Робота 14

Кількісне визначення феофітину a та b

В екстрактах рослинних пігментів завжди знаходяться невеликі кількості феофітину так само, як і в інтактних листках. Феофітин а є функціональною складовою реакційного центру фотосистеми ІІ, виконуючи функцію первинного акцептора електронів з Р₆₈₀. Феофітин а і феофітин b утворюються під час екстракції пігментів під дією ендогенних органічних кислот. Цьому процесу запобігає додавання до екстракційної суміші MgCO₃ або CaCO₃, які нейтралізують кислоти. Кількість феофітину а і b зростає у процесі зберігання екстрактів, причому хлорофіл а є більш чутливим до феофітинізації, ніж хлорофіл b.

Мета роботи:визначити вміст феофітину а та b у рослинній тканині фотоколориметричним методом.

Прилади і матеріали дослідження: витяг пігментів, отриманий у попередній роботі (зберігається в темряві, при низькій температурі!), скляні пробірки, піпетка на 5 мл, 25%-на HCl, фотоколориметр.

Хід виконання роботи

1.До 5 мл розведеного екстракту пігментів, отриманого у роботі №13, додають 1 краплю 25%-ної HCl, таким чином усі хлорофіли витягу повністю перетворюються до феофітинів.

2.Після ретельного перемішування вмісту пробірки, вимірюють його адсорбцію при довжинах хвиль 653 нм, 665 і 670 нм. Як контроль застосовують розчинник, використаний для екстракції.

3.Розраховують концентрації феофітину а (С_pha), феофітину b (С_phb) за такими формулами (концентрація (С) виражена в мкг пігменту на мл екстракту):

С_pha = 22,42 D₆₆₅ – 6,81 D₆₅₃ (мкг/мл);

С_phb = 40,17 D₆₅₃ – 18,58 D₆₆₅ (мкг/мл).

4.За різницею концентрацій хлорофілу а та b, визначених у попередній роботі, та феофітинів вираховують вміст феофітинів а та b у вихідному екстракті.

5.Розраховують вміст феофітинів (А_phа і А_phb) на 1 г сирої речовини рослинної тканини (див. попередню роботу).

6.Дані заносять у таблицю:

7.Висновки.