Состав некоторых питательных сред (из Ahuja, 1983, концентрация вещества указана в миллиграммах на литр)
Вещество | MS | WPM | АСМ* |
Неорганические вещества | |||
NH4N03 | |||
KN03 | - | - | |
CaN034H20 | — | ||
K2S04 | - | ||
CaCL, 2H20 | |||
MgS04 7Н20 | |||
KH2P04 | |||
Na2 EDTA2H20 | 37,25 | 37,30 | - |
FeS04 7 RO 4 2 | 27,85 | 27,85 | - |
Sodium Ferric EDTA | - | - | 30,0 |
MnS044H,0 4 2 | 22,3 | 22,3 | 22,3 |
ZnS04 7H,0 4 2 | 8,6 | 8,6 | 8,6 |
H,B03 | 6,2 | 6,2 | 6,2 |
KJ | 0,83 | - | 0,83 |
Na2Mo04 2H20 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
CuS045H,0 4 2 | 0,025 | 0,25 | 0,025 |
CoCl2 6H20 | 0,025 | - | 0,025 |
Op | ганические вещества | ||
Тиамин НС1 | 0,1 | 1,0 | 0,1 |
Никотиновая кислота | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Пиридоксин НС1 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Глицин | 2,0 | 2,0 | - |
Лизин | - | - | |
Мио-инозитол | |||
Сахароза | 30 000 | 30 000 | 30 000 |
•ACM (Aspen Culture Medium) | — среда для культивирования о< | :ины |
Обязательным условием является присутствие в среде кроме элементов питания гормональных факторов или имитаторов их действия. Известно пять групп соединений, относящихся к категории фитогормонов. Это цитокинины, ауксины, гиббереллины, абсцизовая кислота и этилен. При in vitro было выявлено, что для дедифференциации, превращения специализированной клетки в меристематическую, способную к делению, необходимо участие двух и более гормонов, относящихся к разным группам.
Цитокинины снимают апикальное доминирование и индуцируют развитие пазушных почек, нарушают покой и стимулируют рост покоящихся органов. Они регулируют рост соматических зародышей и формирование растений; необходимы для дифференциации стеблевых почек в культуре каллусных клеток и при регенерации побегов из клеток эксплантов. К группе цитокининов относятся: кинетин, БАП (6-бензиламинопурин), зеатин и др. Дополнительное введение в питательную среду некоторых аминокислот — тирозина, фенил-аланина, а также фосфатов, способствует усилению эффекта цитокининов.
Ауксины влияют на деление, растяжение клеток и дифференцировку. Наиболее выраженный органогенный эффект ауксина — это стимуляция образования корней. К группе ауксинов относятся: ИУК (β-индол-3-уксусная кислота), индолилмасляная кислота (ИМК), нафтилуксусная кислота (НУК), 2,4-D.
Гиббереллины — обширный класс соединений, включающий более 30 веществ. В микроразмножении растений в основном используется гибберелловая кислота (ГК). Экзогенные гиббереллины усиливают рост и вытягивание стебля, листьев. Гиббереллины вносят в питательную среду в основном с целью ускорить рост сформировавшихся почек и получить растения с хорошо развитой надземной частью.
С помощью низких концентраций экзогенных фитогормонов принципиально возможна индукция и стимуляция различных морфогенетических реакций в культуре тканей. При высокой гормональной насыщенности питательной среды наблюдается угнетение общей активности клеток вплоть до их гибели. Эту специфику реакций культивируемых тканей и органов растений на введение фитогормонов следует учитывать при использовании регуляторов роста с целью размножения растений (Н.В. Катаева, Р.Г. Бутен-ко, 1983).
Процессы индукции органогенеза и соматического эмбриогенеза обнаруживают различную зависимость от экзогенных фитогормонов. Если индукция корнеобразования четко связана с увеличением концентрации ауксина в питательной среде и то же самое можно признать в отношении кинетина в побегообразовании, то эмбриогенез в достаточной степени независим от экзогенных фитогормонов. Только первые моменты индукции требуют присутствия гормонов, тогда как дальнейшее развитие зародыша является процессом, не зависящим от экзогенных гормональных факторов. Развивающийся зародыш сам делается источником необходимых для его развития гормонов (Р.Г. Бутенко, 1975).
В целях экономии труда и времени при создании питательных сред готовят исходные запасные растворы. Рецепты запасных растворов для приготовления питательной среды Мурасиге — Скуга приведены ниже (концентрация указана в миллиграммах на литр).
Раствор I NH4N03 33 000 KNO, 38 000 СаС12 2Н20 8 800 MgS04 7 Н20 7 400 КН2Р04 3 400 |
Раствор II
KJ 166
Н,В03 1 240
MnSo4 4H20 4 460
ZnS04 7H20 1 720
Na2Mo04 2H20 50
CuSo4 5H20 5
СоС12 6Н20 5
Раствор III FeSO„ 7H20 5 560 Na2EDTA 2 Н20 7 460 |
Раствор IY
Иноситол 20 000
Никотиновая к-та 100
Пиридоксин НС1 100
Тиамин НС1 100
Глицин 400
При приготовлении раствора IIIFeS04 7H20 и Na2EDTA 2H20 растворяют отдельно в 450 мл дистиллированной воды (подогревая и постоянно помешивая раствор), затем смешивают, устанавливают рН=5,5 и добавляют воды до 1 л. Последовательность приготовления питательной среды с использованием запасных растворов следующая:
• Необходимое количество агара и сахарозы растворяют в 750 мл дважды (для гарантии стерильности) дистиллированной воды. Делают это на водяной бане при повышенной температуре или в автоклаве при пониженном давлении. Конечная концентрация агара должна быть 0,8-1,0%.
• Добавляют по 50 мл запасных растворов I и IIи по 5 мл запасных растворов IIIи IY.
• Количество раствора доводят до 1 л.
Готовая среда охлаждается при комнатной температуре и хранится при 4°С.
Дата добавления: 2017-01-13; просмотров: 695;