Метод Тенфорда определения разности свободной энергии денатурированного и нативного белка по денатурации в растворе мочевины
Для изменения свободной энергии денатурации белка в растворе мочевины можно записать:
−ΔFu = RTlnKu = RTln , где и − концентрации денатурированного и нативного белка.
δ(ΔF) = ΔFu - ΔFH O = ΔFД – ΔFN.
δ(ΔF) = .
ni – число групп (звеньев) типа i в белке.
αi – численный параметр, зависящий от степени доступности растворителю групп данного типа в нативной конформации.
ΔFi – вклад групп типа i в свободную энергию перехода.
αi (пептидн.) 0.5;
αi (полярн.) 0.25;
αi (гидроф.) 0.75;
ΔFi определяется из данных о растворимости аминокислот в воде и в растворе мочевины данной концентрации. Для концентрации мочевины (C ), при которой [Д] = [N] (ΔFu = 0), тогда
ΔFH O =− δ(ΔF) =− .
3.32. Калориметрические измерения денатурационных изменений в белках
Денатурацию рассматривают как мономолекулярную реакцию перехода из нативного состояния белка (N) в денатурированное (Д):
N←→ Д
В калориметрии измеряют ΔН или ΔСр, сопровождающие эти переходы. В соответствии с формулой Киргоффа изменение энтальпии при плавлении:
ΔН = , где Cp(T) − теплоёмкость при постоянном давлении.
В обычных измерениях подводят теплоту к образцу: и регистрируют скорость повышения температуры образца ( ).
Чувствительность микрокалориметров высокая, примерно 10-7 Вт.
ΔСpd – это разность теплоемкостей белка в нативном и денатурированном состояниях при температуре перехода Td.
ΔНден = - - = ΔНd - ,
где ΔНd − молярная энтальпия перехода.
Для энтропии:
ΔSден = - .
Свободная энергия Гиббса для процесса денатурации (ΔFден ) запишется в виде:
ΔFден = ΔНден - T1 ΔSден = ΔНd - .
Дата добавления: 2015-02-07; просмотров: 942;