Рекомбинационное картирование в трехфакторных скрещиваниях

Производя трехфакторные скрещивания, можно построить генетическую карту малого участка хромосомы, так как на малом участке градиент переноса постоянный и им можно пренебречь. Выбор одной из всех возможных последовательностей трех генов основывается в трехфакторных скрещиваниях на общих закономерностях: 1) чем ближе неселективный маркер расположен к селективным, тем меньше частота кроссинговера между ними; 2) четырехкратный кроссинговер происходит реже, чем двойной (критерий минимума множественных кроссинговеров).

Пример: скрещивание Hfr A B C D e

F- a b c d E

селектор: D, антиселектор: E .

Конъюганты с фенотипом DE тестировали на присутствие неселективных маркеров. Получены следующие результаты (Захаров, Мацелюх, 1986):

Как видно из таблицы, в результате скрещивания возникло четыре пары комплементарных генотипов в отношении трех неселективных маркеров (a, b, c). Некоторые из них явились следствием перекрестов не только на участках 1, 2, и 3, но и в областях x и у (эти рекомбинанты комплементарных пар представлены меньшим числом).

Генотипы, возникшие в результате четверных кроссинговеров, представлены меньшим числом по сравнению с генотипами, требующими перекрестов в двух интервалах. Соблюдается главный принцип картирования – обратная зависимость частоты генотипов от числа перекрестов (AbC и aBc). Поэтому определяют относительную длину участков 1, 2 и 3 на основании частот трех простых классов рекомбинантов, возникших в результате кроссинговера на участках у и 1, у и 2 и у и 3. Эти частоты будут: 337:1512 = 0,22; 66:1512 = 0,44 и 242:1512 = 0,16.

Сопоставление физической карты, полученной методом прерванной конъюгации, и генетической карты, построенной на основании данных о частоте рекомбинаций, показало, что 1 минута продолжительности конъюгации соответствует 20 единицам генетической карты.

Результаты, полученные при рекомбинационном картировании мерозигот, следует подтверждать реципрокными скрещиваниями. Однако создание штаммов Hfr и F-, необходимых для проведения реципрокных скрещиваний, часто дело непростое, и в большинстве случаев рекомбинационное картирование проводится с использованием мерозигот, возникающих при трансдукции и трансформации.