элементами клеток или наличие их в белково-липидных, белково-углеводных и других комплексах биологических жидкостей; 4) наличие близких физико-химических свойств у разделенных белков. Выделение белков производят по следующей схеме.

Перевод белков ткани в раствор

1. Гомогенизация - перевод исследуемого материала в гомогенное состояние. При этом используются ступки, ножевые, пестиковые гомогенизаторы, ультразвук, замораживание - оттаивание и прочие методы для разрушения структур тканей методы.

2. Экстракция белков проводится обычно параллельно с гомогенизацией. Используют для экстракции: 8-10% растворы солей (NaCl, KCl и др.) - хорошо растворимы большинство белков тканей; буферные растворы; органические растворители и детергенты - нарушают гидрофобные взаимодействия; сахароза, глицерин и другие специальные экстрагенты.

3. Осветление гомогената (экстракта) путем центрифугирования или фильтрации. В результате получаем раствор тканевых белков.