Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА, англ. – EIA или ELISA) подразумевает определение суммарных антител и/или антигенов ВИЧ в биологических жидкостях.

Биологические жидкости, в которых можно определять антитела к ВИЧ:

§ сыворотка крови, полученная путем центрифугирования цельной крови, – наиболее распространено определение антител именно в сыворотке крови;

§ цельная капиллярная кровь, взятая из пальца;

§ транссудат слизистой полости рта, собранный с помощью специальной пластинки (тесты OraSure, Oral Fluid, OMT-EIA);

§ моча (быстрый тест Calypte HIV-1 Test для постановки врачом);

§ вагинальные выделения (быстрый тест Wellcozyme для определения IgG у жертв изнасилования).

Принцип метода ИФА-диагностики представлен на рис. 3.

Рис. 3. Принцип постановки иммуноферментного анализа (ИФА)

Существуют несколько поколений тестов для ИФА (табл. 1). Тесты всех поколений выявляют общие (суммарные) антитела к ВИЧ, а тесты 4 поколения – еще и р24 антиген ВИЧ («комбинированный тест»).

Таблица 1 – Характеристика тестов для ИФА различных поколений

В Беларуси в последнее время применяются ИФА тесты 3 и 4 поколений. Они обладают высокой чувствительностью – приближающейся к 100% (то есть вероятность получения ложноотрицательного результата практически исключается) и чуть более низкой специфичностью – около 98-99% (то есть у небольшой части обследованных, до 2%, результат будет ложноположительным). Поэтому ИФА считается не диагностическим, а скрининговым тестом, и при получении положительного результата ИФА-теста следует провести подтверждающий тест (иммуноблотинг).

ИФА тесты 4 поколения позволяют выявить кровь ВИЧ-позитивного человека уже вскоре после появления виремии, включая большую часть периода «серологического окна», когда антитела еще не наработаны, но в крови уже имеется р24 антиген (рис. 4). Поэтому в Беларуси ИФА тесты 4 поколения используются при тестировании донорской крови.

Рис. 4. Возможности различных тестов в раннем выявлении ВИЧ-инфекции [цит. по Р.Торстенссону, Шведский институт по контролю за инфекционными заболеваниями, 2005]

Определение р24 антигена ранее (до появления ДНК ПЦР) применяли также для диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных ВИЧ-позитивными матерями, поскольку у таких детей в первые месяцы жизни (до 18 месяцев) могут циркулировать как собственные, так и материнские антитела, следовательно, определение антител не имеет большой информативности. Также определение р24 антигена использовали в качестве экономичного способа определения вирусной нагрузки в условиях ограниченных ресурсов.