Микроразмножению растений

Многие операции по микроразмножению растений должны про­водиться в стерильных условиях. С учетом этого основного требо­вания приобретается оборудование и подбираются помещения. Ла­боратория, в которой будут проводиться работы по клональному микроразмножению, помимо комнат для сотрудников, должна иметь ряд специализированных комнат, в первую очередь комнату для стерилизации питательных сред, инструмента, посуды. Эту комнату оборудуют автоклавами, сушильными шкафами, дистиллято­ром, установленным над раковиной. Следующая комната, в кото­рой готовятся питательные среды, должна быть оборудована техни­ческими и аналитическими весами, рН-метром, водяными банями, вытяжным шкафом. В этой комнате находятся физические и хими­ческие столы, шкафы и полки для размещения реактивов, прибо­ров, посуды.

В связи с большим количеством стеклянной посуды, используе­мой в работе, необходимо предусмотреть моечную комнату с глубо­кой и широкой мойкой и несколькими раковинами с холодной и горячей водой. В лаборатории должна быть комната, оборудован­ная ламинарными боксами. Ламинарбокс представляет собой не­большую камеру, в которую воздух подается под давлением через специальные фильтры. Избыточное давление, создаваемое внутри рабочего объема камеры, препятствует попаданию в камеру неочи­щенного воздуха. В большой лаборатории должна быть климати­ческая камера. В этой камере автоматически регулируется освещен­ность, температура, влажность и фотопериод. Камеру оборудуют стеллажами, на которые устанавливают штативы с пробирками, культуральные колбы. Для выращивания в почве размноженных в культуре органов и тканей регенерантов следует иметь специаль­ную теплицу.

Питательные среды

Эффективность микроразмножения в значительной степени оп­ределяется правильным выбором питательной среды. Для культи­вирования органов и тканей растений чаще применяют твердую агарсодержащую среду, так как в жидкой среде эксплантаты тонут. Любая питательная среда включает следующие группы веществ: макро- и микроэлементы, углеводы, витамины, аминокислоты, ре­гуляторы роста гормональной природы.

При клональном микроразмножении растений наиболее часто используют среду Мурасиге — Скуга (Murashige, Skoog, 1962). От­личительной особенностью этой среды является высокая концент­рация неорганического азота. Уровень солей в среде Мурасиге — Скуга в некоторых случаях оказался неоправданно высоким и ток­сичным для эксплантов. Поэтому для древесных растений некото­рые исследователи отдают предпочтение среде WPM (Woody Plant Medium). Эта среда отличается от среды Мурасиге — Скуга (MS) тем, что содержит меньше азотнокислого аммония, а вместо азот­нокислого калия добавляется азотнокислый кальций (табл. 10.1).

Таблица 10.1